影響原生質(zhì)體融合的因素

1、影響原生質(zhì)體融合的因素影響原生質(zhì)體融合的因素 2012年年10月月25日日細胞工程細胞工程 植物體細胞雜交過程中，有許多因子可以植物體細胞雜交過程中，有許多因子可以影響最后的結(jié)果，其中包括前面提到的原影響最后的結(jié)果，其中包括前面提到的原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)的所有影響因子，融合生質(zhì)體分離和培養(yǎng)的所有影響因子，融合雙親緣關(guān)系遠近及品種組合，融合方法和雙親緣關(guān)系遠近及品種組合，融合方法和參數(shù)等參數(shù)等 。 融合方法融合方法電融合peg融合 1. peg誘導(dǎo)融合法誘導(dǎo)融合法 peg誘導(dǎo)融合的特點：優(yōu)點是融合成本低，勿需特殊誘導(dǎo)融合的特點：優(yōu)點是融合成本低，勿需特殊設(shè)備；融合子產(chǎn)生的異核率較高；融合過程不受物

2、種設(shè)備；融合子產(chǎn)生的異核率較高；融合過程不受物種限制。缺點是融合過程繁瑣，限制。缺點是融合過程繁瑣，peg可能對細胞有毒可能對細胞有毒害。害。 peg作用機理：作用機理： kao等認為，由于等認為，由于peg分子具有輕微分子具有輕微的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質(zhì)和的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成碳水化合物等形成h鍵，從而在原生質(zhì)體之間形成分子鍵，從而在原生質(zhì)體之間形成分子橋，其結(jié)果使原生質(zhì)體發(fā)生粘連進而促進原生質(zhì)體融橋，其結(jié)果使原生質(zhì)體發(fā)生粘連進而促進原生質(zhì)體融合；另外，合；另外，peg能增加類脂膜的流動性，也使原生質(zhì)能增加類脂膜的流動性，也使原生質(zhì)

3、體的核、細胞器發(fā)生融合成為可能。體的核、細胞器發(fā)生融合成為可能。 2電融合法電融合法 electrofusion, electrically induced fusion 與與peg融合相比，電融合有三大優(yōu)點：融合相比，電融合有三大優(yōu)點： 不存在對細胞的毒害問題；不存在對細胞的毒害問題； 融合效率高；融合效率高； 融合技術(shù)操作簡便。融合技術(shù)操作簡便。 電融合儀的結(jié)構(gòu)特電融合儀的結(jié)構(gòu)特點：點： 交變電場部分交變電場部分 高頻直流電擊部分高頻直流電擊部分 電融合的基本過程：電融合的基本過程： 細胞膜的接觸：當(dāng)原生質(zhì)體置于電導(dǎo)率很低的細胞膜的接觸：當(dāng)原生質(zhì)體置于電導(dǎo)率很低的溶液中時，電場通電后，電流即通過原生質(zhì)體溶液中時，電場通電后，電流即通過原生質(zhì)體而不是通過溶液，其結(jié)果是原生質(zhì)體在電場作而不是通過溶液，其結(jié)果是原生質(zhì)體在電場作用下極化而產(chǎn)生偶極子，從而使原生質(zhì)體緊密用下極化而產(chǎn)生偶極子，從而使原生質(zhì)體緊密接觸排列成串；接觸排列成串； 膜的擊穿：原生質(zhì)體成串排列后，立即給予高膜的擊穿：原生質(zhì)體成串排列后，立即給予高頻直流脈沖就可以使原生質(zhì)膜擊穿，從而導(dǎo)致頻直流脈沖就可以使原生質(zhì)膜擊穿，從而導(dǎo)致兩個緊密接觸的細胞融合在一起并圓球化。兩個緊密接觸的細胞融合在一起并圓球化。 關(guān)于融合參數(shù)：交流電壓關(guān)于融合參數(shù)：交流電壓 交變電場的振幅頻率交變電場的振幅