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文檔簡(jiǎn)介
1、 專題一第一節(jié)1、基因工程的概念基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行,又叫做DNA重組技術(shù)。優(yōu)點(diǎn)包括目的性強(qiáng)、定向改造生物的性狀、克服遠(yuǎn)源雜交的不親和性。2、基因工程的基本工具包括限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶、載體3、限制性核酸內(nèi)切酶(1)來(lái)源:主要是從原核生物中分離純化出來(lái)的。(2)功能:能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,因此具有專一性。(3)結(jié)果:形成兩種形式DNA片段末端:黏性末端和平末端。4、DNA連接酶的功能是縫合兩個(gè)DNA片段之間的磷酸二酯鍵,與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片
2、段的末端,形成磷酸二酯鍵。5、載體(1)載體具備的條件:能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn),供外源DNA片段插入。具有標(biāo)記基因,供重組DNA的鑒定和選擇。(2)載體包括質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒,最常用的載體是質(zhì)粒,主要來(lái)自細(xì)菌,它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的雙鏈環(huán)狀DNA分子。第二節(jié)1、基因工程的基本操作程序包括目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)和表達(dá)2、目的基因的獲?。?)目的基因是指:編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因(2)目的基因的來(lái)源包括從自然物種直接分離獲得,人工合成獲得。主要是人工合成。(3)基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)(4)
3、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因1)PCR的含義:是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。2)目的:獲取大量的目的基因3)原理:DNA雙鏈復(fù)制4)過程: 第一步:加熱至9095,DNA解鏈為單鏈;第二步:冷卻到5560,引物與兩條單鏈DNA結(jié)合;第三步:加熱至7075,Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成。5)特點(diǎn):指數(shù)形式擴(kuò)增6)材料:目的基因的兩條鏈,引物、Taq酶、四種脫氧核糖核苷酸3、基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的組成包括啟動(dòng)子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因。其中啟動(dòng)子:是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。 4、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞_(1)轉(zhuǎn)化的概念:是目的基因進(jìn)
4、入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。(2)常用的轉(zhuǎn)化方法:將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞:采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,其次還有基因槍法和花粉管通道法等。將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞:最常用的方法是顯微注射技術(shù)。受體細(xì)胞多是受精卵。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞:原核生物作為受體細(xì)胞的原因是繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少 ,最常用的原核細(xì)胞是大腸桿菌,其轉(zhuǎn)化方法是:先用Ca2+處理細(xì)胞,使其成為感受態(tài)細(xì)胞,促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子。(3)篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。4、目的基因的檢測(cè)和表達(dá)DNA分子雜交(DNA-DNA)技術(shù),檢測(cè)目的基因;DNA分子雜交(DNA
5、-RNA)技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄出mRNA;抗原抗體雜交技術(shù)檢測(cè)翻譯成蛋白質(zhì);接種實(shí)驗(yàn)進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定1.植物基因工程:抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物,利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。2.動(dòng)物基因工程:提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物(生物反應(yīng)器)。3.基因治療:把正常的外源基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用。4. 基因診斷:又稱為DNA診斷,是采用基因檢測(cè)的方法來(lái)判斷患者是否出現(xiàn)了基因異?;驍y帶病原體。第三節(jié)1、蛋白質(zhì)工程的概念蛋白質(zhì)工程通過基因修飾或基因合成,對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新的蛋白質(zhì)。(基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì))2、蛋白質(zhì)工程的程序?qū)?/p>
6、題二第一節(jié)1.細(xì)胞工程是通過細(xì)胞水平和細(xì)胞器水平操作,定向改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì),分為 植物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞工程1.細(xì)胞全能性的概念:細(xì)胞具有發(fā)育為完整生物體的潛能。根本原因是細(xì)胞具有本物種全部遺傳信息。不同細(xì)胞的細(xì)胞全能性的大小是不同的 ,一般依次是受精卵>生殖細(xì)胞>植物體細(xì)胞。植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性。2.細(xì)胞分化:一個(gè)細(xì)胞通過分裂分化成一群形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理功能具有穩(wěn)定性差異的細(xì)胞群(組織)的過程。具有持久性和不可逆轉(zhuǎn)性,根本原因是遺傳信息在不同時(shí)間和空間中表達(dá)(基因選擇性表達(dá))。3.植物組織培養(yǎng)技術(shù)(1)流程圖(2)條件:離體無(wú)菌、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素、適宜溫度、PH、陽(yáng)光、
7、蔗糖(維持滲透壓、提供營(yíng)養(yǎng))4.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)(1)概念:用兩個(gè)來(lái)自不同物種植物的體細(xì)胞融合成一個(gè)雜種細(xì)胞,且把雜種細(xì)胞培育成新的 植物體的方法。 (2) 植物體細(xì)胞雜交流程圖(3)去細(xì)胞壁的方法是酶解法,用纖維素酶、果膠酶。融合的原生質(zhì)體類型有3種,要選擇出雜種原生質(zhì)體,誘導(dǎo)融合的方法包括物理方法(離心、振動(dòng)、電刺激)、化學(xué)方法(PEG),新細(xì)胞形成的標(biāo)志是新細(xì)胞壁的形成。獲得細(xì)胞產(chǎn)物,雜種細(xì)胞培養(yǎng)到愈傷組織,獲得雜種植株,要經(jīng)過植物組織培養(yǎng)技術(shù)。技術(shù)優(yōu)點(diǎn)是克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性。(4)雜交細(xì)胞出現(xiàn)的標(biāo)志是新細(xì)胞壁的出現(xiàn)4.植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用包括三大應(yīng)用: 植物繁殖新途徑(微型繁殖、作
8、物脫毒、人工種子),作物新品種的培養(yǎng)、細(xì)胞產(chǎn)物工廠化(1)微型繁殖保持優(yōu)良品種的遺傳特性、高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖(2)作物脫毒常取根尖、莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)獲得(3)人工種子的結(jié)構(gòu)包括人工薄膜、胚狀體或不定芽或頂芽或腋芽(4)作物新品種的培養(yǎng)包括單倍體育種和突變體的利用。單倍體育種的特點(diǎn)是后代穩(wěn)定遺傳,都是純合體; 明顯縮短育種年限第二節(jié)1. 動(dòng)物細(xì)胞工程包括1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(基礎(chǔ))2)核移植技術(shù)3)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(基礎(chǔ))(1)概念:從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖(2) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)流程圖1)取材:動(dòng)物胚胎
9、或幼齡動(dòng)物個(gè)體的器官或組織,細(xì)胞分裂能力強(qiáng)單細(xì)胞獲?。阂鹊鞍酌?、膠原蛋白酶2)相關(guān)問題細(xì)胞貼壁:貼附在瓶壁上的現(xiàn)象接觸抑制:貼壁的細(xì)胞相互接觸時(shí),細(xì)胞停止有絲分裂原代培養(yǎng):1-10代,遺傳物質(zhì)沒有改變傳代培養(yǎng):10代以后,50代后細(xì)胞繼續(xù)分裂的可能發(fā)生基因突變獲得不死性,遺傳物質(zhì)改變(3)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理:細(xì)胞有絲分裂,結(jié)果:獲得細(xì)胞群(4)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件無(wú)菌、無(wú)毒(抗生素)(定期更換培養(yǎng)液,清除代謝廢物)營(yíng)養(yǎng):糖、氨基酸、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素(血清、血漿)溫度和pH:36.5±0.5,7.2-7.4氣體:95%空氣,5%CO2(5)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用1)制備:病毒疫
10、苗、干擾素、單克隆抗體等。2)獲得大量自身的皮膚細(xì)胞,用于植皮。3)用于檢測(cè)有毒物質(zhì)4)用于生理、病理、藥理等方面的研究,3、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物(1)哺乳動(dòng)物核移植的類型可以分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植。(2)選用去核卵(母)細(xì)胞的原因:卵(母)細(xì)胞比較大,容易操作;卵(母)細(xì)胞質(zhì)激發(fā)體細(xì)胞核的全能性。(3)體細(xì)胞核移植的大致過程如右圖:原理是: 動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性,“多莉”是無(wú)性繁殖的結(jié)果.其遺傳特性與白綿綿羊更相似(4)體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用:加速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)良畜群繁育;保護(hù)瀕危物種,增大存活數(shù)量;生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白;作為異種移植的供體;用于組織器官的移植等。
11、(5)體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題:克隆動(dòng)物存在著健康問題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等。4.動(dòng)物細(xì)胞融合(1)動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交,是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞,稱為雜交細(xì)胞。(2)動(dòng)物細(xì)胞融合的流程圖如右1)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有物理法(離心、振動(dòng)、電激)、化學(xué)法(PEG)、生物法(滅活病毒)(滅活病毒法動(dòng)物細(xì)胞才有)2)雜交細(xì)胞形成的標(biāo)志是出現(xiàn)單核3)技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),用胰蛋白酶分散細(xì)胞(3)動(dòng)物細(xì)胞融合的意義:克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性5.單克隆抗體(1)抗體:一種B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。從血清中分離出的抗
12、體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。由漿細(xì)胞合成分泌,與核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、線粒體等細(xì)胞器有關(guān)(2)單克隆抗體通過動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)制備,由雜交瘤細(xì)胞合成分泌,優(yōu)點(diǎn)是大量制備、靈敏度高、特異性強(qiáng)(3)單克隆抗體制備的原理1)利用已免疫的B淋巴細(xì)胞能合成分泌抗體2)利用骨髓瘤細(xì)胞在體內(nèi)體外均能大量繁殖3)通過動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞4)雜交瘤細(xì)胞既能合成分泌單抗抗體也能體外大量繁殖(4)流程圖如右1)小鼠免疫,目的使小鼠產(chǎn)生了漿細(xì)胞;2)提取B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞;3)常用滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合4) 選擇培養(yǎng)基上篩選出融合的雜種細(xì)胞5)2次專一抗體陽(yáng)性檢測(cè) 6) 體外培
13、養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)7)提取大量的單克隆抗體。(5)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):特異性強(qiáng),靈敏度高,并能大量制備。(6)單克隆抗體的作用:作為診斷試劑:準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異,并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合,具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。用于治療疾病和運(yùn)載藥物:主要用于治療癌癥治療,可制成“生物導(dǎo)彈”,也有少量用于治療其它疾病。專題三胚胎工程胚胎工程的概念:(1)包括的主要技術(shù)有體外受精、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(2)操作對(duì)象: 早期胚胎配子第一節(jié)1.精子的發(fā)生(1) 精原細(xì)胞先進(jìn)行有絲分裂后進(jìn)行減數(shù)分裂;變形形成精子(2)精細(xì)胞變形為精子,細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化頂體(高爾基體)頭
14、部(細(xì)胞核)尾部(中心體)線粒體鞘(線粒體)等2.精子獲能3. 卵子的發(fā)生(1) 在胎兒時(shí)期,卵原細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂演變成初級(jí)卵母細(xì)胞,形成卵泡. 減數(shù)分裂第二次分裂是在受精過程中完成的。形成一個(gè)卵子和三個(gè)極體.(2)排卵 (不成熟的卵)(3)排出的卵子要在輸卵管中進(jìn)一步成熟到減數(shù)分裂第二次分裂中期才具備受精能力(4)獲能精子與減數(shù)分裂第二次分裂中期卵子受精,標(biāo)志是出現(xiàn)兩個(gè)極體(5)受精過程的反應(yīng)包括頂體反應(yīng)、透明帶反應(yīng)(防止多精入卵)、卵細(xì)胞膜反應(yīng)。4.早期胚胎發(fā)育(1)胚胎發(fā)育的過程包括受精卵、卵裂期胚、桑椹胚、囊胚、原腸胚(2)胚胎移植一般采用桑椹胚囊胚(3) 囊胚包括外胚層、內(nèi)胚層、囊胚
15、腔,由內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞,滋養(yǎng)層細(xì)胞組成. 內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來(lái)發(fā)育成胎兒的各種組織;而滋養(yǎng)層細(xì)胞將來(lái)發(fā)育成胎膜和胎盤.原腸胚包括外胚層、內(nèi)胚層、原腸腔.5. 胚胎的早期培養(yǎng):。(1)培養(yǎng)液成分:無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等(2)當(dāng)胚胎發(fā)育到適宜的階段時(shí),可將其取出向受體移植或冷凍保存。第二節(jié)1.體外受精(1)卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng): 促性腺激素處理、超數(shù)排卵、沖卵、活體采卵,培養(yǎng)到減數(shù)分裂第二次分裂中期(2)精子采集和獲能:通過假陰道法、手握法、電刺激法采集精子,采用培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法誘導(dǎo)精子獲能.(3)體外受精(4)胚胎的早期培養(yǎng),一般在桑椹胚、囊胚進(jìn)行胚胎移植.第三節(jié)1. 胚胎移
16、植概念:將雌性動(dòng)物的早期胚胎移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動(dòng)物的體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。是生產(chǎn)胚胎的供體和孕育胚胎的受體共同繁殖后代的過程.是胚胎工程最后一道工序.2. 意義:可以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛力3. 胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ):同種動(dòng)物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的(對(duì)供體和受體進(jìn)行同期發(fā)情處理);早期胚胎形成后處于游離狀態(tài),為胚胎的收集提供可能;受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎基本不發(fā)生免疫排斥反應(yīng);移入受體的供體胚胎的遺傳特性孕育過程中不受影響。4.流程圖如右5.胚胎移植的程序:對(duì)供、受體母牛進(jìn)行選擇,用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理;對(duì)供體母牛用促性腺激素,做超數(shù)排卵處理;
17、選擇同種優(yōu)秀公牛配種(有性生殖過程);對(duì)胚胎進(jìn)行收集(此時(shí)胚胎處于游離桑椹胚或囊胚狀態(tài));對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查;胚胎移植(或冷凍保存);檢查受體母牛是否受孕;產(chǎn)下胚胎移植的犢牛。6.胚胎分割概念:用機(jī)械方法將桑椹胚或囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)切割成2、4、8均等分,經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)(可看作是動(dòng)物無(wú)性繁殖或克隆)7. 胚胎干細(xì)胞的移植(1)胚胎干細(xì)胞的含義:由早期胚胎或原始性腺中分離出來(lái)的一類細(xì)胞,又叫ES或EK細(xì)胞。(2)特征:形態(tài)上體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯;功能上具有發(fā)育的全能性,即可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。(體外培養(yǎng)下,ES細(xì)胞可以只增殖不分化)(3)應(yīng)用:用于治療人類疾病,
18、研究體外細(xì)胞分化的材料,用于器官移植專題四生物技術(shù)的安全性和倫理問題第一節(jié)轉(zhuǎn)基因生物的安全性爭(zhēng)論:包括食物安全、生物安全、環(huán)境安全 。1.基因生物與食物安全:反方觀點(diǎn):反對(duì)“實(shí)質(zhì)性等同”、出現(xiàn)滯后效應(yīng)、出現(xiàn)新的過敏原、營(yíng)養(yǎng)成分改變正方觀點(diǎn):有安全性評(píng)價(jià)、科學(xué)家負(fù)責(zé)的態(tài)度、無(wú)實(shí)例無(wú)證據(jù)2.轉(zhuǎn)基因生物與生物安全:對(duì)生物多樣性的影響反方觀點(diǎn):擴(kuò)散到種植區(qū)之外變成野生種類、成為入侵外來(lái)物種、重組出有害的病原體、成為超級(jí)雜草、有可能造成“基因污染”正方觀點(diǎn):生命力有限、存在生殖隔離、花粉傳播距離有限、花粉存活時(shí)間有限3.轉(zhuǎn)基因生物與環(huán)境安全:對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響反方觀點(diǎn):打破物種界限、二次污染、重組出
19、有害的病原微生物、毒蛋白等可能通過食物鏈進(jìn)入人體正方觀點(diǎn):不改變生物原有的分類地位、減少農(nóng)藥使用、保護(hù)農(nóng)田土壤環(huán)境第二節(jié)1.克隆人:如生殖性克隆,治療性克隆 中國(guó)政府的態(tài)度:禁止生殖性克隆,不反對(duì)治療性克隆。四不原則:不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人的實(shí)驗(yàn)。2.試管嬰兒:設(shè)計(jì)試管嬰兒 3.基因身份證:DNA全部的堿基序列 第三節(jié)1.種類:致病菌、病毒、生化毒劑,以及經(jīng)過基因重組的致病菌。2.散布方式:吸入、誤食、接觸帶菌物品、被帶菌昆蟲叮咬等。3.特點(diǎn):致病力強(qiáng)、多數(shù)具傳染性、傳染途徑多、污染面廣、有潛伏期、不易被發(fā)現(xiàn)、危害時(shí)間長(zhǎng)等。4.禁止生物武器公約及中國(guó)政府的態(tài)度:在任何情況下不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲(chǔ)存生物武器,并反對(duì)生物武器及其技術(shù)和設(shè)備的擴(kuò)散。專題五生態(tài)工程1.生態(tài)工程建設(shè)的目的:達(dá)到經(jīng)濟(jì)效益和的生態(tài)效益同步發(fā)展。2.生態(tài)經(jīng)濟(jì):通過實(shí)行循環(huán)經(jīng)濟(jì)的原則,使一個(gè)系統(tǒng)產(chǎn)出的污染物能夠成為本
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