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文檔簡介

1、 主要用于分離離子或可離解的化合物，包括氨基酸氨基酸，多肽多肽，核酸核酸，核苷核苷等各種。第1頁/共20頁第2頁/共20頁第3頁/共20頁本研究利用合成的強陰離子交換柱很好地本研究利用合成的強陰離子交換柱很好地分離了分離了a- 淀粉酶粗品淀粉酶粗品,其活性其活性 回收率高回收率高達達96%,比活性達比活性達388ug/mg蛋白質(zhì)純度蛋白質(zhì)純度提高提高30倍。此法的研究成功倍。此法的研究成功 為大規(guī)模制為大規(guī)模制備高純度備高純度 a- 淀粉酶提供了一個新工藝路淀粉酶提供了一個新工藝路線。線。 高純度的 8 一淀粉酶可作為酶試劑 ,研究生物作用的特性、酶反應(yīng)機理,測定 生化反應(yīng)的平衡常數(shù)。第4頁/

2、共20頁 用微量天平準(zhǔn)確稱取5mg高純度的 a-淀粉酶試劑,于小離心 試管中,準(zhǔn)確加1.0ml水,溶解后 ,在1300r/min的高速離心機上離心5min,小心轉(zhuǎn)移上部清液于另一離心試管中,此液相當(dāng)于1062u/ml活力.第5頁/共20頁第6頁/共20頁第7頁/共20頁第8頁/共20頁 為獲得高的洗脫效率,本實驗選用0.02mol/L Tris-2mol/LNacl(PH6.0)體系作為洗脫劑.（Tris-指三羥甲基氨基甲烷 ）第9頁/共20頁第10頁/共20頁第11頁/共20頁 由圖2可知 ,在 2.0mol/L以下,。洗脫液中離子強度對洗脫效率的影 響可歸結(jié)為離子交換平衡的移動,這種色譜行

3、為表明該固定相具有典型的陰離子交換特性 ,符合離子交換色譜的洗脫規(guī)律。但在2.0mol/L以上 ,。這種反?，F(xiàn)象,可能是由于引起。第12頁/共20頁 實驗證明,離子交換柱不僅有離子交換的作用 ,而且還表現(xiàn)一定的疏水作用的。并且這種疏水作用 ,隨溶液離子強度發(fā)生變化 。當(dāng)洗脫劑 濃度大于 2.0mol/L時,由于溶液的表面張力過大 ,離子交換劑的疏水作用變得明顯,對蛋白質(zhì)疏水締合作用增強 ,故被吸附 的蛋白質(zhì)難以洗脫,因而 活性回收率下降。 所以選擇抓Nacl濃度為2.0mol/L. 第13頁/共20頁第14頁/共20頁第15頁/共20頁第16頁/共20頁第17頁/共20頁 凡在溶液中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法進行分離。它不僅適用于無機離子混合物的分離，亦可用于有機物的分離，例如氨基酸、蛋白質(zhì)等生物大分子，因此應(yīng)用范圍較廣。不過它容易受柱

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