大腸菌群總數(shù)的測定

1、 實實 驗驗 八八 大腸菌群最近似數(shù)的測定大腸菌群最近似數(shù)的測定大腸菌群大腸菌群:coliforms:coliforms最近似數(shù)最近似數(shù):most probable number,mpn:most probable number,mpn 概念：大腸菌群系指一群在37 24h能 發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧或兼性 厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌， 包括腸桿菌科的埃希氏菌屬、檸 檬酸細菌屬、克雷伯氏菌屬、腸 桿菌屬。 單位：mpn/100ml（g）1.1.掌握掌握大腸菌群最近似數(shù)大腸菌群最近似數(shù)檢驗技術(shù)的檢驗技術(shù)的 要點要點2. 2. 學會發(fā)酵法檢驗學會發(fā)酵法檢驗大腸菌群最近似數(shù)大腸菌群最近似數(shù)樣品樣品37

2、37恒溫培養(yǎng)箱、接種環(huán)、酒恒溫培養(yǎng)箱、接種環(huán)、酒精燈、試管架、記號筆等精燈、試管架、記號筆等培養(yǎng)基培養(yǎng)基三、方法1、樣品及其稀釋（同細菌總數(shù)測定）2、接種乳糖膽鹽發(fā)酵管（33=9支）3、鑒別培養(yǎng)（伊紅美蘭）4、乳糖復(fù)發(fā)酵試驗l1. 1. 采樣采樣: :無菌操作無菌操作l2. 2. 初發(fā)酵試驗：吸取待檢樣品接種于乳糖膽初發(fā)酵試驗：吸取待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，鹽發(fā)酵管內(nèi)，10ml10ml接種量采用雙料發(fā)酵管，而接種量采用雙料發(fā)酵管，而lmllml及及l(fā)mllml以下接種量采用單料管。每一接種量以下接種量采用單料管。每一接種量接種接種3 3管，置于管，置于35353737培養(yǎng)培養(yǎng)2424士士

3、2h2h。將產(chǎn)酸、。將產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的發(fā)酵管按下列程序繼續(xù)進行檢驗。產(chǎn)氣的發(fā)酵管按下列程序繼續(xù)進行檢驗。3. 3. 分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管中的發(fā)分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管中的發(fā)酵液在酵液在embemb平板上劃線分離，置于平板上劃線分離，置于353537c37c培養(yǎng)培養(yǎng)18 18 24h 24h 革蘭氏染色及鏡檢：于上述平板上革蘭氏染色及鏡檢：于上述平板上長出的菌落中挑取長出的菌落中挑取1 12 2個大腸菌群可個大腸菌群可疑菌落進行鏡檢和革蘭氏染色疑菌落進行鏡檢和革蘭氏染色4. 4. 復(fù)發(fā)酵試驗：將上述鏡檢之菌復(fù)發(fā)酵試驗：將上述鏡檢之菌 落同時接種于乳糖發(fā)酵管，置落同時接種于乳糖發(fā)酵管，置 于于35 35 3737培養(yǎng)培養(yǎng)2424土土2h2h，觀察，觀察 產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣情況。四、結(jié)果報告四、結(jié)果報告（按照國標及有關(guān)標準） 凡是在乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，在指示性培養(yǎng)基上能生長的，革蘭氏染色為陰性的無芽抱桿菌，在復(fù)發(fā)酵管中產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的，即說明有大腸菌群的細菌存在大腸菌群陽性； 有一項不符的，即說明無大腸菌群的細菌存在大腸菌群陰性。 根