分子生物學常用技術(簡化版)ppt課件

1、1；.2；.3；.4；.5；.6；.7；.8；.9；.10；.11；.12；.13；.同位素半衰期比活性用途特點32P14. 3 天9120D N A放射性強35S87. 1 天1490D N A / 蛋白3H12. 1 年29D N A / 蛋白分辨率高125I60 天2400蛋白標記簡單14；.15；.16；.17；.18；.標記方法標記物探針缺口平移同位素或半抗原DNA 探針隨機引物標記同位素或半抗原DNA 探針5或3末端標記同位素寡核苷酸探針PCR標記同位素或半抗原DNA 探針體外轉錄同位素或半抗原單鏈 RNA 探針化學標記半抗原均可19；.20；.21；.22；.23；.24；.25

2、；.26；.轉膜轉膜27；.28；.29；.30；.31；.32；.33；.DNADNA的體內復制的體內復制ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35解旋酶解鏈酶DNADNA解解旋解鏈旋解鏈34；.ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35GGAUCG5AUCGCG5引物酶引物酶RNA引物RNA引物DNADNA解解旋解鏈旋解鏈引物引物合成合成DNADNA的體內復制的體內復制35；.ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCG

3、CTATCGCATCGACGCTGGATCG35GGAUCG5AUCGCG5TAGCGCTATCGCATCGACGCT3ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG3DNA聚合酶DNA聚合酶DNA解解旋解鏈旋解鏈引物引物合成合成新鏈新鏈延伸延伸DNA的體內復制的體內復制36；.ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35變性復性加熱退火DNA加熱解鏈37；.模板DNA9438；.55引物1引物2DNA引物39；.引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶40；.第1輪結束94第2輪開始41；.72TaqTaqTaqTaq55

4、42；.第2輪結束43；.重復30輪后230=1,073,741,824模板DNA第1輪擴增第2輪擴增第3輪擴增第4輪擴增 第5輪擴增第6輪擴增理想拷貝數=2n n 循環(huán)次數實際拷貝數=(1+x)n X 平均效率,約為0.85 n 循環(huán)次數 44；.1234522557294時間（min）溫度（）適溫延伸3高溫變性1低溫退火2重復1-3步25-30輪目的DNA片段擴增100萬倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復性新鏈延伸DNA的體外擴增的體外擴增熱循環(huán)DNA解鏈45；.PCR反應體系反應體系4種dNTP混合物 各200 mol/L引物 各0.1-0.5 mol/L模板DNA 0.12 gTaq DNA聚合酶 2.5 UMg2+ 1.5mmol/LDNA的體外擴增的體外擴增46；.47；.48；.DNA聚合酶催化的聚合反應dNTP49；.50；.51；.52；.53；.54；.55；.5356；.57；.58；.59；.60；.61；.62；.63；.64；.65；.66；.67；.68；.69；.70；.71；.72；.73；.74；.75；.76；.77；.78；.79；