第2章抗原抗體及其結(jié)合反應(yīng)

1、第二章 抗原和抗體及其結(jié)合反應(yīng)醫(yī)學技術(shù)學院免疫教研室醫(yī)學技術(shù)學院免疫教研室 教 學 目 的l掌握：抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合反應(yīng)特點l熟悉：影響抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的因素第一節(jié) 抗原l一、抗原的特性l免疫原性、免疫反應(yīng)性l特異性l二、用于免疫測定的抗原分類l天然、合成多肽、基因重組第二節(jié) 抗體l一、抗體的特性l特異性、多樣性、免疫原性l二、用于免疫測定的抗體分類l多克隆、單克隆、基因工程l三、抗體產(chǎn)生的規(guī)律l初次應(yīng)答、再次應(yīng)答第三節(jié) 抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的原理抗原抗體反應(yīng):指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)?？乖砦慌c抗體高變區(qū)間的結(jié)構(gòu)互補抗原表位與抗體高變區(qū)的緊密接觸抗原抗體之間的結(jié)合力親

2、水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體物質(zhì)基礎(chǔ)一、抗原抗體結(jié)合力靜電引力范德華引力氫鍵疏水作用力抗原抗體結(jié)合力示意圖.靜電引力（electrostatic forces）抗原和抗體分子帶有相反電荷的氨基和羧基基團之間相互吸引的力。又稱為庫倫引力2.范德華引力（vonder waals forces） 抗原和抗體相互接近時，由于分子的極化作用而出現(xiàn)的引力。 范德華引力靜電引力3.氫鍵結(jié)合力供氫體上的氫原子與受氫體原子間的引力供氫體：羧基、氨基和羥基 受氫體：羧基氧、羧基碳和肽鍵4.疏水作用力（疏水鍵） 兩個疏水基團在水溶液中相接觸時，由于對水分子排斥而趨向聚集力。二、抗原抗體的親和力和親合力抗原抗體親和力示意圖抗

3、原抗體親合力示意圖抗原抗體親合力示意圖三、液相中抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)抗原抗體復合物 (疏水膠體)可見反應(yīng)電解質(zhì) 抗原 (親水膠體)抗體四、固相表面抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)1. 抗原抗體結(jié)合反應(yīng)時間2. 反應(yīng)體積3. 解離速度4. 固相化抗原或抗體的構(gòu)象第四節(jié) 抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點特異性 可逆性比例性 階段性 親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體示意圖親水膠體疏水膠體可見反應(yīng)一、特異性抗原抗體反應(yīng)特異性示意圖特異性示意圖特異性示意圖交叉反應(yīng)（交叉反應(yīng)（cross reactionscross reactions）抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖二、可逆性可逆性：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復合物后，在一定條件下

4、又可解離為游離抗原與抗體的特性影響因素： 抗體對相應(yīng)抗原的親合力 環(huán)境因素對復合物的影響【ag】+【ab】 【ag-ab】 解離后抗原抗體仍保持原有特性。 一定條件：低ph、高濃度鹽等。ab1比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系最適比： 沉淀物最多時的抗原抗體的濃度比或量比等價帶: 抗原與抗體分子比例合適范圍前 帶： 抗體過量后 帶： 抗原過量三、比例性 抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖四、階 段 性第一階段：特異性結(jié)合階段第二階段：反應(yīng)可見階段第五節(jié) 影響抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的因素抗原抗體本身因素反應(yīng)基質(zhì)因素 實驗環(huán)境因素一、抗原抗體本身因素抗原:理化性狀、表位種類

5、和數(shù)目抗體:來源、特異性、親和性、效價來源r型ab：等價帶寬， 易出現(xiàn)可見反應(yīng)。h型ab：等價帶窄，易出現(xiàn)前帶或后帶mcab: 不宜用于凝集和沉淀反應(yīng)。濃度：是相對ag而言，比例要合適，故實驗前需滴定，以求最適ag與ab比例。特異性與親和力：關(guān)鍵因素，選擇特異性與親 和力高的ab。二、反應(yīng)基質(zhì)因素非特異性因素，如蛋白、鹽、藥物等三、實驗環(huán)境因素電解質(zhì): 0.85%生理鹽水或緩沖液酸堿度: ph 68溫 度: 37最適(一）電解質(zhì)作用：中和膠體表面電荷，破壞水化層，使ag-ab聚集。常用：0.85%nacl溶液，緩沖液、ca2+、mg2+等。（二）酸堿度 抗原抗體反應(yīng)中一般以ph6-8為宜，有補

6、體參與的反應(yīng)最適ph為7.2-7.4 酸凝集：當ph為3左右時，接近細菌ag的等電點，可出現(xiàn)非特異性凝集。 （三）溫度 最適溫度為37或室溫18-25為宜。若溫度高于56，可導致已結(jié)合了的抗原抗體復合物解離，甚至分子變性。 抗原抗體反應(yīng)類型反應(yīng)類型實驗技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應(yīng)直接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗同上抗球蛋白試驗同上沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗觀察沉淀，檢測濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補體參與的反應(yīng)補體溶血試驗觀察測定溶血現(xiàn)象補體結(jié)合試驗同上反應(yīng)類型實驗技術(shù)結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗檢測病毒感染性毒素中和試驗檢測外毒素毒性標記免疫反應(yīng)熒光免疫技術(shù)檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測放射性強度酶免疫技術(shù)檢測酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)檢測發(fā)光強度金免疫技術(shù)檢測金顆粒沉淀標記免疫技術(shù) 用熒光物質(zhì)、放射性核素、酶或化學發(fā)光物質(zhì)等標記抗原或抗體，進行抗原抗體反應(yīng)后，通過檢測標記物對抗原或抗體進行定性、定位或定量分析思 考 題1抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的原理？ 2抗原抗體的結(jié)合力有哪些？3抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特