槐花米中蘆丁和懈皮素的制備

1、槐花米中蕓香苷和懈皮素的提取姓名：邱斌 學(xué)號(hào)：10151802241. 實(shí)驗(yàn)原理1.1 背景介紹蕓香苷是一種廣泛存在于植物體內(nèi)的黃酮類的化合物，在自然界的花、葉、果實(shí)等有廣泛的存在，在槐米、羅布麻等植物中的含量比較高。槲皮素可以用來作為中藥制劑，能夠有效的降低毛細(xì)血管的通透性，抗病毒、清除氧自由基等功能。具有防止動(dòng)脈硬化和增強(qiáng)人體毛細(xì)血管的重要功能，在臨床上常常被用來作為治療心血管疾病的輔助藥物。同時(shí)由于它是一種植物提取物，它對(duì)于人體沒有毒性，因此在食品工業(yè)中還被用來作為抗氧化劑和天然黃色素。1。槐花米中蕓香苷的含量較高，達(dá)12一20，可作為大量提取蕓香苷的原料。2 懈皮素作為一種黃酮類的物質(zhì)

2、，在草本植物和食物中有廣泛的分布。同時(shí)槲皮素作為一種比較強(qiáng)的植物性抗氧化劑，能夠防止動(dòng)脈硬化等功能，在治療冠心病等心腦血管疾病中具有重要的作用。同時(shí)還能夠清除自由基，保護(hù)心肌、降血壓、降血脂以及抗菌消炎等作用，對(duì)于腫瘤細(xì)胞等均有良好的抑制效果。2懈皮素可以直接從蕓香苷中提取出來。 1.2 提取方法介紹 在槲皮素和蕓香苷的提取中已經(jīng)出現(xiàn)了多種提取方法，而且其方法也越來越先進(jìn)，對(duì)槲皮素的普及具有重要的作用。(熱)堿提取酸沉淀法4、熱水提冷析出的方法4、超聲輻射法5-6、微波輔助提取法拉7-8等。這次實(shí)驗(yàn)我們使用醇提取法。醇提取法利用蕓香苷在已醇中溶解度小，在熱乙醇中溶解度大.以及在熱水中溶解度大.

3、在冷水中溶解度小的性質(zhì)分高。蕓香苷用溶劑加熟溶解后，趁熟抽濾，濾液放冷后能析出而達(dá)到分高的目的(如不純可再重夏操作進(jìn)行分高)。也可采用醇溶水純法進(jìn)行精制。1.3蕓香苷和懈皮素的理化性質(zhì)蕓香苷為淺黃色針狀結(jié)晶(水)熔點(diǎn): 176。c-178。c, a23d+13.87。(乙醇)，a23d-39.43。(吡啶)。1g蘆丁溶于7ml甲醇，8000ml水，200ml沸水。在空氣中逐漸變深，把蘆j加熱至185-192。c時(shí)，變成棕色膠狀體，約在215c時(shí)分解;蘆丁在冷水中極微溶(1:10000)，在沸水中微溶(1:200)，在沸乙醇中略溶(1:60) 在堿性溶液中易溶，蘆丁

4、可溶于甲醇及乙丙醇，在氯仿、乙醚和苯中不溶。懈皮素為黃色粉末（甲醇），其二水合物為黃色針狀結(jié)晶。在95-97成為無水物，熔點(diǎn)為313-314（分解）。溶于熱乙醇（1：23）、冷乙醇（1：300），可溶于甲醇、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中，幾乎不溶于水。其堿水溶液呈黃色，乙醇溶液味很酷。紫外燈下顯現(xiàn)藍(lán)色熒光，加入alcl3乙醇溶液熒光變?yōu)辄S綠色，鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯紅色。槲皮素屬黃酮醇類化合物。黃酮類化合物多以苷類形式存在，由于所連接的糖的類型和位置不同，形成多種黃酮苷。組成黃酮苷的糖類多為單糖。黃酮醇水溶性較差，而其苷類則較易溶于水。2. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備2.1 實(shí)驗(yàn)試劑 30

5、g槐花米、95%乙醇、75%乙醇、50%乙醇、30-60 oc石油醚、丙酮、2%濃硫酸、飽和石灰水、15% hcl。2.2 實(shí)驗(yàn)裝置、儀器磁力加熱攪拌器、加熱裝置、100ml錐形瓶、250ml三頸燒瓶、500ml三頸燒瓶、50ml燒瓶、250ml燒瓶、100ml量筒、天平、研體、濾紙、移液管、減壓過濾裝置、布氏漏斗、抽濾瓶、砂芯漏斗等2.3 裝置簡圖3. 實(shí)驗(yàn)詳細(xì)步驟3.1 蕓香苷的制備稱重干燥洗滌抽濾石油醚、丙酮、95%乙醇各15ml黃色沉淀放置12h合并濃縮至40ml第二次提取液加熱回流1h100ml75%乙醇濾渣第一次提取液加熱回流1h100ml75%乙醇30g槐花米 蕓香苷粗品：4.0

6、2g3.2 蕓香苷精品的制備250ml水黃色晶體放置1h趁熱過濾蕓香苷粗品抽濾、干燥、稱重加熱溶解蕓香苷精品：1.19g3.3 懈皮素的制備1.0g蕓香苷精品稱重干燥抽濾放置1-2h趁熱過濾加熱溶解150ml50%乙醇懈皮素粗品懈皮素粗品洗滌2次抽濾加熱回流1h2%濃硫酸150ml懈皮素精品0.19g4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析4.1 現(xiàn)象蕓香苷精品呈黃色，懈皮素精品呈綠色?；被滓后w為咖啡色懸濁液，有甘苦的氣味，沸騰時(shí)不斷有小泡冒出。在制備蕓香苷時(shí)，隨著蒸餾時(shí)間變長，產(chǎn)物的顏色加深，經(jīng)過加熱過濾，趁熱溶解得到黃色晶體。得到蕓香苷粗品4.02g，蕓香苷精品1.19g，懈皮素精品0.19g。4.2收率及熔

7、點(diǎn)蕓香苷收率為（1.19g/4.02g）*100%=29.60%懈皮素收率為（0.19g/1.19g）*100%=15.96% 蕓香苷的熔點(diǎn)為176.8-184.04.3紅外譜圖蕓香苷的紅外譜圖如下懈皮素的紅外譜圖如下4.3.1對(duì)提取蕓香苷精品所得產(chǎn)品的紅外光譜進(jìn)行分析，在波長1645nm-1349nm之間有四個(gè)峰，在800nm-680nm之間有吸收峰，符合芳香化合物特征;在3453nm處有尖銳吸收，符合酚類化合物特征;在1645nm有強(qiáng)吸收，說明含有c=0鍵，1300m-1000nm之間.有5個(gè)吸收峰說明含有5個(gè)不同的c-0鍵。整體分析，符合黃酮類化合物結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。4.3.2對(duì)提取槲皮素精品所

8、得產(chǎn)品的紅外光譜進(jìn)行分析，在波長1624nm-1384nm.之間有四個(gè)峰，在800nm-680nm之間有吸收峰，符合芳香化合物特征;在3462nm左右有尖銳吸收，符合酚類化合物特征;在1624nm有強(qiáng)吸收，說明含有c=0鍵。整體分析符合黃酮類化合物特點(diǎn)。4.3.3蕓香苷和槲皮素都是黃酮類的化合物，具有黃酮類化合物的吸收峰。但是兩者在化學(xué)結(jié).構(gòu)上存在比較大的不同，蕓香苷是在槲皮素c3位上的蕓香糖和羥基相連所形成的黃酮苷。由于糖基的出現(xiàn)使紅外光譜圖中形成了特征峰的峰位、峰形以及不同的強(qiáng)度，由于羥基個(gè)數(shù)的不同，在紅外光譜圖中可以看到峰強(qiáng)弱的差異。蕓香苷在3453nm處的羥基伸縮振動(dòng)吸收峰寬比較強(qiáng)，說

9、明了其結(jié)構(gòu)中的羥基數(shù)量較多。在1645nm處蕓香苷的振動(dòng)吸收峰和槲皮素相比向低波數(shù)移動(dòng)了21個(gè)單位，槲皮素在1509nm處苯環(huán)骨架的振動(dòng)吸收峰強(qiáng)度比蕓香苷分子要大。通過以上差別可以辨別出蕓香苷和槲皮素。5.實(shí)驗(yàn)總結(jié)及思考5.1注意事項(xiàng)5.1.1 在提取前應(yīng)將槐花米粉碎，使蘆丁易于被熱水溶出。粉碎不可過細(xì)，以免過濾時(shí)速度過慢5.1.2 加入飽和石灰水既可以使蕓香苷溶于堿溶液中，達(dá)到提取蕓香苷的目的，又可以除去槐花米中的大量多糖黏液質(zhì)。5.1.3 濃鹽酸具有刺激性。應(yīng)在通風(fēng)處使用;無水乙醇為易燃品，應(yīng)注意防火安全。5.1.4 蕓香苷分子中因含有鄰二酚羥基，性質(zhì)不太穩(wěn)定;暴露在空氣中能緩緩氧化變?yōu)榘?/p>

10、褐色，在堿性條件下更容易被氧化分解。硼砂因能與蕓香苷鄰二酚羥基結(jié)合，起保護(hù)鄰二酚羥基不被氧化破壞的作用，實(shí)驗(yàn)證明，提取時(shí)加入硼砂，產(chǎn)品質(zhì)量要好些。5.1.5 為避免在提取過程中黃酮苷類化合物發(fā)生分解，故用沸水事先破壞其酶的活性，故從槐米中提取蘆丁時(shí)開始不能加冷水慢慢煮沸，而要直接加沸水提取。5.2產(chǎn)率高低的原因ph值過低會(huì)使蕓香昔與酸形成銻鹽而增加水溶性，降低收率。放置時(shí)間如延長至10h以上，可增加收率。不能長時(shí)間煮沸，蕓香苷會(huì)分解，降低收率。從槐米中提取蘆丁時(shí)開始不能加冷水慢慢煮沸，而要直接加沸水提取。否則蕓香苷會(huì)分解，收率降低5.3思考題5.3.1 試比較醇提取法與堿提取法的異同點(diǎn)。說明這

11、兩種提取法是依據(jù)蕓香苷的什么性質(zhì)?答：醇提取法利用蕓香苷溶于熱乙醇的性質(zhì)，堿提取法利用蕓香苷分子中的酚羥基的酸性用堿液煮沸提取槐花米，將溶于堿液的蕓香苷酸析。5.3.2 本實(shí)驗(yàn)在制備槲皮素時(shí)，是用什么方法促使糖苷鍵斷裂的?還可用其他什么方法?本實(shí)驗(yàn)采用稀硫酸水解蕓香苷的方法使糖苷鍵斷裂得到槲皮素。由于蕓香苷中存在a糖苷鍵,即水解后可形成酚羥基,因此也可采用堿水解的方法,可以利用氫氧化鈉水解蕓香苷再還原得到槲皮素。5.3.3 如何證明蘆丁分子中只含有葡萄糖和鼠李糖?答:運(yùn)用紙層析法與葡萄糖鼠李糖的標(biāo)準(zhǔn)品比較，根據(jù)層析根據(jù)結(jié)果判斷5.3.4 根據(jù)蘆丁t的性質(zhì),還可采用何種方法進(jìn)行提取?試設(shè)計(jì)自槐花

12、米中提取蘆丁的另一種方法，并說明方法原理。答:蘆丁還可采用水提法進(jìn)行提取，利用了蘆丁可溶于熱水，不溶于冷水的性質(zhì)。5.3.5 蕓香苷的水解產(chǎn)物是什么?答:蕓香苷的水解產(chǎn)物是槲皮素和蘆丁糖5.3.6 如何鑒定蕓香苷？取蘆丁適量，加乙醇使溶解，分成三份供下述試驗(yàn)用:鹽酸鎂粉試驗(yàn):取樣品液適量，加2滴濃hcl、再酌加少許鎂粉，即產(chǎn)生劇烈的反應(yīng)，并逐漸出現(xiàn)紅色至深紅色。a-萘酚-濃硫酸反應(yīng):取樣品液適量，加等體積的10%a-萘酚乙醇溶液，搖勻，沿管壁緩加濃硫酸，注意觀察兩液界面的顏色。6.參考文獻(xiàn)及教材1 甄真.槐米中蕓香苷及槲皮素的提取分離與檢識(shí)j.現(xiàn)代養(yǎng)b,2014,(7):242-242.2 宗

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