試劑與培養(yǎng)基配方

1、PDA 培養(yǎng)基馬鈴薯去皮 200 g ，切成小塊，加水煮爛，紗布過濾，加入 15 g 葡萄糖加熱，加 瓊脂 20 g ，繼續(xù)加熱攪拌混勻，待瓊脂溶解完后，攪拌均勻，稍冷卻后補純水定容 至1000 m L , 121 r高壓滅菌20 min，室溫保存。M Tris-Cl ( PH )Tris g ，純水 400 m L ，先加入 8 m L 濃鹽酸，待溶液冷卻至室溫后再緩 慢加入濃鹽酸直至 PH 值到，加純水定容至500 m L , 121 C高壓滅菌20 min，4 °C保存。M Tris-Cl ( PH )Tris g ，純水400 mL,濃鹽酸20 m L,冷卻至室溫后緩慢加入濃

2、鹽酸調(diào)節(jié)PH值到 ，加純水定容到 500 m L，121C高壓滅菌 20 min ，4C保存。M EDTA ( PH )EDTANa2 2H2O g,純水 400 mL，Na OH10 g,再用 Na OH 溶液緩慢調(diào)節(jié) PH 值到，加純水定容至500 m L , 121C高壓滅菌 20 min , 4C保存。TE緩沖液配方M Tris-Cl ( ) 10 m L ， M EDTA ( ) 1 m L ，加純水定容至 500 m L ， 121C 高壓滅菌20 min , 4C保存。CTABt提液CTAB 20 g， Tris-Cl ( ) 200 m L ， M EDTA ( PH ) 40

3、 m L ， Na Cl g ，加純 水定容至1 L , 121C高壓滅菌20 min，室溫保存。3 M 醋酸鈉 (PHNa Ac - 3H2O，純水70 m L，溶解后加入冰醋酸調(diào)節(jié) p H 值至，加純水定容至100 m L , 121C高壓滅菌 20 min , 4C保存。RNase(10 mg/ml) 配方RNA酶100 mg , TE 10 m L ,沸水浴20 min，分裝于2 m L 離心管-20 C保 存。-TOOTB3 培養(yǎng)基Yeast Extract 3 g,酸水解酪蛋白 3 g,蔗糖200 g,補純水定容至1 L, 121C 高壓滅菌20 min , 4C保存。STC bu

4、ffer蔗糖 100 g , M Tris-CI ( PH ) 50 m L , Ca CI2 2H2O g，補純水定容至 500 mL, 121C高壓滅菌 20 min, 4°C保存。PTCPEG8000 40 g,補 STC 溶液到 100 m L,溶解后用細菌過濾器除菌過濾，4C保存。M KCI 溶液稱量KCl固體g并補水到1 L，溶解后121 C高壓滅菌20 min , 4C保存。Bottom Agar 和 Top AgarYeast Extract 3 g ,酸水解酪蛋白 3 g ,蔗糖 200 g ,補水到 1 L , Bottom Agar 和Top Agar 加入瓊脂

5、的量分別為10 g/L 和15 g/L , 121C高壓滅菌20min , 室溫保存。酶解液稱取崩潰酶 g ，溶壁酶 g ，20 m mol/L KCl ，30C，90 rpm 震蕩培養(yǎng) 30 min ， 離心3500 rpm , 10 min，用細菌過濾器過濾，4C保存。M HClm L HCl ，用超純水定容至 400 m L 。變性液Na Cl g , Na OH 20 g ,加超純水定容至 1000 m L , 121 C 滅菌 20 min。中和液 ( p H )Tris g ，Na Cl g ，加入約 800 m L 的超純水，用濃 HCl 調(diào)節(jié) p H 至 ，加超純水定容至100

6、0 m L , 121 C滅菌20 min。20 X SSC ( p H )二水合檸檬酸鈉 g ，Na Cl g ，加入約 800 m L 的超純水，用濃 HCl 調(diào)節(jié) p H 至，加超純水定容至1000 m L , 121 C滅菌20 min。轉(zhuǎn)膜時需要用超純水稀 釋成 10X SSC。5 X SSC量取250 m L 20 X SSC,用超純水定容至1000 m L。X SSC， % SDS量取100 m L 5 X SSC,用超純水定容至1000 mL,然后加入g SDS充分混勻。雜交緩沖液將64 m L超純水分兩次緩慢加入地高辛雜交顆粒（7 號瓶） 中，在37 C條件下攪拌至緩沖液完全

7、澄清。馬來酸緩沖液稱取馬來酸 g ,NaCI g，加入800 mL純水中，用Na OH固體）調(diào)節(jié)p H至（20 C）, 定容至 1000 m L , 121 °C滅菌 20 min。洗滌緩沖液稱取馬來酸 g ， Na CI g ，加入 800 m L 純水中，用 Na OH （ 固體 ） 調(diào)節(jié) p H 至（20 C ），然后加入 3 m LTween 20，定容至 1000 m L , 121 C滅菌 20 min。檢測緩沖液稱取 Na CI g ， Tris g ，溶解于 800 m L 純水中，用 M HCI 調(diào)節(jié) p H 至 （20 C ），定容至 1000 m L，121 C

8、滅菌 20 min。封阻溶液用1:10的比例用馬來酸緩沖液將10 X 封阻液（6 號管） 稀釋成1 XX 作溶液?？贵w溶液每次使用之前將原始管中的 anti-digoxigenin-AP （ 4 號管 ）1000 rpm 離心 3min,從表面小心吸取所需用量，用封阻液按 1:5000 （ 150 m U/m L ） 的比例稀 釋。YPDYeast Extract 10 g 、Peptone 20 g、Agar 20 g、定容至 900 ml , 121C 滅菌 20 min 后，再加入 100 m L 單獨滅菌的 20 % 的 Dextrose 。PEG 4000 （ 50 % W/V ）PEG4000 25 g,補純水到50 mL, 65C水浴鍋加速溶解，細菌過濾器除菌后，4C保存。1 M Li AcLi Ac g ，加水到100 m L，細菌過濾器除菌后，4C保存。鮭魚精 DNA （ 2 mg/ml ）鮭魚精DNA2 mg加TE 緩沖液至10 mL,振蕩溶解后用注射器劇烈抽吸 30-40 次，沸水浴20 min后馬上置于冰上降溫，分裝 100卩L到m L 離心管中-80 C 保存。培養(yǎng)基無氨基氮源 （ 含硫胺酸 ） g ，細菌級葡萄糖 20 g