皮膚科免疫熒光技術

1、皮膚科免疫熒光技術皮膚科免疫熒光技術免疫熒光技術概述免疫熒光技術概述n原理原理 將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。n分類分類直接法：將熒光素標記的抗體與標本中的抗原直接結合進而熒光反應。間接法：將熒光素標記的抗抗體與相應的特異性抗體抗原復合物反應，形成抗原-抗體-抗抗體復合物體系，進檢測的一種特異性熒光反應。免疫熒光原理示意圖免疫熒光原理示意圖臨床常用熒光素染料臨床常用熒光素染料異硫氰酸熒光素（fitc）吸=490-495nm 、發(fā)=520-530nm、黃綠色熒光 四乙基羅丹明（rib200）吸=570n

2、m、 發(fā)=595600nm、呈橘紅色熒光四甲基異硫氰酸羅丹明（tritc）吸=550nm、 發(fā)=620nm、呈橙紅色熒光皮膚皮膚直接直接免疫熒光檢測免疫熒光檢測n適應癥：適應癥：n非感染性大皰性皮膚病非感染性大皰性皮膚病n天皰瘡、類天皰瘡、皰疹樣皮炎、線狀天皰瘡、類天皰瘡、皰疹樣皮炎、線狀igaiga大皰大皰性皮病、獲得性大皰性表皮松解等性皮病、獲得性大皰性表皮松解等n結綈組織?。喝缂t斑狼瘡等結綈組織?。喝缂t斑狼瘡等n各種血管炎各種血管炎n皮膚腫瘤皮膚腫瘤n某些感染性皮膚病某些感染性皮膚病皮膚皮膚間接間接免疫熒光檢測免疫熒光檢測適應癥：適應癥：血清中各種抗微生物抗體測定血清中各種抗微生物抗體測

3、定n如：梅毒螺旋體、支原體、衣原體、立克次體、如：梅毒螺旋體、支原體、衣原體、立克次體、皰疹病毒等皰疹病毒等血清中各種自身抗體的測定血清中各種自身抗體的測定n系統(tǒng)性疾?。喝缂t斑狼瘡、皮肌炎、硬皮病等系統(tǒng)性疾?。喝缂t斑狼瘡、皮肌炎、硬皮病等n大皰性皮膚病：如天皰瘡抗體等大皰性皮膚?。喝缣彀挴徔贵w等n糖尿?。喝缈挂葝u細胞抗體等糖尿?。喝缈挂葝u細胞抗體等操作方法及流程操作方法及流程放入生理鹽水放入生理鹽水送檢送檢手術取材手術取材外觀正常未受外觀正常未受累皮膚累皮膚直徑直徑1-2mm帶皰帶皰皮損皮損（米粒大小水皰）（米粒大小水皰）直接熒光直接熒光患者標本采集患者標本采集操作方法及流程操作方法及流程n冰

4、凍切片、染色、鏡檢冰凍切片、染色、鏡檢組織修材，成組織修材，成適合冰凍包埋適合冰凍包埋塊的大小塊的大小冰凍切片冰凍切片抗原與熒光抗抗原與熒光抗體結合體結合熒光顯微鏡下熒光顯微鏡下鏡檢及成像，鏡檢及成像，打印報告打印報告操作方法及流程操作方法及流程n間接免疫熒光染色步驟間接免疫熒光染色步驟操作方法及流程操作方法及流程實驗室操作圖片實驗室操作圖片直接熒光組織修材直接熒光組織修材冰凍切片冰凍切片實驗室操作圖片實驗室操作圖片熒光染色熒光染色水浴箱孵育水浴箱孵育實驗室操作圖片實驗室操作圖片熒光顯微鏡鏡檢熒光顯微鏡鏡檢免疫熒光鏡下天觀免疫熒光鏡下天觀（天皰瘡患者標本）（天皰瘡患者標本）igg抗體抗體鏡下描

5、述： 鏡下可見熒光抗體igg于表皮棘細胞間呈網狀沉積，熒光陽性。免疫熒光鏡下天觀免疫熒光鏡下天觀（類天皰瘡患者標本）（類天皰瘡患者標本）c3補體補體熒光鏡下： 鏡下可見熒光標記的c3補體于表皮基底膜帶呈線狀沉積，熒光陽性。免疫熒光在大皰性皮膚病中的意義免疫熒光在大皰性皮膚病中的意義大皰性皮膚病大皰性皮膚病沉積部位沉積部位熒光抗體熒光抗體沉積形狀沉積形狀靶抗原靶抗原尋常型天皰瘡尋常型天皰瘡細胞間細胞間igg、c3（少數有（少數有igm和和iga）網狀網狀dsg3可有可有dsg1增殖型天皰瘡增殖型天皰瘡細胞間細胞間同上同上網狀網狀dsg3可有可有dsg1落葉型天皰瘡落葉型天皰瘡細胞間細胞間igg或

6、或igg、c3網狀網狀dsg1副腫瘤性天皰瘡副腫瘤性天皰瘡細胞間（少數細胞間和表皮下）細胞間（少數細胞間和表皮下）igg或或igg、c3網狀或線狀網狀或線狀少數少數bp230iga天皰瘡天皰瘡細胞間細胞間iga（偶有（偶有c3、igg和和igm）網狀網狀-皰疹樣天皰瘡皰疹樣天皰瘡細胞間細胞間igg、c3網狀網狀-大皰性類天皰瘡大皰性類天皰瘡基底膜帶基底膜帶igg、c3或僅有或僅有c3（少數有（少數有igm和和iga）鹽裂后）鹽裂后igg在表在表皮側皮側線狀線狀bp180、bp230瘢痕性類天皰瘡瘢痕性類天皰瘡基底膜帶基底膜帶igg、c3（25可有可有igm或或iga）線狀線狀-妊娠皰疹妊娠皰疹基底膜帶基底膜帶c3（10-20可伴有可伴有igg）線狀線狀可有可有bp180皰疹樣皮炎皰疹樣皮炎90真皮乳頭，少數基底膜帶真皮乳頭，少數基底膜帶iga、c3（偶伴有（偶伴有igg和和igm）乳頭處顆粒狀，乳頭處顆粒狀，少數線狀少數線狀-線狀線狀iga大皰性皮病大皰性皮病基底膜帶基底膜帶iga也可伴有也可伴有c3、igg和和igm線狀線狀可有可有bp180獲得性大皰性表皮松解獲得性大皰性表皮松解基底膜帶基底膜帶igg、c3（