時(shí)間分辨乙肝應(yīng)用-潭龍益

1、Time resolved FluoroimmunoassayTime resolved FluoroimmunoassayTRFIATRFIA第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷教研室第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷教研室長(zhǎng)征醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科長(zhǎng)征醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科全軍臨床免疫中心全軍臨床免疫中心譚龍益譚龍益 博士博士 qABO血型檢測(cè)血型檢測(cè)q細(xì)菌鑒定細(xì)菌鑒定q肥大氏反應(yīng)肥大氏反應(yīng)q瓊脂糖擴(kuò)散試驗(yàn)瓊脂糖擴(kuò)散試驗(yàn)q免疫電泳免疫電泳q放射免疫分析技術(shù)放射免疫分析技術(shù) radioimmunoassayradioimmunoassay RIA RIA靈敏度高：達(dá)到靈敏度高：達(dá)到ng甚至甚至pg水平水平特異性強(qiáng)特異性強(qiáng)重復(fù)性高重復(fù)性高

2、標(biāo)本用量少標(biāo)本用量少極大地推動(dòng)了臨床和科研進(jìn)步極大地推動(dòng)了臨床和科研進(jìn)步標(biāo)記原理為以后的檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。標(biāo)記原理為以后的檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。同位素高度靈敏免疫反應(yīng)特異性同位素高度靈敏免疫反應(yīng)特異性w125125I I的半衰期短而導(dǎo)致其試劑有效期短。的半衰期短而導(dǎo)致其試劑有效期短。w標(biāo)記物標(biāo)記物125125I I的穩(wěn)定性差，導(dǎo)致試劑盒批間、批內(nèi)的的穩(wěn)定性差，導(dǎo)致試劑盒批間、批內(nèi)的變異較大；標(biāo)準(zhǔn)曲線有效期短，必須每次定標(biāo)，造變異較大；標(biāo)準(zhǔn)曲線有效期短，必須每次定標(biāo)，造成浪費(fèi)。成浪費(fèi)。w操作繁瑣，出報(bào)告時(shí)間長(zhǎng)。操作繁瑣，出報(bào)告時(shí)間長(zhǎng)。w無(wú)法保存?zhèn)溆?。無(wú)法保存?zhèn)溆谩放射性（放射性（1

3、25125I I），對(duì)環(huán)境的污染及對(duì)身體的危害，），對(duì)環(huán)境的污染及對(duì)身體的危害，已經(jīng)為重視環(huán)保的國(guó)家逐步取消。（如整個(gè)歐洲僅已經(jīng)為重視環(huán)保的國(guó)家逐步取消。（如整個(gè)歐洲僅尚存幾個(gè)放免試驗(yàn)室）尚存幾個(gè)放免試驗(yàn)室）酶免疫分析法酶免疫分析法enzyneenzyne immunoassay EIA immunoassay EIA 避免了對(duì)環(huán)境和人體危害。避免了對(duì)環(huán)境和人體危害。試劑有效期較長(zhǎng)。試劑有效期較長(zhǎng)。操作簡(jiǎn)單，不需要特殊設(shè)備，容易推廣。操作簡(jiǎn)單，不需要特殊設(shè)備，容易推廣。 曾經(jīng)一度被認(rèn)為是取代放免的檢測(cè)手段。曾經(jīng)一度被認(rèn)為是取代放免的檢測(cè)手段。酶的高效催化免疫反應(yīng)特異性酶的高效催化免疫反應(yīng)特異性

4、w靈敏度、重復(fù)性不及放免，易造成漏檢和靈敏度、重復(fù)性不及放免，易造成漏檢和假陽(yáng)性。假陽(yáng)性。w因酶的純度和反應(yīng)過(guò)程容易受環(huán)境因素影因酶的純度和反應(yīng)過(guò)程容易受環(huán)境因素影響，導(dǎo)致穩(wěn)定性不好。響，導(dǎo)致穩(wěn)定性不好?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIACLIA） chemiluminescenchemiluminescen immunoassay immunoassay單個(gè)樣本檢測(cè)速度快，適合做急診。單個(gè)樣本檢測(cè)速度快，適合做急診。靈敏度較高。靈敏度較高。自動(dòng)化程度高。自動(dòng)化程度高。光反應(yīng)的高度靈敏免疫反應(yīng)特異光反應(yīng)的高度靈敏免疫反應(yīng)特異 發(fā)光過(guò)程短，樣品不能重復(fù)檢測(cè)。發(fā)光過(guò)程短，樣品不能重復(fù)檢

5、測(cè)。 本底較高，易受環(huán)境物質(zhì)干擾。本底較高，易受環(huán)境物質(zhì)干擾。 試劑穩(wěn)定性較差，需多次定標(biāo)。試劑穩(wěn)定性較差，需多次定標(biāo)。 檢測(cè)精度不高，在超微量分析及早期診斷檢測(cè)精度不高，在超微量分析及早期診斷方面能力不足。方面能力不足。 非開(kāi)放性試劑；試劑價(jià)格高。非開(kāi)放性試劑；試劑價(jià)格高。電化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECLECL） electrochemiluminescenceelectrochemiluminescence8080年代末期問(wèn)世的新型化學(xué)發(fā)光免疫分析方法。年代末期問(wèn)世的新型化學(xué)發(fā)光免疫分析方法。電化學(xué)免疫反應(yīng)電化學(xué)免疫反應(yīng)電化學(xué)發(fā)光底物電化學(xué)發(fā)光底物- - 三聯(lián)吡啶釕三聯(lián)吡啶釕

6、N N羥基琥珀酰胺羥基琥珀酰胺(NHS)(NHS)酯酯電極表面的電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)電極表面的電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)本底較小、靈敏度較高、線性范圍較寬。本底較小、靈敏度較高、線性范圍較寬?？梢宰骷痹\可以作急診w非開(kāi)放性試劑系統(tǒng)。非開(kāi)放性試劑系統(tǒng)。w試劑價(jià)格過(guò)高。試劑價(jià)格過(guò)高。免疫熒光測(cè)定技術(shù)免疫熒光測(cè)定技術(shù)( (IFA)IFA)Immunofluorescence Immunofluorescence assayassay熒光物質(zhì)免疫反應(yīng)熒光物質(zhì)免疫反應(yīng)細(xì)胞免疫、微生物、自身免疫等細(xì)胞免疫、微生物、自身免疫等敏感度不高敏感度不高 本底高本底高鑭系元素標(biāo)記技術(shù)免疫反應(yīng)鑭系元素標(biāo)記技術(shù)免疫反應(yīng)一、基本原理固相固

7、相Ab受檢受檢抗原抗原Eu標(biāo)記標(biāo)記抗體抗體ExcitationExcitationExcitationExcitationExcitationExcitationExcitationExcitation二、二、TRFIATRFIA的主要特點(diǎn)的主要特點(diǎn)（一）靈敏度高、特異性強(qiáng)（一）靈敏度高、特異性強(qiáng)酶聯(lián)免疫酶聯(lián)免疫（精度：（精度：1010-9 -9 mol/L mol/L ）放射免疫放射免疫（精度：（精度：1010-12-12mol/L mol/L ）化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光（精度：（精度：1010-15-15mol/L mol/L ） 電化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光（精度：（精度：1010-17-17mol/L

8、 mol/L ）時(shí)間分辨熒光時(shí)間分辨熒光（精度：（精度：1010-18-18mol/L mol/L ）生物芯片生物芯片試劑試劑 DELFIA Immulite ACS-180AFP0.1-1000IU/ml 0.2-300IU/ml 1.0-1000IU/mCEA 0.1-500ng/ml 0.2-500ng/ml 0.5-100ng/mlHCG0.5-10000U/L 5-5000U/L 2-1000U/LTSH0.005-100U/ml 0.002-75U/ml 0.03-150U/mlFSH0.05-256mU/ml 0.1-170mU/m 0.3-200mU/mlProg0.08-12

9、0nmol/L 無(wú)無(wú) 0.1-40ng/mlProlactin 0.04-250ng/ml 0.5-150ng/ml 0.3-200ng/mlq以上數(shù)據(jù)均出自于各制造廠家自己的產(chǎn)品說(shuō)明書以上數(shù)據(jù)均出自于各制造廠家自己的產(chǎn)品說(shuō)明書鑭系元素：鑭系元素：1515種種 EuEu、TbTb、 SmSm、 NdNd、 Dy Dy EuEu螯合物螯合物激發(fā)光激發(fā)光熒光熒光EuEu螯合物熒光的特點(diǎn)螯合物熒光的特點(diǎn)高強(qiáng)度高強(qiáng)度長(zhǎng)壽命長(zhǎng)壽命EuEu螯合物螯合物714000714000nsns1 Eu螯合物的熒光衰變時(shí)間很長(zhǎng)，極大地降低螯合物的熒光衰變時(shí)間很長(zhǎng)，極大地降低了檢測(cè)背景。了檢測(cè)背景。2008004006

10、00熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度激發(fā)激發(fā)短壽命熒光短壽命熒光白蛋白白蛋白 4.1ns球蛋白球蛋白 3.0nsFITC 4.5ns測(cè)量時(shí)間測(cè)量時(shí)間新循環(huán)新循環(huán)1000次循環(huán)次循環(huán)/s2 stokes2 stokes位移大位移大, ,激發(fā)光譜與發(fā)射光譜無(wú)重疊激發(fā)光譜與發(fā)射光譜無(wú)重疊, ,很容易排除散射光對(duì)發(fā)射光譜的影響很容易排除散射光對(duì)發(fā)射光譜的影響. .stokesstokes位移位移: :最大激發(fā)波長(zhǎng)至最大發(fā)射波長(zhǎng)最大激發(fā)波長(zhǎng)至最大發(fā)射波長(zhǎng) 之間的距離之間的距離激發(fā)光激發(fā)光發(fā)射光發(fā)射光Eu螯合物熒光光譜螯合物熒光光譜300600400500波長(zhǎng)波長(zhǎng)nm熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度273nm異硫氰酸熒光素發(fā)射光譜異硫氰

11、酸熒光素發(fā)射光譜300600400500波長(zhǎng)波長(zhǎng)nm熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度發(fā)射光發(fā)射光激發(fā)光激發(fā)光50nmEu螯合物熒光光譜螯合物熒光光譜300600400500波長(zhǎng)波長(zhǎng)nm熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度異硫氰酸熒光素發(fā)射光譜異硫氰酸熒光素發(fā)射光譜300600400500波長(zhǎng)波長(zhǎng)nm熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度3 3 激發(fā)光譜帶較寬、可增加激發(fā)能，提高靈敏度激發(fā)光譜帶較寬、可增加激發(fā)能，提高靈敏度4 4 發(fā)射光譜很窄，發(fā)射光譜很窄，50%50%的發(fā)射光譜寬度的發(fā)射光譜寬度10nm10nm，利用利用6156155 5范圍的濾光片，只允許此波段內(nèi)范圍的濾光片，只允許此波段內(nèi)發(fā)射光通過(guò)并被檢測(cè)，排除其它波長(zhǎng)的熒光，發(fā)射光通過(guò)并被檢

12、測(cè)，排除其它波長(zhǎng)的熒光，一方面降低了背景，另一方面使能量消耗減一方面降低了背景，另一方面使能量消耗減少，提高提高檢測(cè)靈敏度。少，提高提高檢測(cè)靈敏度。異硫氰酸熒光素發(fā)射光譜異硫氰酸熒光素發(fā)射光譜300600400500波長(zhǎng)波長(zhǎng)nm熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度Eu螯合物熒光光譜螯合物熒光光譜300600400500波長(zhǎng)波長(zhǎng)nm熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度5 Eu5 Eu螯合物有相對(duì)高的比活性螯合物有相對(duì)高的比活性比活性：?jiǎn)挝粫r(shí)間內(nèi)，每個(gè)標(biāo)記分子的可探比活性：?jiǎn)挝粫r(shí)間內(nèi)，每個(gè)標(biāo)記分子的可探 測(cè)事件的數(shù)目測(cè)事件的數(shù)目 熒光物質(zhì)相對(duì)比活性很高熒光物質(zhì)相對(duì)比活性很高 原因：在測(cè)定原因：在測(cè)定時(shí)，熒光物質(zhì)可反復(fù)被激活。時(shí)，熒光物質(zhì)

13、可反復(fù)被激活?；鶓B(tài)基態(tài)激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)激發(fā)光激發(fā)光躍遷躍遷發(fā)射熒光發(fā)射熒光常用標(biāo)記物的相對(duì)比活性常用標(biāo)記物的相對(duì)比活性125125I I標(biāo)記物標(biāo)記物 1 1個(gè)個(gè)可探測(cè)事件可探測(cè)事件/s/7.5/s/7.5* *10106 6分子分子化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物 1 1個(gè)個(gè)可探測(cè)事件可探測(cè)事件/s/s/標(biāo)記分子標(biāo)記分子熒光標(biāo)記物熒光標(biāo)記物 很多個(gè)很多個(gè)可探測(cè)事件可探測(cè)事件/s/s/標(biāo)記分子標(biāo)記分子（二）線性范圍寬（二）線性范圍寬標(biāo)準(zhǔn)曲線穩(wěn)定，試劑保質(zhì)期長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)曲線穩(wěn)定，試劑保質(zhì)期長(zhǎng)0.5 1 2 5 10 20 50 100 200 500 U/L 51002000Cps.10 3DELFIA hFS

14、HN=6時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線相當(dāng)穩(wěn)定，時(shí)間分辨熒光免疫檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線相當(dāng)穩(wěn)定，同一批次的試劑盒可用兩點(diǎn)法加批次的參考曲同一批次的試劑盒可用兩點(diǎn)法加批次的參考曲線定標(biāo)線定標(biāo)（三）重復(fù)性好（三）重復(fù)性好 同一標(biāo)本連續(xù)同一標(biāo)本連續(xù)2020次檢測(cè)，次檢測(cè)，CVCV值值22。 同一批（同一批（1010個(gè)）標(biāo)本連續(xù)個(gè)）標(biāo)本連續(xù)3 3天檢測(cè)，其天檢測(cè)，其CVCV值值=2.9%=2.9%。 檢測(cè)后反應(yīng)板連續(xù)檢測(cè)后反應(yīng)板連續(xù)3 3天重復(fù)閱讀，天重復(fù)閱讀，CV 1CV 1TRFIATRFIA檢測(cè)檢測(cè)HBsAgHBsAg的重復(fù)性的重復(fù)性6003007002001000- 50100時(shí)間延遲（時(shí)間延遲（微秒

15、）微秒）強(qiáng)度強(qiáng)度發(fā)射光波長(zhǎng)（納米）發(fā)射光波長(zhǎng)（納米）500利用不同波長(zhǎng)和不同時(shí)間檢測(cè)，利用不同波長(zhǎng)和不同時(shí)間檢測(cè)， 在同一孔中可測(cè)量多個(gè)鑭系元素的量在同一孔中可測(cè)量多個(gè)鑭系元素的量（四）同一標(biāo)本孔同時(shí)檢測(cè)多個(gè)項(xiàng)目（四）同一標(biāo)本孔同時(shí)檢測(cè)多個(gè)項(xiàng)目技術(shù)技術(shù)特點(diǎn)特點(diǎn)檢驗(yàn)先進(jìn)性檢驗(yàn)先進(jìn)性時(shí)間分辨時(shí)間分辨光譜分辨光譜分辨特異性熒光與非特異性熒光分離特異性熒光與非特異性熒光分離發(fā)射熒光與激發(fā)熒光分離發(fā)射熒光與激發(fā)熒光分離零本底、高特異性零本底、高特異性解離解離- -增強(qiáng)增強(qiáng)熒光性大大提高熒光性大大提高穩(wěn)定的熒光螯合物穩(wěn)定的熒光螯合物線性范圍更寬線性范圍更寬重復(fù)性更好重復(fù)性更好原子標(biāo)記原子標(biāo)記 標(biāo)記位點(diǎn)多，

16、可達(dá)標(biāo)記位點(diǎn)多，可達(dá)2020個(gè)個(gè) 對(duì)標(biāo)記物結(jié)構(gòu)及活性影響小對(duì)標(biāo)記物結(jié)構(gòu)及活性影響小 無(wú)衰變無(wú)衰變 受環(huán)境影響小受環(huán)境影響小高穩(wěn)定性，高精確度高穩(wěn)定性，高精確度試劑保質(zhì)期至少一年試劑保質(zhì)期至少一年標(biāo)準(zhǔn)曲線保留時(shí)間長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)曲線保留時(shí)間長(zhǎng)同一批次只需兩點(diǎn)定標(biāo)同一批次只需兩點(diǎn)定標(biāo)多標(biāo)記多標(biāo)記單，雙，三，四標(biāo)記單，雙，三，四標(biāo)記同一試劑盒可同時(shí)測(cè)多個(gè)同一試劑盒可同時(shí)測(cè)多個(gè)項(xiàng)目項(xiàng)目三、應(yīng)用三、應(yīng)用w內(nèi)分泌科檢查內(nèi)分泌科檢查n甲狀腺系列甲狀腺系列： TSHTSH，Ultra TSHUltra TSH，T3T3，T4T4，n FT3FT3，F(xiàn)T4FT4，TBGTBG，TGTGn糖尿病系列糖尿病系列： Insul

17、inInsulin， C-PeptieC-Peptien生長(zhǎng)激素類生長(zhǎng)激素類： hGHhGHn其他其他： CortisolCortisolw婦產(chǎn)科檢查婦產(chǎn)科檢查nFSHFSH，LHLH，HCGHCG，ProlactinE2ProlactinE2，E3E3，TestoTesto，ProgProg，SHBGSHBGw腫瘤科檢查腫瘤科檢查AFP CEA PSA hTGAFP CEA PSA hTG，-2 Micro -2 Micro NSE PAP NSE PAP PSAPSA（Free/TotalFree/Total） PSA EQMPSA EQMCA-50 CA-125 CA-199 CA-50

18、 CA-125 CA-199 CA-153CA-153* * CA-724 CA-724* * CY-211 CY-211* *w遺傳科檢查遺傳科檢查n產(chǎn)前篩查產(chǎn)前篩查： hAFPhAFP/ / HCG HCG ，PAPPAPAPPAn新生兒篩查新生兒篩查：Neo-TSHNeo-TSH，Neo-T4Neo-T4，Neo-IRTNeo-IRT， n Neo-17a-OH ProgNeo-17a-OH Prog，PKUPKUn核酸探針及基因雜交檢測(cè)，多標(biāo)記定量核酸探針及基因雜交檢測(cè)，多標(biāo)記定量PCRPCR檢測(cè)。檢測(cè)。w肝炎系列肝炎系列n甲肝，乙肝，丙肝甲肝，乙肝，丙肝w血液科檢測(cè)血液科檢測(cè)n貧血檢

19、查貧血檢查：FerritinFerritin，VitVit B12 B12，F(xiàn)olic acidFolic acidn白血?。喊籽。好庖呒?xì)胞分型等免疫細(xì)胞分型等w細(xì)胞學(xué)檢查細(xì)胞學(xué)檢查n細(xì)胞毒試驗(yàn)等多種檢測(cè)項(xiàng)目，細(xì)胞質(zhì)及組織細(xì)胞毒試驗(yàn)等多種檢測(cè)項(xiàng)目，細(xì)胞質(zhì)及組織化學(xué)分析等多種檢測(cè)項(xiàng)目化學(xué)分析等多種檢測(cè)項(xiàng)目n酶類檢測(cè)及細(xì)胞受體檢測(cè)（包括酶類檢測(cè)及細(xì)胞受體檢測(cè)（包括MHCMHC，HLAHLA等等多種檢測(cè)）多種檢測(cè)）w科研工具科研工具n單標(biāo)記檢測(cè)，雙標(biāo)記檢測(cè)，三標(biāo)記檢測(cè)，四單標(biāo)記檢測(cè)，雙標(biāo)記檢測(cè)，三標(biāo)記檢測(cè)，四標(biāo)記檢測(cè)標(biāo)記檢測(cè)時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定技術(shù)時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定技術(shù)在病毒性肝炎診斷和療效監(jiān)測(cè)

20、中的應(yīng)用在病毒性肝炎診斷和療效監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用病毒性肝炎的種類病毒性肝炎的種類Hepatitis A Virus Hepatitis B VirusHepatitis C VirusHepatitis D VirusHepatitis E VirusHepatitis G VirusTTVHepatitis Gvirus (HGV) Science. 1996 Jan 26;271(5248):505-8. An RNA virus, hepatitis G virus (HGV), from the plasma of a patient with chronic hepatitis. enti

21、re genome (9392 nucleotides)encoding a polyprotein of 2873 amino acids. qHGV was associated with acute and chronic hepatitis. The virus is transfusion-transmissible. It has a global distribution present within the volunteer blood donor population.19962003各年度HGV相關(guān)論文數(shù)量統(tǒng)計(jì)05010015020012345678年度篇數(shù)9699 00

22、01 02039798 HGVand GBV-C were two isolates of the same virus. The HGV/GBV-C genome sequence and organization are closely r e l a t e d t o h e p a t i t i s C v i r u s .qinfection is common and frequently persists in humans, qinfection has not been found to be associated with any known disease stat

23、e. (acute or chronic hepatitis) qgrow in lymphocytes , not in hepatocytes, Recent studies suggest : GBV-C infection in HIV-positive people is associated with prolonged survival. coinfection of human lymphocytes with GBV-C and HIV lead to decreased HIV replication. HGV may provide novel approaches fo

24、r treating HIV and AIDS.TT virus (TTV) found in 1997 from a hepatitis patient without virus markers. However, the real impact of TTV on liver diseases remains uncertain to date. Due to the lack of suitable cell systems to support the growth of TTV, the biology of TTV is still obscure.HBsAgHBcAgHBV D

25、NAPolymerase一、一、HBV的主要生物學(xué)性狀的主要生物學(xué)性狀HBV感染感染 病毒在體內(nèi)大量復(fù)制病毒在體內(nèi)大量復(fù)制 免疫反應(yīng)免疫反應(yīng) 病毒核酸進(jìn)入血液病毒核酸進(jìn)入血液 釋放病毒蛋白釋放病毒蛋白(Ag) 分子生物學(xué)方法分子生物學(xué)方法 刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體 核酸定性或定量核酸定性或定量 血清學(xué)方法血清學(xué)方法 病毒抗原或抗體病毒抗原或抗體 臨床診斷和療效觀察臨床診斷和療效觀察二、二、HBV感染診斷的主要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)感染診斷的主要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)血清免疫學(xué)檢測(cè)的臨床意義血清免疫學(xué)檢測(cè)的臨床意義1 HBV感染診斷的主要指標(biāo)感染診斷的主要指標(biāo)2 判斷機(jī)體對(duì)判斷機(jī)體對(duì)HBV的免疫狀況主要指標(biāo)的免

26、疫狀況主要指標(biāo)3 判斷病程的主要指標(biāo)判斷病程的主要指標(biāo) Acute Hepatitis B DNA4-12周周1-2周周2周周3月月36月月潛伏潛伏期期急性急性早期早期潛伏潛伏后期后期急急性性期期康復(fù)期痊愈痊愈標(biāo)標(biāo)志志物物相相對(duì)對(duì)濃濃度度有傳染性有傳染性可能有傳可能有傳染性染性有 免有 免疫 力疫 力血清血清學(xué)轉(zhuǎn)學(xué)轉(zhuǎn)換期換期 HBsAgHBeAgAnti-HBcAnti-HBc IgMAnti-HBeAnti-HBsChronic HBV Infection潛伏期潛伏期(4-12周周)急性感染急性感染(6個(gè)月個(gè)月)慢性感染慢性感染HBsAgAnti-HBcAnti-HBc IgMHBeAgAn

27、ti-HBeDNA3 HBV3 HBV血清學(xué)標(biāo)志物與血清學(xué)標(biāo)志物與HBV DNAHBV DNA的關(guān)系的關(guān)系血清學(xué)標(biāo)志物：血清學(xué)標(biāo)志物： 反映機(jī)體對(duì)病毒的免疫狀況，病程，反映機(jī)體對(duì)病毒的免疫狀況，病程， 判斷病情。判斷病情。 不能完全反映病毒在體內(nèi)復(fù)制狀況。不能完全反映病毒在體內(nèi)復(fù)制狀況。HBVDNAHBVDNA 反映病毒在體內(nèi)復(fù)制水平，觀察藥物療效，反映病毒在體內(nèi)復(fù)制水平，觀察藥物療效， 部分部分“ “ 小三陽(yáng)小三陽(yáng)”及低水平病毒復(fù)制時(shí)出現(xiàn)陰性。及低水平病毒復(fù)制時(shí)出現(xiàn)陰性。 不能反映機(jī)體的免疫狀況和病情不能反映機(jī)體的免疫狀況和病情三、三、 時(shí)間分辨熒光檢測(cè)時(shí)間分辨熒光檢測(cè) HBsAgHBsAg

28、與其它方法的比較與其它方法的比較TRFIATRFIA與與Elecsys Elecsys Systems 2010Systems 2010檢測(cè)檢測(cè) HBsAgHBsAg定性結(jié)果比較定性結(jié)果比較TRFIATRFIA陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陰性合計(jì)合計(jì)陽(yáng)性陽(yáng)性60060陰性陰性04040總數(shù)總數(shù)6040100ElecsysElecsys Systems 2010 Systems 2010靈敏度靈敏度40（040）100100靈敏性靈敏性60（060）100100兩者符合率兩者符合率 100與與 EIA EIA 檢測(cè)檢測(cè) HBsAgHBsAg定性結(jié)果比較定性結(jié)果比較TRFIATRFIAEIAEIA陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陰性

29、合計(jì)合計(jì)陽(yáng)性陽(yáng)性59160陰性陰性04040總數(shù)總數(shù)5941100與與Elecsys Elecsys Systems 2010Systems 2010檢測(cè)檢測(cè) HBsAgHBsAg定量結(jié)果比較定量結(jié)果比較ElecsysElecsys Systems 2010 Systems 2010 檢測(cè)檢測(cè) HBsAgHBsAg（COICOI）與）與TRFIATRFIA檢測(cè)檢測(cè)HBsAgHBsAg（ngng/L/L）的相關(guān)性）的相關(guān)性0.9870.987TRFIATRFIA在乙肝在乙肝“兩對(duì)半兩對(duì)半”定量檢測(cè)應(yīng)用定量檢測(cè)應(yīng)用 一、一、 極大地提高了檢測(cè)的靈敏度極大地提高了檢測(cè)的靈敏度 TRFIA 檢測(cè)Hbs

30、Ag靈敏度可達(dá)0.2ng/ml，而酶標(biāo)（ELISA）檢測(cè)HbsAg靈敏度是2ng/ml，也就是說(shuō)只有血清中的HbsAg達(dá)到2ng/ml酶標(biāo)才會(huì)呈陽(yáng)性。1縮短急性乙肝縮短急性乙肝HBsAg 檢測(cè)檢測(cè)“窗口期窗口期” 2如病毒發(fā)生變異后，表達(dá)量較低，常規(guī)如病毒發(fā)生變異后，表達(dá)量較低，常規(guī)ELISA測(cè)不出抗原，而測(cè)不出抗原，而TRFIA定量具有極高定量具有極高的靈敏度，可發(fā)現(xiàn)并極有可能同時(shí)檢測(cè)出的靈敏度，可發(fā)現(xiàn)并極有可能同時(shí)檢測(cè)出HbsAg和抗和抗-Hbs。 3 可發(fā)現(xiàn)低濃度可發(fā)現(xiàn)低濃度HbsAg攜帶者。攜帶者。 特別是一些群體如醫(yī)護(hù)工作者、病人家屬等，由于特別是一些群體如醫(yī)護(hù)工作者、病人家屬等，由

31、于長(zhǎng)期密切接觸，但又非直接經(jīng)血傳播感染成急性乙肝，長(zhǎng)期密切接觸，但又非直接經(jīng)血傳播感染成急性乙肝，而是長(zhǎng)期少量感染，并刺激機(jī)體產(chǎn)生一定的免疫力，而是長(zhǎng)期少量感染，并刺激機(jī)體產(chǎn)生一定的免疫力，可能呈低濃度感染，特別應(yīng)當(dāng)引起人們的足夠重視，可能呈低濃度感染，特別應(yīng)當(dāng)引起人們的足夠重視，密切關(guān)注并采取措施防止發(fā)展成乙肝或慢性攜帶者。密切關(guān)注并采取措施防止發(fā)展成乙肝或慢性攜帶者。二、二、 動(dòng)態(tài)觀察療效和病情監(jiān)測(cè)。動(dòng)態(tài)觀察療效和病情監(jiān)測(cè)。 疾病的發(fā)生、發(fā)展、療效、預(yù)后是一個(gè)動(dòng)態(tài)的疾病的發(fā)生、發(fā)展、療效、預(yù)后是一個(gè)動(dòng)態(tài)的變化的過(guò)程，變化的過(guò)程，TRFIA定量檢測(cè)乙肝定量檢測(cè)乙肝“兩對(duì)半兩對(duì)半”各項(xiàng)各項(xiàng)標(biāo)志

32、物的濃度變化可對(duì)乙肝的病程、治療、預(yù)后起標(biāo)志物的濃度變化可對(duì)乙肝的病程、治療、預(yù)后起一個(gè)全程動(dòng)態(tài)檢測(cè)的作用，能夠?yàn)獒t(yī)生對(duì)病情療效一個(gè)全程動(dòng)態(tài)檢測(cè)的作用，能夠?yàn)獒t(yī)生對(duì)病情療效作出合理的解釋提供依據(jù)，指導(dǎo)治療。作出合理的解釋提供依據(jù)，指導(dǎo)治療。1定量分析定量分析HbsAg和抗和抗-Hbs的濃度變化，可以預(yù)見(jiàn)的濃度變化，可以預(yù)見(jiàn)急性乙肝是否處于恢復(fù)期。急性乙肝是否處于恢復(fù)期。 如如HbsAg濃度降低，抗?jié)舛冉档停?Hbs的濃度逐漸升高，的濃度逐漸升高，可說(shuō)明病情正往恢復(fù)期發(fā)展。反之，可說(shuō)明病情正往恢復(fù)期發(fā)展。反之，HbsAg濃度處濃度處于較高水平或上升趨勢(shì)，而抗于較高水平或上升趨勢(shì)，而抗-Hbs一

33、直處于較底水一直處于較底水平，則容易發(fā)展為慢性乙肝或攜帶者。平，則容易發(fā)展為慢性乙肝或攜帶者。2定量分析定量分析HbeAg和抗和抗-Hbe的濃度變化，可以反的濃度變化，可以反映病情變化和治療效果。映病情變化和治療效果。 明確檢測(cè)明確檢測(cè)HbeAg向抗向抗-Hbe轉(zhuǎn)換的時(shí)期，即表轉(zhuǎn)換的時(shí)期，即表現(xiàn)為現(xiàn)為HbeAg濃度下降和抗?jié)舛认陆岛涂?Hbe濃度升高的過(guò)程。濃度升高的過(guò)程。 高濃度的高濃度的HbeAg還可間接提示病毒處于高復(fù)還可間接提示病毒處于高復(fù)制狀態(tài)，具有較高的傳染性。制狀態(tài)，具有較高的傳染性。 高濃度的抗高濃度的抗-Hbe一方面提示病情的好轉(zhuǎn)，而一方面提示病情的好轉(zhuǎn)，而在某些時(shí)候（如肝功

34、能指標(biāo)很差）可能與肝壞死、在某些時(shí)候（如肝功能指標(biāo)很差）可能與肝壞死、肝硬化、肝癌有關(guān)。肝硬化、肝癌有關(guān)。3抗抗-Hbc濃度的高低可以反映病毒感染的狀濃度的高低可以反映病毒感染的狀態(tài)。態(tài)。 乙肝急性感染常常呈現(xiàn)高濃度的抗乙肝急性感染常常呈現(xiàn)高濃度的抗-Hbc，恢復(fù)期濃度降低。慢性乙肝呈抗恢復(fù)期濃度降低。慢性乙肝呈抗-Hbc持續(xù)高濃持續(xù)高濃度。度。 低濃度的抗低濃度的抗-Hbc一般為恢復(fù)期或既往感染。一般為恢復(fù)期或既往感染。 4 有利于對(duì)慢性肝炎活動(dòng)性和非活動(dòng)性的有利于對(duì)慢性肝炎活動(dòng)性和非活動(dòng)性的判斷。非活動(dòng)性慢性乙肝各項(xiàng)指標(biāo)相對(duì)穩(wěn)判斷。非活動(dòng)性慢性乙肝各項(xiàng)指標(biāo)相對(duì)穩(wěn)定，活動(dòng)性往往呈進(jìn)行性變化。定，活動(dòng)性往往呈進(jìn)行性變化。q三、三、 血清血清HBV-DNA熒光定量熒光定量PCR測(cè)定可以直接測(cè)定可以直接反映病毒復(fù)制狀態(tài)，具有很多臨床應(yīng)用價(jià)值，但不反映病毒復(fù)制狀態(tài)，具有很多臨床應(yīng)用價(jià)值，但不能完全反映病毒復(fù)制靜息期肝細(xì)胞內(nèi)能完全反映病毒復(fù)制靜息期肝細(xì)胞內(nèi)HBV病毒狀態(tài)。病毒狀態(tài)。HBV-DNA陰性并不完全代表體內(nèi)陰性并不完全代表體內(nèi)HBV已被清除，結(jié)已被清除，結(jié)合合“兩對(duì)半兩對(duì)半”各項(xiàng)指標(biāo)