核酸的分離提取

1、1植物分子生物學(xué)實驗技術(shù)植物分子生物學(xué)實驗技術(shù)顏顏 澤澤 洪洪2主要內(nèi)容主要內(nèi)容第一部分第一部分 核酸的分離制備核酸的分離制備第二部分第二部分 pcr技術(shù)技術(shù)第三部分第三部分 主要分子標(biāo)記主要分子標(biāo)記第四部分第四部分 基因克隆基因克隆3（美）dveksler gs and dieffenbach cw. 黃培堂 俞煒源 陳添彌等譯 現(xiàn)代生物技術(shù)譯從 pcr技術(shù)實驗指南技術(shù)實驗指南 科學(xué)出版社（英） clark ms 主編 顧紅雅 瞿禮佳 主譯 植物分子生物學(xué)實驗手冊植物分子生物學(xué)實驗手冊 高等教育出版社 施普林格出版社鄭成木 主編 植物分子標(biāo)記原理與方法植物分子標(biāo)記原理與方法 湖南科學(xué)技術(shù)出版

2、社brown ta. 魏群等譯 國外優(yōu)秀生命科學(xué)教材譯從 基因克隆和基因克隆和dna分析分析 高等教育出版社參考書目：參考書目：4第一部分：核酸的分離制備第一部分：核酸的分離制備abc?5第一部分：核酸的分離制備第一部分：核酸的分離制備dna dna 提取是一切分子生物學(xué)研究最基礎(chǔ)的技術(shù)，提取是一切分子生物學(xué)研究最基礎(chǔ)的技術(shù)，高質(zhì)量的高質(zhì)量的dnadna是用于是用于pcrpcr和酶和酶切分析等系列后續(xù)操作的重要保證切分析等系列后續(xù)操作的重要保證發(fā)展了多種發(fā)展了多種dna dna 提取方法提取方法, ,可從可從植物葉片、愈傷組織、組培苗、果實、韌皮部植物葉片、愈傷組織、組培苗、果實、韌皮部等等多

3、種組織器官中提取多種組織器官中提取dnadna；但不同植物、同種植物材料的不同來源、部但不同植物、同種植物材料的不同來源、部位、形態(tài)以及不同化學(xué)成分、組織結(jié)構(gòu)特點位、形態(tài)以及不同化學(xué)成分、組織結(jié)構(gòu)特點差異差異, ,導(dǎo)致導(dǎo)致dnadna 提取提取時需要選時需要選擇不同的方法或作一些特殊處理擇不同的方法或作一些特殊處理 從富含從富含多糖、多酚、單寧、色素多糖、多酚、單寧、色素及其他次生代謝物質(zhì)的木本植物中提取及其他次生代謝物質(zhì)的木本植物中提取dnadna的的方法難度就相對大于大多數(shù)禾谷類及蔬菜類植物方法難度就相對大于大多數(shù)禾谷類及蔬菜類植物（1 1）多酚被氧化成棕褐色）多酚被氧化成棕褐色（2 2）

4、多糖、單寧等物質(zhì)與）多糖、單寧等物質(zhì)與dna dna 會結(jié)合成粘稠的膠狀物會結(jié)合成粘稠的膠狀物, ,獲得的獲得的dna dna 常出現(xiàn)產(chǎn)常出現(xiàn)產(chǎn)量低、質(zhì)量差、易降解，影響了量低、質(zhì)量差、易降解，影響了dna dna 質(zhì)量和純度，不能被限制性內(nèi)切酶質(zhì)量和純度，不能被限制性內(nèi)切酶酶切，嚴(yán)重的甚至不能作為模板進(jìn)行酶切，嚴(yán)重的甚至不能作為模板進(jìn)行pcr pcr 擴增擴增1. dna1. dna在分子生物學(xué)研究中的重要性在分子生物學(xué)研究中的重要性62. 2. 提取提取dnadna應(yīng)滿足的基本原則應(yīng)滿足的基本原則不同的研究對不同的研究對dnadna的要求不一致，但一般應(yīng)滿足的要求不一致，但一般應(yīng)滿足: :

5、 (1) (1) 排除蛋白、糖類和脂類等物質(zhì)的污染，排除蛋白、糖類和脂類等物質(zhì)的污染，dnadna純度應(yīng)滿足下游操作需要純度應(yīng)滿足下游操作需要 用于用于rflprflp、aflpaflp應(yīng)滿足酶切要求應(yīng)滿足酶切要求 用于用于pcrpcr的不含的不含pcrpcr的干擾甚至抑制物的干擾甚至抑制物 (2) (2) 所得所得dnadna應(yīng)當(dāng)完整應(yīng)當(dāng)完整 電泳檢測得到清晰、完整、可重復(fù)、無降解的條帶電泳檢測得到清晰、完整、可重復(fù)、無降解的條帶 保證保證dnadna一級結(jié)構(gòu)的完整一級結(jié)構(gòu)的完整 (3) (3) 足夠量的足夠量的dnadna 有的實驗要求量多（標(biāo)記）有的實驗要求量多（標(biāo)記）7(1) (1)

6、破壞（消化）細(xì)胞壁、釋放內(nèi)容物破壞（消化）細(xì)胞壁、釋放內(nèi)容物 在破壁時也會剪切在破壁時也會剪切dnadna，在完整性和產(chǎn)量間折衷考慮，在完整性和產(chǎn)量間折衷考慮 分離總分離總dnadna破壁方法破壁方法 液氮中快速冷凍、研磨成細(xì)粉末液氮中快速冷凍、研磨成細(xì)粉末 分離核分離核dnadna或細(xì)胞器或細(xì)胞器dnadna破壁方法破壁方法 更溫和的方法、以免過早破壞內(nèi)膜系統(tǒng)、含滲透劑的緩沖液更溫和的方法、以免過早破壞內(nèi)膜系統(tǒng)、含滲透劑的緩沖液4 4o oc c勻漿勻漿 (2) (2) 破壞細(xì)胞膜使破壞細(xì)胞膜使dnadna釋放到提取緩沖液中釋放到提取緩沖液中 通?？客ǔ？縮dssds或或ctabctab去污

7、劑來完成，保護(hù)去污劑來完成，保護(hù)dnadna受核酸內(nèi)源酶降解受核酸內(nèi)源酶降解 緩沖液通常含緩沖液通常含edtaedta，可螯合大多數(shù)核酸酶所需要的輔助因子，可螯合大多數(shù)核酸酶所需要的輔助因子- -鎂離子鎂離子3. 3. 基本原理基本原理8（1）植物材料的采集及前處理）植物材料的采集及前處理 盡可能使組織材料保持水分而保鮮盡可能使組織材料保持水分而保鮮（用濕紗布包裹（用濕紗布包裹, ,放置于密閉的冰盒等）放置于密閉的冰盒等） 野外遠(yuǎn)距離采集樣本時，盡可能采用冷凍保存野外遠(yuǎn)距離采集樣本時，盡可能采用冷凍保存( (如放置于液氮中如放置于液氮中) ) 不具備冷凍條件時不具備冷凍條件時 無水無水caso

8、4 caso4 的瓶子分別保存使其迅速干燥，可將材料的瓶子分別保存使其迅速干燥，可將材料 保存數(shù)月，返回后盡快提取保存數(shù)月，返回后盡快提取dna dna 對具有大量次生代謝物對具有大量次生代謝物( (如丹寧、酚類、醌類等如丹寧、酚類、醌類等) ) 的植物材料的植物材料, ,盡可能采集幼嫩盡可能采集幼嫩組織，冷凍保存、短時間內(nèi)提取組織，冷凍保存、短時間內(nèi)提取dnadna 植物組織化學(xué)保存法植物組織化學(xué)保存法 乙醇、丙二醇處理法乙醇、丙二醇處理法 導(dǎo)致導(dǎo)致dnadna劇烈降解（不推薦）劇烈降解（不推薦） 樣品長期保存樣品長期保存 液氮處理后貯存在液氮處理后貯存在- 80- 80冰箱或直接儲放于液氮

9、中冰箱或直接儲放于液氮中 在與提取緩沖液接觸前防止冰凍樣品在空氣中融化導(dǎo)致酚類易被氧化在與提取緩沖液接觸前防止冰凍樣品在空氣中融化導(dǎo)致酚類易被氧化 實驗室發(fā)苗、田間取葉片（清洗去除灰塵、泥土以及菌孢子等）實驗室發(fā)苗、田間取葉片（清洗去除灰塵、泥土以及菌孢子等） 饑餓處理減少淀粉含量、遮光處理產(chǎn)生黃化苗饑餓處理減少淀粉含量、遮光處理產(chǎn)生黃化苗4. 4. 基本步驟基本步驟9（2）組織（細(xì)胞）破碎）組織（細(xì)胞）破碎 物理方法 溶漲和自溶; 化學(xué)方法 生物酶降解 液氮快速冷凍處理后研磨（推薦）或在提取緩沖液中研磨（不推薦） （3）釋放）釋放dna 釋放dna到ctab或sds類去污劑中、65oc保溫處

10、理（4）純化和濃縮：去除殘渣、沉淀）純化和濃縮：去除殘渣、沉淀dna 釋放出的dna中含有大量的rna、蛋白質(zhì)、多糖、丹寧和色素等雜質(zhì) 需用氯仿、苯酚處理后變性、沉淀除去，rna可用rnase除去。 通常采用4oc離心的方法，產(chǎn)生分層，去掉植物殘渣、留上清液部分 沉淀通常采用異丙醇（1 volume)、酒精（2 volume) 等（5）洗滌）洗滌 去掉部分色素和鹽等，通常采用70%酒精和100%無水乙醇4. 4. 基本步驟基本步驟10（6） dna純度和濃度檢測純度和濃度檢測 0.8%瓊脂糖凝膠電泳或紫外分光光度計檢測 瓊脂糖凝膠電泳法瓊脂糖凝膠電泳法(常用）常用） dna樣品在紫外線照射下發(fā)

11、出的紅色熒光強度與dna的含量成正比 使用標(biāo)準(zhǔn)濃度的dna樣品作對照，可以估計出被測dna的濃度 紫外分光光度計檢測紫外分光光度計檢測 dna在260nm處有一個明顯的吸收峰估計濃度 在a260 1od相當(dāng)于雙鏈dna濃度50 g/ml 根據(jù)a260/a280比值估計dna純度 純dna 的a260/a280=1.80.1， rna的比值為2.0左右。 1.8 可能有rna未除去 0.7 mol/l nacl) ，可與蛋白質(zhì)和酸性多聚糖以外的多聚糖形成復(fù)合物，不能沉淀核酸不能沉淀核酸 因此，ctab可從大量產(chǎn)生黏多糖的植物以及某些革蘭氏陰性菌（包括大腸桿菌的某些株）制備純化的dna，這種去污劑

12、加入調(diào)節(jié)至高離子強度的細(xì)菌和細(xì)胞裂解液中( 0.7 mol/l nacl)，經(jīng)過連續(xù)的酚/氯仿有機溶劑抽提，去除ctab/黏多糖黏多糖/蛋白蛋白質(zhì)質(zhì)復(fù)合體，異丙醇/無水乙醇沉淀上清即可將dna分離出來 ctab還有提高提高dna互補鏈復(fù)性速率互補鏈復(fù)性速率及穩(wěn)定已形成的穩(wěn)定已形成的dna雙螺旋的作用雙螺旋的作用 ctab法的主要特點是應(yīng)用范圍較廣應(yīng)用范圍較廣25ctab法法 組組 分分 用量用量終濃度終濃度ctab 20 g 2 % (w/v)1 mol/l tris-hcl, ph 8.0100 ml0.1 mol/l0.5 mol/l edta, ph 8.0200 ml0.1 mol/l

13、nacl 81.8 g 1.4 mol/l-巰基乙醇巰基乙醇 (用前加）用前加） 0.2% (v/v)2ctab 緩沖液（緩沖液（1000 ml)8. 8. 常用植物總常用植物總dnadna提取方法及主要原理提取方法及主要原理26（1）2g 幼嫩植物組織加液氮并迅速研磨成細(xì)粉，置入50ml離心管中繳入預(yù)熱治65的10ml的2ctab緩沖液，輕搖混勻（2）65水浴2h，輕搖混勻（3） 冷卻至室溫，加入等體積的氯仿-異戊醇（24：1），輕輕上下顛倒混勻直至上清液呈牛奶狀（4）4000 rpm 離心10min（5）取上清液，加入等體積冰冷的異丙醇沉淀，挑出dna（6）用70%和100%乙醇各洗一次（

14、7）將dna溶于適量的te（ph 8.0)中，加入rna酶（終濃度100g/l）（8）電泳檢測或用紫外分光光度計檢測dna的濃度和質(zhì)量ctab法提取植物法提取植物dna步驟步驟8. 8. 常用植物總常用植物總dnadna提取方法及主要原理提取方法及主要原理278. 8. 常用植物總常用植物總dnadna提取方法及主要原理提取方法及主要原理sds法及主要原理法及主要原理sds-sodium lauryl sulfate/十二烷基硫酸鈉結(jié)構(gòu)式：ch3(ch2)11oso3na；分子量：288.39， 白色至微黃色粉末，微有特殊氣味 一種陰離子去垢劑, 在高溫在高溫(55-65) 時裂解細(xì)胞時裂解細(xì)

15、胞，使染色體離析、蛋白變性，形形成成sds /蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)/多糖復(fù)合物多糖復(fù)合物，釋放出核酸釋放出核酸，提高鹽(kch3cooh 或nh4ch3cooh) 濃度并降低溫度(冰浴)，使 sds - 蛋白質(zhì)復(fù)合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}形式,使蛋白質(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀更加完全，離心后除去沉淀；上清液中的 dna 用酚/ 氯仿抽提，乙醇沉淀水相中的dna sds 法操作簡單，溫和，可提取到高分子量的dna ,但產(chǎn)物含糖類雜質(zhì)較多含糖類雜質(zhì)較多28sds法法組組 分分 用量用量終濃度終濃度sds 20 g 2 % (w/v)1 mol/l tris-hcl, ph 8.5100 ml0.1 mol/l0.5

16、 mol/l edta, ph 8.0100 ml0.05 mol/lnacl 5.84 g 0.1 mol/l蛋白酶蛋白酶k 0.05 mg/mlsds緩沖液（緩沖液（1000 ml)sharp et al. (1992) theor appl genet.8. 8. 常用植物總常用植物總dnadna提取方法及主要原理提取方法及主要原理29sds法提取植物法提取植物dna步驟步驟（1）3-5g 幼嫩植物組織加液氮并迅速研磨成細(xì)粉，置入50ml離心管中繳入預(yù)熱治65的20 ml的sds緩沖液及100l蛋白酶k(終濃度0.05mg/ml)，輕搖混勻（2）65水浴2h，輕搖混勻（3） 冷卻至室溫，

17、加入等體積的酚/氯仿，輕輕上下顛倒混勻（4）3000 rpm 離心20 min（5）取上清液轉(zhuǎn)入到另一離心管中，加入等體積氯仿，混勻后3000 rpm 離心20 min（6）取上清液轉(zhuǎn)入到另一離心管中，加入0.6倍體積異丙醇，輕搖混勻，靜置一段時間后，挑出dna, 用70%和100%乙醇各洗一次, 氣干（7）將dna溶于適量的te（ph 8.0)中，加入rna酶（終濃度100g/l），37 保溫1-3h（8）加入等體積酚/氯仿，輕搖混勻，3000 rpm 離心15 min，取上清（9）加入等體積氯仿，輕搖混勻，3000 rpm 離心15 min，取上清（10）加入1/10體積的3m nach3

18、coona (ph5.2)，混勻后加入2倍體積的95%乙醇，挑出dna, 用70%和100%乙醇各洗一次, 氣干（11）加入適量te（ph 8.0)溶解dna（12）電泳檢測或用紫外分光光度計檢測dna的濃度和質(zhì)量8. 8. 常用植物總常用植物總dnadna提取方法及主要原理提取方法及主要原理308. 8. 常用植物總常用植物總dnadna提取方法及主要原理提取方法及主要原理離液鹽作用變性蛋白和核酸改變水的結(jié)構(gòu)、幫助核酸結(jié)合到硅膠膜上溶解多聚糖膠磁珠分離法磁珠分離法硅膜吸附法硅膜吸附法31磁珠法主要原理磁珠法主要原理通過細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，游離出的核酸分子被特異核酸分子被特異吸附到含硅膠膜的磁

19、性顆吸附到含硅膠膜的磁性顆粒表面粒表面，而蛋白質(zhì)等雜質(zhì)不被吸附而留在溶液中 在磁場作用下使磁性在磁場作用下使磁性顆粒與液體分開顆粒與液體分開，回收磁珠-dna 混合物，再用洗脫液洗脫即可以得到純凈的dna 8. 8. 常用植物總常用植物總dnadna提取方法及主要原理提取方法及主要原理32硅膜吸附法主要原理硅膜吸附法主要原理在離液鹽的作用下，水的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，幫助核酸結(jié)合到硅核酸結(jié)合到硅膠膜膠膜上，而在無離液鹽的作用下，則將核酸進(jìn)行洗脫洗脫8. 8. 常用植物總常用植物總dnadna提取方法及主要原理提取方法及主要原理339. rna9. rna提取提取rna實驗的關(guān)鍵是分離得到全長的rna實

20、驗失敗的主要原因是核糖核酸酶（核糖核酸酶（rnarna酶）的污染酶）的污染rna酶廣泛存在而穩(wěn)定廣泛存在而穩(wěn)定、一般反應(yīng)不需要輔助因子。 可耐受多種處理而不被滅活，如煮沸、高壓滅菌等2. rna的純度和完整性又可直接影響rna分析的結(jié)果,少量少量rnarna酶就會引起酶就會引起rnarna在制備與分析過程中的降解降解難點：一、嚴(yán)格控制外源性難點：一、嚴(yán)格控制外源性rnarna酶的污染酶的污染 外源性的rna酶：操作人員的手汗、唾液等，灰塵等。外源性rna酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、電泳槽等 二、最大限度地抑制內(nèi)源性的二、最大限度地抑制內(nèi)源性的rnarna酶酶 各種組織和細(xì)胞中含有大量內(nèi)源

21、性的rna酶rnarna提取的難點提取的難點341. 1. 杜絕外源酶的污染杜絕外源酶的污染 嚴(yán)格戴好口罩，手套 實驗涉及離心管、tip 頭、移液器、電泳槽、實驗臺面等要徹底處理 試劑/溶液，尤其是水，必須確保 rnase-free2. 2. 阻止內(nèi)源酶的活性阻止內(nèi)源酶的活性 選擇合適的勻漿方法和裂解液 控制好樣品的起始量3. 3. 明確自己的抽提目的明確自己的抽提目的 任何裂解液系統(tǒng)在接近樣品最大起始量時，抽提成功率急劇下降。 rna 抽提成功的唯一經(jīng)濟的標(biāo)準(zhǔn)是后續(xù)實驗的一次成功，而不是得率防止防止rnarna酶污染的措施酶污染的措施9. rna9. rna提取提取35防止防止rnarna酶

22、污染的措施酶污染的措施1. 設(shè)置設(shè)置rnarna操作專用實驗室操作專用實驗室，所有器械等應(yīng)為專用2. 所有玻璃器皿玻璃器皿在使用前于180180高溫烘烤高溫烘烤6hr6hr或更長時間或更長時間3. 塑料器皿塑料器皿可用0.1% depc0.1% depc水浸泡或用氯仿沖洗水浸泡或用氯仿沖洗 （注意：有機玻璃器具因可被氯仿腐蝕，故不能使用）4. 有機玻璃有機玻璃的電泳槽等，可先用去污劑洗滌，雙蒸水沖洗，乙醇干燥，再 浸泡在3% h2o2 室溫10min，然后用0.1% depc水沖洗，晾干5. 配制的溶液配制的溶液應(yīng)盡可能的用0.1% depc0.1% depc，在37處理12hr以上。 然后用

23、高壓滅菌除去殘留的depc。 不能高壓滅菌的試劑，應(yīng)當(dāng)用depc處理過的無菌雙蒸水配制，然后經(jīng) 0.22m濾膜過濾除菌6. 操作人員操作人員戴一次性口罩、帽子、手套，實驗過程中手套要勤換9. rna9. rna提取提取36焦磷酸二乙酯（焦磷酸二乙酯（depcdepc）一種強烈但不徹底的rna酶抑制劑。通過和rna酶的活性基團組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性異硫氰酸胍異硫氰酸胍目前認(rèn)為是最有效的rna酶抑制劑，在裂解組織的同時也使rna酶失活,既可破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)使核酸從核蛋白中解離出來，又對rna酶有強烈的變性作用氧釩核糖核苷復(fù)合物氧釩核糖核苷復(fù)合物由氧化釩離子和核苷形成的復(fù)合物，

24、它和rna酶結(jié)合形成過渡態(tài)類物質(zhì)，幾乎能完全抑制rna酶的活性。rnarna酶的蛋白抑制劑（酶的蛋白抑制劑（rnasinrnasin）從大鼠肝或人胎盤中提取得來的酸性糖蛋白。rnasin是rna酶的一種非競爭性抑制劑，可以和多種rna酶結(jié)合，使其失活其它其它sds、尿素、硅藻土等對rna酶也有一定抑制作用常用的常用的rnarna酶抑制劑酶抑制劑。9. rna9. rna提取提取371. 樣本前處理樣本前處理 選擇新鮮、幼嫩、生長旺盛的組織 處于生長旺盛的時期收集細(xì)胞、新鮮血液，不得超過4小時 液氮或加入rnase抑制劑保存, 避免反復(fù)凍融， 推薦使用專門的推薦使用專門的rna樣品儲存液儲存樣品

25、儲存液儲存2. 細(xì)胞裂解細(xì)胞裂解 異硫氰酸胍/酚trnzol總rna提取試劑 胍鹽/-巰基乙醇rnaprep系列rna提取試劑盒 獨特配方rna plant植物rna提取試劑3. rna的純化及獲得的純化及獲得 純化后不應(yīng)存在對酶 (如逆轉(zhuǎn)錄酶) 有抑制作用物質(zhì) 排除有機溶劑和金屬離子的污染 蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子等的污染降低到最低程度 排除dna分子的污染10. rna10. rna提取流程提取流程38幾種幾種rnarna提取方法提取方法1. trizol法法 trizoltrizol的主要成分的主要成分: :異硫氰酸胍和酚 異硫氰酸胍異硫氰酸胍：解偶劑，一類強力的蛋白質(zhì)變性劑，可溶解蛋白質(zhì)

26、，主要作用是裂解細(xì)胞，使細(xì)胞中的蛋白，核酸物質(zhì)解聚得到釋放 酚酚：有效的變性蛋白質(zhì)，但是它不能完全抑制rna酶活性 trizol中還加入了8羥基喹啉、-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源rnase。 原理：原理：trizol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總rna的試劑 在破碎和溶解細(xì)胞時能保持rna的完整性。加入氯仿后離心，樣品分成水相層和有機層。rna存在于水相層中。收集上面的的水相層后，rna可以通過異丙醇沉淀來還原9. rna9. rna提取提取391 樣品處理： 稱取 50-100mg 幼嫩葉片（新鮮或 -70 及液氮中保存的組織均可）置 1.5ml 離心管中，加入 1ml trizol 充分勻

27、漿，室溫靜置 min 2 加入 0.2ml 氯仿，振蕩 15s ，靜置 2min 3 4 離心， 12000g 15min ，取上清 4 加入 0.5ml 異丙醇，將管中液體輕輕混勻，室溫靜置 10min 5 4 離心， 12000g 10min ，棄上清 6 加入 1ml 75% 乙醇，輕輕洗滌沉淀。 4 ， 7500 g 5min ，棄上清 7. 晾干，加入適量的 depc h2o 溶解（ 65 促溶 10-15min ）o測o.d值定量rna濃度 提取rna a260/a280 值在1.6-1.8之間；產(chǎn)率植物葉片100-200g rna/gtrizoltrizol法提取流程法提取流程9

28、. rna9. rna提取提取40植物組織植物組織基因組基因組dna水相有機相rna氯仿氯仿純化純化ph 5.7離心離心加入裂解液加入裂解液(trnzol-a+) 研磨研磨9. rna9. rna提取提取實驗流程圖實驗流程圖412 2 苯酚法苯酚法 細(xì)胞內(nèi)大部分rna 均與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取rna時要把rna與蛋白質(zhì)分離并除去。將細(xì)胞置于含有十二烷基磺酸鈉（sodium dodecyl sulfate, sds）的緩沖液中，加等體積水飽和酚，通過劇裂振蕩，然后離心形成上層水相和下層酚相。核酸溶于水相，被苯酚變性的蛋白質(zhì)或者溶于酚相，或者在兩相界面處形成凝膠層。9. rna9. rna提取提取421. 取1g 活性干酵母在研缽中研碎，加10ml sds-緩沖液使成勻漿，洗入 各eppendorf管（略少于管容積的一半），加溶菌酶0.1ml，混勻，室溫靜置10min，再加等體積飽和酚液，室溫下劇烈振蕩5min2. 置冰浴中分層，在0-4低溫環(huán)境下，10000r/