醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)大綱

1、實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的結(jié)構(gòu)及使用方法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 學(xué)習(xí)普通臺式顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部分的功能和使用方法。2. 學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法。二、光學(xué)顯微鏡的使用光學(xué)顯微鏡(microscope)，簡稱光鏡，是生物醫(yī)學(xué)研究及臨床工作中常用的儀器，每個學(xué)生都必須熟悉它的結(jié)構(gòu)和性能，掌握其使用方法。 1. 光學(xué)顯微鏡的主要構(gòu)造 顯微鏡的構(gòu)造主要分為三部分：機(jī)械部分、照明部分和光學(xué)部分 (見下圖) 。 (1) 機(jī)械部分 鏡座：亦稱鏡腳，是顯微鏡的基座，用以支持整個顯微鏡。 鏡柱：是鏡座向上直立的短柱，用以支持其他部分。 鏡臂：是鏡柱向上彎曲的部分，適于手握。有些顯微鏡鏡柱與鏡臂之間有傾斜關(guān)節(jié)。 鏡筒：連在

2、鏡臂前方的鏡筒部分，一般長度為16 cm 。有直筒和斜筒兩種，前者鏡筒上下可調(diào)節(jié)，后者鏡筒是固定的。調(diào)節(jié)器：是裝在鏡臂上的大小兩種螺旋，轉(zhuǎn)動時可使鏡臺升降或使鏡筒上下移動以調(diào)節(jié)焦距。 粗調(diào)節(jié)器 ( 粗螺旋 ) 轉(zhuǎn)動時可使鏡臺或鏡筒在垂直方向以較快速度和較大距離進(jìn)行上下升降，調(diào)節(jié)物鏡與標(biāo)本的距離。通常在低倍鏡下，先用粗調(diào)節(jié)器找到物像。 細(xì)調(diào)節(jié)器 ( 細(xì)螺旋 ) 形狀較小，通常在粗調(diào)節(jié)器的下方或外側(cè)，轉(zhuǎn)動時可使鏡臺或鏡筒緩慢地上下移動，以精細(xì)調(diào)節(jié)焦距，得到清晰的物像。 旋轉(zhuǎn)器 ( 鏡頭轉(zhuǎn)換器 ) ：裝在鏡筒的下端，呈盤狀，下面有34 個物鏡孔供裝置不同放大倍數(shù)的物鏡。載物臺 ( 鏡臺 ) ：用以放

3、玻片樣本，中間有一通光圓孔，稱為鏡臺孔，由此孔可透入集光器傳入的光線。 標(biāo)本移動器：裝于載物臺上，用于前后左右移動玻片標(biāo)本。移動器上有標(biāo)尺，可以測定標(biāo)本大小。 (2) 照明部分 顯微鏡采用電光源，使用時接上電源，在打開電源前，光照亮度旋至最小位置，然后打開電源，旋轉(zhuǎn)亮度旋扭調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度至適宜為止。關(guān)閉電源前，應(yīng)先將光照亮度旋至最小位置。 聚光器 ( 又名集光器，condenser) ：位于載物臺下方的聚光器架上，由聚光鏡和虹彩光闌組成。 聚光鏡：由一片或數(shù)片透鏡組成，其作用相當(dāng)于一凸透鏡，起會聚光線的作用，一般可通過裝在鏡柱旁的聚光器調(diào)節(jié)螺旋的轉(zhuǎn)動而上下移動，上升時視野中光亮度增加，下降時光亮

4、度變?nèi)?。虹彩光闌 ( 又名光圈，diaphragm) ：在聚光鏡下方，由十幾張活動的金屬薄片組成。其外側(cè)伸出一柄，推動此柄可隨意調(diào)節(jié)開孔的大小，以調(diào)節(jié)光量。(3) 光學(xué)部分 目鏡 (ocular) ：位于鏡筒上方，常用的有5X，6X，8X，10X，12X，15X，數(shù)字越大，放大倍率越高，可根據(jù)需要挑選使用。一般裝在鏡筒上的是10 ×目鏡。 物鏡 (objective) ：裝在鏡筒下端的旋轉(zhuǎn)器上，一般有34個物鏡。其中最短的刻有“4 X”或“10X”符號的為低倍鏡，較長的刻有“40X”符號的為高倍鏡；最長的刻有“100X ”符號的為油鏡。 在物鏡上，還有鏡口率 (NA) 的標(biāo)志。鏡口率

5、反映該鏡頭分辨力的大小，其數(shù)字越大，表示分辨力越高。物鏡的工作距離是指顯微鏡處于工作狀態(tài) ( 物像調(diào)節(jié)清楚 ) 時，物鏡的下表面與蓋玻片 ( 蓋玻片的厚度一般為0.17 mm ) 上表面之問的距離。物鏡的放大倍數(shù)愈大，它的工作距離愈小。顯微鏡的放大倍數(shù)是物鏡的放大倍數(shù)與目鏡的放大倍數(shù)的乘積，如物鏡為10X，目鏡為10X，其放大倍數(shù)就為l00。2光學(xué)顯微鏡的使用方法 (1) 低倍鏡的使用方法 檢查：用右手握鏡臂，從鏡箱中將顯微鏡取出，左手托鏡座，平穩(wěn)地放到實(shí)驗(yàn)桌上。使用前應(yīng)先檢查一下顯微鏡各部分結(jié)構(gòu)是否完整，如發(fā)現(xiàn)有缺損或性能不良，要立即報告教師，請求處理。 準(zhǔn)備：將顯微鏡放于自己座位面前實(shí)驗(yàn)桌

6、上稍偏左側(cè)，鏡臺向前鏡筒向后，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器使鏡臺遠(yuǎn)離物鏡，旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡對準(zhǔn)鏡臺孔，這時可聽到轉(zhuǎn)換器邊上固定扣碰上而發(fā)出的聲音，或手上感到一種阻力，說明物鏡的光軸已正對鏡筒的中心。 對光：打開光圈，將聚光器上升。雙眼同時張開向目鏡內(nèi)觀察，打開電源，調(diào)節(jié)光照亮度旋鈕，直到光亮度最適宜為止。 置片和調(diào)整焦距：將玻片標(biāo)本置于鏡臺上，注意使有蓋玻片的一面朝上，利用標(biāo)本移動器將玻片夾住，然后將玻片稍加調(diào)節(jié)，使標(biāo)本對準(zhǔn)鏡臺孔。從側(cè)面注視低倍鏡，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，使鏡臺慢慢上升至最高處為止，再以雙眼自目鏡中觀察，左手轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使鏡臺徐徐下降，直到視野中出現(xiàn)標(biāo)本的物像為止；再轉(zhuǎn)動細(xì)調(diào)節(jié)器，使鏡臺微微上

7、下，調(diào)節(jié)距離，使物像清晰。 (2) 高倍鏡的使用方法 依上法先用低倍鏡找到物像后，將欲觀察的標(biāo)本部分移到視野中央。 眼睛從側(cè)面注視物鏡，用手轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使高倍物鏡對準(zhǔn)標(biāo)本（如果操作正確，此時物鏡與標(biāo)本之間距離正好，不會碰到）。 眼睛向目鏡內(nèi)看，同時只需輕輕轉(zhuǎn)動細(xì)調(diào)節(jié)器使鏡臺微微升降，即得到清晰的物像。 (3) 油鏡的使用方法 同高倍鏡的使用方法 在玻片標(biāo)本上需要觀察的部分加上少許香柏油，然后轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使油鏡對準(zhǔn)標(biāo)本。調(diào)節(jié)油鏡至油鏡的前端浸在香柏油內(nèi)，從目鏡觀察，同時轉(zhuǎn)動細(xì)調(diào)節(jié)器，至視野出現(xiàn)清楚物像為止。油鏡的放大倍數(shù)大，觀察時要用較強(qiáng)的光線。 觀察以后，用粗調(diào)節(jié)器使鏡臺下降(鏡筒上升

8、) ，用擦鏡紙將鏡頭、玻片標(biāo)本上的香柏油擦去，可用少許二甲苯，但不能用力擦，以免損壞鏡頭和標(biāo)本。水分較多的臨時制片，使用油鏡觀察時，應(yīng)事先吸盡水分。 3使用光學(xué)顯微鏡的注意事項(xiàng) (1) 取顯微鏡時必須右手握鏡臂，左手托鏡座，平貼胸前。切勿一手斜提，前后搖擺，以防碰撞和零件跌落。 (2) 擦拭顯微鏡的光學(xué)玻璃部分，必須用擦鏡紙，切忌用其他硬質(zhì)紙張或布等擦拭，以免造成鏡面劃痕。 (3) 切忌用水、酒精或其他藥品浸潤鏡臺或鏡頭。一旦沾染應(yīng)立即進(jìn)行處理，以免污染或腐蝕鏡頭。 (4) 放置玻片標(biāo)本時，應(yīng)將有蓋玻片的一面向上，否則會壓壞標(biāo)本和物鏡。 (5) 觀察時應(yīng)兩眼同時張開，用左眼觀察，用右眼注視繪圖

9、。左手調(diào)節(jié)粗、細(xì)調(diào)節(jié)器，右手調(diào)節(jié)標(biāo)本移動器和繪圖。實(shí)驗(yàn)完畢后，將顯微鏡擦拭干凈。物鏡不要與鏡臺相對，關(guān)閉光圈，適當(dāng)下降聚光器，將反光鏡直立，送回原處。 實(shí)驗(yàn)二 動物細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察幾種細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。二、實(shí)驗(yàn)用品顯微鏡、永久制片。三、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)是很多細(xì)胞的共同點(diǎn)，分化程度較高的細(xì)胞更為明顯，這種合理性是生物漫長進(jìn)化過程所形成的。例如，具有收縮機(jī)能的肌細(xì)胞伸展為細(xì)長型；具有感受刺激和傳導(dǎo)沖動機(jī)能的神經(jīng)細(xì)胞有長短不一的樹枝狀突起；游離的血細(xì)胞為圓形/橢圓形或圓餅形。不論細(xì)胞的形態(tài)如何，細(xì)胞的結(jié)構(gòu)一般分為三大部分：細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。但也有例外，如哺乳類動

10、物紅細(xì)胞成熟時細(xì)胞核消失。四、顯微觀察1. 豬脊髓壓片觀察脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)細(xì)胞在顯微鏡下觀察，染色較深的小細(xì)胞是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。染色為藍(lán)紫色的、大的、有多個突起的細(xì)胞是脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)細(xì)胞，胞體呈三角形或星形，中央有一個圓形細(xì)胞核，內(nèi)有一個核仁。2. 雞血涂片的制備與觀察 取一滴雞血液，滴在載玻片的一端，將另一載玻片的一端呈45°角緊貼在血滴的前緣，待血液沿載玻片的邊沿擴(kuò)展呈線狀后，均勻用力向前推，使血液在載玻片上形成均勻的薄層，晾干，加瑞氏染液23滴，覆蓋整個血膜，0.51min后，滴加等量或稍多點(diǎn)蒸餾水，與染料混勻染色510 min，用清水沖去染液，待自然干燥后或用吸水紙吸干后，即

11、可進(jìn)行鏡檢。顯微鏡下可見雞血細(xì)胞為橢圓形，有核。白細(xì)胞數(shù)量少，為圓形。3. 觀察平滑肌分離裝片低倍鏡下觀察平滑肌分離裝片，可見染成紫紅色呈紡錘形的肌細(xì)胞，細(xì)胞核為橢圓形，位于細(xì)胞的中央，著色很深，在細(xì)胞質(zhì)中有淡紅色的肌原纖維。五、實(shí)驗(yàn)報告1. 為什么使用高倍鏡或油鏡必須從低倍鏡到高倍鏡或從低倍鏡到油鏡的順序進(jìn)行? 2. 如果高倍鏡下找不到物象，應(yīng)從哪些方面找原因，如何解決?3. 繪制在40倍、油鏡下觀察到的雞紅細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)圖，并標(biāo)注。生物學(xué)實(shí)驗(yàn)繪圖方法與要求繪圖是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報告的一種重要形式，其基本要求如下：1. 準(zhǔn)備好3H鉛筆、橡皮、刀、尺子及繪圖紙，將繪圖紙放在觀察

12、物的右邊，紙下不要墊書或紙張。2. 繪圖時，特別注意觀察物體的形狀、各部分的位置、比例和毗鄰關(guān)系。3. 圖的位置、大小要適宜，圖占報告紙左上方2/3的面積，并考慮標(biāo)注的位置。4. 觀察清楚后，選擇典型的細(xì)胞或者組織，左眼看顯微鏡，右眼配合左眼，先用鉛筆在紙上輕輕描出輪廓，使形態(tài)正確，然后再用清晰的線條繪出，線條粗細(xì)要均勻不要重復(fù)。5. 用圓點(diǎn)表示明暗和立體感，點(diǎn)的點(diǎn)大小要均勻，不能涂陰影。6. 圖繪好后，要在圖的右側(cè)注明各部分結(jié)構(gòu)名稱，引線要直而平行，長短適度，各引線不能交叉，各線右端上下對齊，注字要用正楷，不能潦草，要自左向右寫。7. 每一個圖下面要注明圖的名稱、放大倍數(shù)。8. 繪圖紙上所有

13、注字（包括姓名、實(shí)驗(yàn)日期、題目）均用鉛筆書寫，不能用其他筆寫。實(shí)驗(yàn)三 細(xì)胞膜的滲透性一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康娜苜|(zhì)通過簡單擴(kuò)散的跨膜運(yùn)輸了解細(xì)胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度。二、實(shí)驗(yàn)原理生物膜對小分子的跨膜滲透包括水、電解質(zhì)和非電解質(zhì)溶質(zhì)。根據(jù)人工不含蛋白質(zhì)的磷脂雙分子層研究物質(zhì)通透性質(zhì)表明，只要時間足夠長，任何分子都能順濃度梯度擴(kuò)散通過脂雙層。人工合成的脂質(zhì)體主要用來研究細(xì)胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度。但不同分子通過脂雙層擴(kuò)散的速率差別很大，主要取決于它們在脂類和水之間的分配系數(shù)及其分子的大小。分子越小，分配系數(shù)越大，通過質(zhì)膜的速率越快。從右圖可以看出，小的、親脂性的、非極性分子（如O2、C

14、O2、N2、苯）容易溶解于脂雙層，可迅速透過脂雙層。小的、不帶電荷的極性分子（如水、脲、甘油等）如果足夠小時，也能很快透過脂雙層；大的、不帶電荷的極性分子（如葡萄糖，蔗糖等）可以跨膜擴(kuò)散運(yùn)輸，但比較困難；對于帶電荷的分子或離子，由于這些分子的電荷及高的水化度，因此不管多小，都很難透過脂雙層的疏水區(qū)，它們要通過載體介導(dǎo)的主動運(yùn)輸方式跨膜運(yùn)輸。所以人工脂雙層對水的透性比那些直徑小的多的Na+和K+大109倍。與人工脂雙層膜不同的是，生物膜不但允許水和非極性分子借簡單的物理擴(kuò)散作用透過，還允許各種極性分子，如離子、糖、氨基酸、核苷酸及很多細(xì)胞代謝產(chǎn)物通過特有的機(jī)制通過。如果將紅細(xì)胞放置在各種溶液中，

15、根據(jù)紅細(xì)胞質(zhì)膜對各種溶質(zhì)的滲透性不同，有的溶質(zhì)可滲入，有的溶質(zhì)不能滲入。即使能滲入，速度也有差異?？赏ㄟ^觀察紅細(xì)胞溶血現(xiàn)象時間的不同來記錄滲入速度。血紅蛋白從紅細(xì)胞中逸出的現(xiàn)象稱為溶血現(xiàn)象。滲入紅細(xì)胞的溶質(zhì)能提高紅細(xì)胞滲透壓，使水進(jìn)入紅細(xì)胞，引起溶血及細(xì)胞膜破裂。此時光線較容易通過溶液，使溶液呈現(xiàn)透明即為溶血。由于溶質(zhì)透入速度不同，溶血時間也不同。因此，可通過溶血現(xiàn)象來測量各種物質(zhì)通透性的差別。三、實(shí)驗(yàn)用品1. 器材：50 mL小燒杯，10 mL移液管，試管，試管架。2. 材料：動物血液3. 試劑：0.17 mol/L氯化鈉、0.17 mol/L氯化銨、0.32 mol/L醋酸銨、0.17 m

16、ol/L硝酸鈉、0.12 mol/L草酸銨、0.12 mol/L硫酸鈉、0.32 mol/L葡萄糖、0.32 mol/L甘油、0.32 mol/L乙醇、0.32 mol/L丙酮四、實(shí)驗(yàn)方法1. 動物血液的稀釋：取2份血液，加入8份0.17mol/L氯化鈉溶液混勻即可。2. 低滲溶液：取試管一支，加入5 mL蒸餾水，再加入1mL稀釋的血液，注意觀察溶液顏色的變化，由不透明的紅色逐漸澄清，說明紅細(xì)胞發(fā)生破裂造成100紅細(xì)胞溶血，使光線比較容易透過溶液。3. 紅細(xì)胞的滲透性：取試管一支，加入0.17 mol/L氯化鈉溶液5 mL，再加入1mL稀釋的血液，并輕輕搖動，注意顏色有無變化？有無溶血現(xiàn)象？為

17、什么？取試管一支，加入0.17 mol/L氯化銨溶液5 mL，再加入1mL稀釋的血液，并輕輕搖動，注意顏色有無變化？有無溶血現(xiàn)象？若發(fā)生溶血，記下時間(自加入稀釋血液到溶液變成紅色透明澄清所需時間)。分別在另外幾種溶液中進(jìn)行同樣的實(shí)驗(yàn)。步驟同上。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論與分析將觀察到的現(xiàn)象列入下表，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較和分析。編號處理是否溶血時間結(jié)果分析15 mL NaCl1 mL稀釋血液25 mL NHCl1 mL稀釋血液35 mL NHAc1 mL稀釋血液45 mL NaNO31 mL稀釋血液55 mL草酸銨1 mL稀釋血液65 mLNa2SO41 mL稀釋血液75 mL葡萄糖1 mL稀釋血液85

18、mL甘油1 mL稀釋血液95 mL乙醇1 mL稀釋血液105 mL丙酮1 mL稀釋血液實(shí)驗(yàn)四、ABO血型鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)ABO血型鑒定的原理、方法以及交叉配血方法。二、實(shí)驗(yàn)原理血型就是紅細(xì)胞膜上特異抗原的類型。在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上抗原分A和B兩種，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。A抗原加抗A抗體或B抗原加抗B抗體，則產(chǎn)生凝集現(xiàn)象。血型鑒定是將受試者的紅細(xì)胞加入標(biāo)準(zhǔn)A型血清（含有抗A抗體）與標(biāo)準(zhǔn)B型血清（含有抗B抗體）中，觀察有無凝集現(xiàn)象，從而測知受試者紅細(xì)胞膜上有無A或/和B抗原。在ABO血型系統(tǒng)，根據(jù)紅細(xì)胞膜上是否含A、B抗原而分為A、B、AB、O四種類型。ABO血型中的抗原和

19、抗體血 型紅細(xì)胞膜上所含的抗原血清中所含的抗體O無A和B抗A和抗BAA抗BBB抗AABA和B無抗A和抗B 交叉配血示意圖交叉配血是將受血者的紅細(xì)胞與血清分別同供血者的血清與紅細(xì)胞混合，觀察有無凝集現(xiàn)象（見圖）。輸血時，一般主要考慮供血者的紅細(xì)胞不要被受血者的血清所凝集；其次才考慮受血者的紅細(xì)胞不被供血者的血清所凝集。前者叫交叉配血試驗(yàn)的主側(cè)（也叫直接配血），后者叫交叉配血的次側(cè)（也叫間接配血）。只有主側(cè)和次側(cè)均無凝集，稱為“配血相合”，才能進(jìn)行輸血；如果主側(cè)凝集，稱為“配血不合”或“配血禁忌”，絕對不能輸血；如果主側(cè)不凝集，而次側(cè)凝集，可以認(rèn)為“基本相合”，但輸血要特別謹(jǐn)慎，不宜過快過多，密切

20、注視有無輸血反應(yīng)。三、實(shí)驗(yàn)用品1儀器：顯微鏡，離心機(jī)2器材：采血針，玻片，竹簽，棉球3試劑：標(biāo)準(zhǔn)A、B血清，75酒精，碘酒四、實(shí)驗(yàn)步驟和觀察指標(biāo) （一） ABO血型鑒定1. 玻片法（1）取潔凈玻片一塊，分別各滴入A及B標(biāo)準(zhǔn)血清2滴。（2）細(xì)胞懸液制備：從指尖或耳垂取血一滴，加入含1mL生理鹽水的小試管內(nèi)，混勻，即得約5紅細(xì)胞懸液。采血時應(yīng)注意先用75酒精消毒指尖或耳垂。（3）用滴管吸取紅細(xì)胞懸液，分別各滴一滴于玻片兩端的血清上，注意勿使滴管與血清相接觸。（4）用竹簽兩頭分別混合，攪勻。（5）1030 min后觀察結(jié)果。先用肉眼看有無凝集現(xiàn)象，肉眼不易分辨時，則在低倍顯微鏡下觀察，如有凝集反應(yīng)，

21、可見紅細(xì)胞聚集成團(tuán)。（6）判斷血型，根據(jù)被試者紅細(xì)胞是否被A、B型標(biāo)準(zhǔn)血清所凝集，判斷其血型。 2. 試管法（1）取試管2只，分別標(biāo)明A、B字樣，分別加入相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)血清2滴，各管加入受試者的紅細(xì)胞懸液12滴搖勻。（2）將上述二試管用1000 rpm離心1min。（3）取出小試管，輕彈底部，如沉淀物呈團(tuán)塊狀浮起為凝集，呈散在煙霧狀上浮進(jìn)而恢復(fù)原混懸狀為無凝集。（二） 交叉配血1. 玻片法 （1）用碘酒、75%酒精棉球消毒皮膚后，用消毒干燥注射器抽取受血者及供血者靜脈血各2mL，各用一滴制備紅細(xì)胞懸液，分別標(biāo)明供血者與受血者。余下血分別注入干凈小試管，也標(biāo)明供血者與受血者，待其凝固后析出血清備用。（

22、2）左兩凹玻片左側(cè)標(biāo)上“主”（即主側(cè)）；右側(cè)標(biāo)上“次”（即次側(cè)）。主側(cè)滴入供血者紅細(xì)胞懸液一滴和受血者血清一滴；次則滴入受血者紅細(xì)胞懸液一滴和供血者血清一滴。 分別用竹簽混勻。（3）1530 min后，觀察結(jié)果。如兩側(cè)均無凝集現(xiàn)象，可多量輸血；如主側(cè)無凝集而次側(cè)有凝集只可考慮少量輸血；如主側(cè)凝集則不能輸血。2. 試管法取二試管，分別注明“主”、“次”字樣，管內(nèi)所加內(nèi)容物同玻片法，混勻后1000 rpm離心1min，取出觀察結(jié)果。 注意事項(xiàng)1. 所用雙凹玻片的試管實(shí)驗(yàn)前必須清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象。2. A及B標(biāo)準(zhǔn)血清絕對不能相混，所用滴管上貼標(biāo)簽標(biāo)明A及B，紅細(xì)胞懸液滴管頭不能接觸標(biāo)準(zhǔn)血清

23、液面，用竹簽一端去混勻一側(cè)就不能再去接觸另一側(cè)。思考題1. 在無標(biāo)準(zhǔn)血清情況下已知某人為A或B型，能否用其血去檢查未知血型？如何作？2. 交叉配血時為何主側(cè)不凝集而次側(cè)凝集時，可以少量輸血？還需注意些什么？3. 紅細(xì)胞凝固、凝集、聚集三者有何不同？4. 根據(jù)你的血型，判斷你能接受何種血型并且能夠給何種血型供血？5. O型血人又被稱為“萬能供血者”，試根據(jù) ABO 血型分型做出你對這一說法的理解。實(shí)驗(yàn)五、血涂片制作一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私庋科闹谱髟砗头椒ā６?、?shí)驗(yàn)原理涂片技術(shù)是制備血液樣品最常用的技術(shù)。將血液樣品制成單層細(xì)胞的涂片標(biāo)本，染色后可對血液中各種細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行形態(tài)觀察、細(xì)胞計數(shù)、細(xì)胞大小測

24、量等工作。 瑞氏染料是由酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的復(fù)合染料。美藍(lán)（又名亞甲藍(lán)，mehylene blue）為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)，通常為氯鹽，即氯化美藍(lán)，美藍(lán)容易氧化為一,二,三甲基硫堇等次級染料（即天青）市售美藍(lán)中部份已被氧化為天青。伊紅（又名曙紅，cosin）通常為鈉鹽即伊紅化鈉。美藍(lán)和伊紅水溶液混合后產(chǎn)生一種憎液性膠體伊紅化美藍(lán)中性沉淀，即瑞氏染料。瑞氏染料溶于甲醇后，又重新解離為帶正電的美藍(lán)和帶負(fù)電的伊紅離子。各種細(xì)胞和細(xì)胞的各種成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣，因而染色后呈現(xiàn)不同的色彩。如血紅蛋白嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合染成粉紅

25、色；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合染成藍(lán)色或紫色；中性顆粒成等電狀態(tài)，與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染成紫紅色。三、實(shí)驗(yàn)用品器材：醫(yī)用一次性采血針、酒精棉球、鑷子、經(jīng)脫脂洗凈的載玻片、雙凹片（推片）。試劑：Wrights 染液（配制方法：Wrights 色素粉末0.1 g，溶于60 ml 甲醇）。四、血液涂片的制作1. 需載玻片2張，分別稱為玻片1和玻片2（推片）。2. 用玻片1一端接約3 mm直徑的血滴，將此玻片1保持水平。3. 取另一邊緣平整的載玻片2（推片），將其前端放在血滴前，與片1保持30°40°角并稍向后移與血滴接觸，即見血液沿片2下緣散開。4

26、. 當(dāng)血液展開至整個推片的寬度時，立刻將推片與載玻片呈30°40°角，邊輕壓推片邊將推片向前推動涂抹，至血液鋪完為止。5. 揮動片1使血膜風(fēng)干，用蠟筆將血膜邊緣圈畫備染色。6. 一張良好的血片，要求厚薄適宜，頭、體、尾分明。7. 靜置3060 min后較利于觀察紅細(xì)胞的形態(tài)。 注意事項(xiàng)：1. 如標(biāo)本本身太短，可觀察的部分會受局限，故血膜盡量涂得要長。2. 載玻片與推片的角度越小、血液越薄；涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹貧血病人的血液時，將推片稍豎起（不是30°而是35°40°左右），以較快的速度推比較好，而對紅細(xì)胞增高的病人則相反。3. 如用力過

27、猛白細(xì)胞容易破損。五、血液涂片的染色1. 將待染涂片平放于染色架上。2. 用滴管將染液滴于涂片上，覆蓋整張涂片，放置13 min。3. 加入等量的磷酸緩沖液或蒸餾水，與染液混勻?？捎米靵砘剌p輕吹之，使之混勻。室溫下染色510 min（白細(xì)胞數(shù)多或骨髓標(biāo)本時間應(yīng)長一些，如2030 min）。4. 染色結(jié)束時，用蒸餾水或緩沖液洗將涂片上的染液直接沖掉，至血液膜呈淡紅色。5. 甩干或晾干玻片后鏡檢。在做好的血涂片的一端貼上標(biāo)簽，注明專業(yè)、姓名，存于玻片盒備用。實(shí)驗(yàn)六、細(xì)胞組分的化學(xué)反應(yīng)一、目的要求熟悉細(xì)胞DNA和RNA的分布狀況，了解細(xì)胞核染色的一般原理、方法及其意義。二、實(shí)驗(yàn)原理甲基綠-派洛寧混合

28、染液處理細(xì)胞后，可使細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA顯示不同的顏色。用核酸水解酶（DNase 和 RNase）作為“酶水解對照”研究證實(shí)：甲基綠所染者為 DNA，可被脫氧核糖核酸酶（DNase）消化而特異性失染。派洛寧所著色者為RNA，可經(jīng)核糖核酸酶（RNase）消化使原派洛寧陽性物質(zhì)失染。因而甲基綠-派洛寧染色成為一種顯示核糖核酸的組織化學(xué)方法。甲基綠染DNA和派洛寧染RNA不是化學(xué)作用，而是這兩種染料與DNA和RNA聚合程度不同，即DNA和RNA對這兩種堿性染料有不同的親和力，所以是選擇性染色。DNA分子為高聚分子，甲基綠分子有兩個相對的正電荷。甲基綠對聚合程度高的DNA 分子有強(qiáng)的親和力，使DNA染

29、成綠色；而RNA為低聚分子，派洛寧有一個正電荷。派洛寧僅與聚合程度低的RNA結(jié)合，使RNA染成紅色。三、實(shí)驗(yàn)用品材料：雞血（蛙血）儀器：光學(xué)顯微鏡，載玻片，鑷子等試劑：Unna 染色液（甲基綠-哌洛寧G） 四、實(shí)驗(yàn)方法涂片：取一滴雞血置于玻片的一端，一手持玻片，另一只手再拿一邊緣平滑的玻片，將一端從血滴前方后移接觸血滴，血滴即沿推片散開。然后使推片與載片夾角保持 3045°平穩(wěn)地向前移動，載玻片上保留一薄層血膜；固定：將晾干的血涂片浸入70%乙醇中，固定510 min，取出后室溫晾干； 染色：把血涂片平放在實(shí)驗(yàn)臺上，加23滴甲基綠-派洛寧混合染液于血涂片上，將染液鋪平，染色1520

30、min；水洗：用細(xì)流水沖洗血涂片數(shù)秒鐘，然后將玻片立于吸水紙上，吸去多余的水分；觀察：蓋上蓋玻片在顯微鏡下觀察，細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)各被染成什么顏色？五、實(shí)驗(yàn)報告屏幕截取圖片，并標(biāo)注圖片名稱、放大倍數(shù)。實(shí)驗(yàn)七、細(xì)胞器的光鏡切片觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察細(xì)胞器中光學(xué)顯微鏡下的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1. 高爾基復(fù)合體的觀察脊神經(jīng)節(jié)以硝酸鈷固定，再經(jīng)硝酸銀染液浸染制成永久制片。 高爾基復(fù)合體能與硝酸銀作用，并具有還原能力，使硝酸銀呈現(xiàn)棕黑色沉淀顏色反應(yīng)，因而顯示高爾基復(fù)合體的形態(tài)和位置。 觀察方法：先用低倍鏡觀察，尋找圓形或橢圓形的被染成黃色或淡黃色的細(xì)胞；然后轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察，中央透亮區(qū)為核所在位置，核周圍棕

31、褐色扭曲呈線狀、顆粒狀結(jié)構(gòu)即為高爾基復(fù)合體。 2. 線粒體的觀察 動物的肝、腎細(xì)胞富含線粒體，以重鉻酸鉀固定，再經(jīng)鐵蘇木精染色，制成永久制片。 線粒體有雙層膜結(jié)構(gòu)，蛋白、磷脂含量很高，有大量羧基和磷酸基等陰離子基團(tuán)，含陽離子的鐵蘇木精易與其結(jié)合，使線粒體顯示蘭色反應(yīng)。 觀察方法：先用低倍鏡觀察，可見許多被染成深蘭色的細(xì)胞，選擇顏色清晰，密集程度較低的區(qū)域移至視野中央；然后轉(zhuǎn)換至高倍鏡觀察，細(xì)胞核為12個圓形的不著色的區(qū)域（有深蘭色的核仁），核周圍分布有許多深蘭色顆?；驐U狀小體，即線粒體。 三、實(shí)驗(yàn)報告繪制在顯微鏡下觀察到的線粒體、高爾基體的形態(tài)結(jié)構(gòu)圖，并加以標(biāo)注。實(shí)驗(yàn)八、人血涂片的觀察一、血涂

32、片的觀察方法（一）肉眼觀察在觀察染色標(biāo)本時，首先用肉眼對顏色進(jìn)行觀察。如果是正常的末梢血液則呈粉紅色，白血病時白細(xì)胞高度增加或骨髓瘤的高球蛋白血癥等情況下，血涂片會帶有藍(lán)色，此時應(yīng)意識到為異常標(biāo)本。（二）高倍鏡下觀察首先觀察血涂片制備和染色是否良好、細(xì)胞分布是否均勻，同時可估計白細(xì)胞數(shù)量增減情況。最后對血涂片的體尾交界的區(qū)域進(jìn)行觀察，選擇細(xì)胞分布均勻不重疊、標(biāo)本不太厚容易觀察的地方進(jìn)行油鏡觀察。（三）油鏡下觀察將實(shí)驗(yàn)五染好色的涂片放置在顯微鏡下觀察，依次在低倍（×10）、高倍（×40）、油鏡（×100）下觀察，邊移動視野邊觀察下列各項(xiàng)：1. 染色是否良好如果血涂片

33、染色確實(shí)不好，應(yīng)重新染色。2. 觀察紅細(xì)胞形態(tài)（1）有無人為造成的變形，此外有時載玻片上的堿性物質(zhì)的溶出（玻璃效應(yīng)）會導(dǎo)致紅細(xì)胞呈嚴(yán)重的棘形紅細(xì)胞。如固定不良（固定液中含有水分時）會導(dǎo)致呈面包圈形紅細(xì)胞，從而無法觀察紅細(xì)胞的形態(tài)。（2）大小如何，是大細(xì)胞還是小細(xì)胞，有無紅細(xì)胞大小不一。（3）形態(tài)如何，注意有無畸形紅細(xì)胞、球形紅細(xì)胞、橢圓形紅細(xì)胞、靶形紅細(xì)胞、口形紅細(xì)胞（唇形紅細(xì)胞）、中心淡染色紅細(xì)胞、棘形紅細(xì)胞、膽狀紅細(xì)胞、皺縮紅細(xì)胞、淚滴狀紅細(xì)胞、破碎紅細(xì)胞及鐮狀紅細(xì)胞等。（4）是否有染色性的變化，有無嗜多色性紅細(xì)胞，中心淡染紅細(xì)胞。（5）紅細(xì)胞內(nèi)有無異常。觀察是否有嗜堿性點(diǎn)彩、豪-喬小體、

34、卡波環(huán)狀體紅細(xì)胞、幼紅細(xì)胞、帕彭海姆氏小體和瘧原蟲的出現(xiàn)。（6）有關(guān)大小不一、畸形和嗜多色性，可分為輕度+、中度+、高度三個級別。3. 觀察白細(xì)胞形態(tài)（1）與紅細(xì)胞比較，判斷白細(xì)胞數(shù)是否正常，是否增加或減少。紅細(xì)胞數(shù)/白細(xì)胞數(shù)約為500:1。（2）有關(guān)白細(xì)胞的種類，要觀察大量的白細(xì)胞后才可判斷是否異常，然后計算白細(xì)胞的百分率。在日常檢查中，一般只計算100個，但是發(fā)現(xiàn)異?；虬准?xì)胞有增加時，盡量增加到200個。計算的白細(xì)胞數(shù)越多，白細(xì)胞百分率的可信度越高。4. 觀察血小板形態(tài)（1）通過與紅細(xì)胞的比較，判斷血小板數(shù)量是否正常，是增加或減少。正常情況下每1520個紅細(xì)胞中有1個血小板。（2）注意大小

35、的變化。（3）觀察未加抗凝劑而直接從毛細(xì)血管采集的標(biāo)本時，要注意血小板的凝集性（觀察由若干血小板凝集的現(xiàn)象。如果呈散在狀，則懷疑為血小板無力癥）。（4）觀察有無寄生蟲，當(dāng)白細(xì)胞減少或白細(xì)胞分類中單核細(xì)胞增多時，應(yīng)注意觀察紅細(xì)胞內(nèi)有無瘧原蟲。二、各種血細(xì)胞的形態(tài)特征紅細(xì)胞：淡紅色，無核的圓形細(xì)胞，因紅細(xì)胞為雙凹形，故邊緣部分染色較深，中心較淺，直徑78 µm。 顆粒白細(xì)胞：1. 嗜中性顆粒白細(xì)胞：體積略大于紅細(xì)胞，胞核呈藍(lán)紫色，染色質(zhì)呈塊狀，著色深，成熟嗜中性白細(xì)胞核多為分葉狀，一般可分25葉，常見3葉，幼稚嗜中性白細(xì)胞胞核呈桿狀；胞質(zhì)中含許多細(xì)小顆粒，嗜天青顆粒（溶酶體）、特殊（分泌

36、）顆粒，Wright染色呈紫紅色；直徑1012 µm。 2. 嗜酸性顆粒白細(xì)胞：略大于嗜中性白細(xì)胞，細(xì)胞核染成紫色，通常為2葉，胞質(zhì)充滿嗜酸性大圓顆粒，被染成鮮紅色；直徑1015 µm。 3. 嗜堿性顆粒白細(xì)胞：體積略小于嗜酸性白細(xì)胞，光鏡下胞核分葉或呈S型，染色淺；胞質(zhì)內(nèi)含有嗜堿性顆粒，大小不等，分布不均，染成藍(lán)紫色，可覆蓋在核上，光鏡下顆粒呈密度不一的細(xì)粒狀，或呈致密的板層狀；直徑1011 µm。無顆粒白細(xì)胞1. 淋巴細(xì)胞：可觀察到中、小型兩種。小淋巴細(xì)胞與紅細(xì)胞大小相似，圓形，核致密，染成深紫色，周圍僅一薄層嗜堿性染成淡藍(lán)的細(xì)胞質(zhì)。中淋巴細(xì)胞較大，核圓形，一

37、側(cè)常有小凹陷，染色深；直徑68 µm。 2. 單核細(xì)胞：胞體大，呈圓形或橢圓形；胞核形態(tài)多樣，可呈卵圓形、腎形或馬蹄形，核常偏位，染色質(zhì)顆粒細(xì)而松散，故著色淺，染色略淺于淋巴細(xì)胞的核；胞質(zhì)較多，呈弱嗜堿性常染成藍(lán)色，內(nèi)含許多細(xì)小的嗜天青顆粒；直徑1420 µm。 血小板：外形呈雙凸扁盤狀，大小不一，受刺激時可伸出突起，為不規(guī)則小體，血涂片上常呈星形或多角形，直徑23 µm，其周圍部分淺藍(lán)色，中央有細(xì)小的紫紅色顆粒，聚集成群。 注意事項(xiàng)1. 染色涂片水沖洗后，應(yīng)在空氣中自然干燥或風(fēng)干，不可用火烤干。2. 染液量要充足，勿使染液蒸發(fā)干燥。3. 細(xì)胞染色過淺或過深，待標(biāo)

38、本干燥后，立即用瑞氏染液或甲醇重新染色數(shù)秒或數(shù)分鐘。4. 保存過久的細(xì)胞涂片，細(xì)胞染色會退色，可重新染色。5. 新鮮涂片應(yīng)立即染色。三、實(shí)驗(yàn)報告1. 采集觀察到的各類細(xì)胞的圖片，并加以標(biāo)注。2. 比較分析其差異(紅細(xì)胞呈桔紅色，白細(xì)胞核紫色，嗜酸顆粒細(xì)胞鮮紅色，嗜堿顆粒細(xì)胞藍(lán)紫色，中性顆粒細(xì)胞紫或紫紅色，淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞漿藍(lán)灰色，血小板紫色)。實(shí)驗(yàn)九、植物細(xì)胞骨架的制片技術(shù)及觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 觀察光鏡下細(xì)胞骨架的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)。2. 了解微絲的顯示方法。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞質(zhì)骨架（cytoskeleton）指真核細(xì)胞中的蛋白纖維的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。細(xì)胞質(zhì)骨架包括微絲（microfilament）、微管

39、（microtubule）和中間纖維（intemediate filament）。微絲確定細(xì)胞表面特征，使細(xì)胞能夠運(yùn)動和收縮。微管確定膜性細(xì)胞器的位置和作為膜泡運(yùn)輸?shù)膶?dǎo)軌。中間纖維使細(xì)胞具有張力和抗剪切力。其它骨架成分：細(xì)胞核骨架、 細(xì)胞膜骨架、細(xì)胞外基質(zhì)。用Triton X-100溶液處理細(xì)胞時，可使細(xì)胞質(zhì)膜中和細(xì)胞質(zhì)中的全部脂質(zhì)和部分蛋白質(zhì)被溶解抽提，但細(xì)胞骨架蛋白質(zhì)不受破壞而被保存。經(jīng)固定和考馬斯亮蘭（非特異性蛋白質(zhì)染料）染色后，可在光鏡下觀察到由微絲組成的纖維束（藍(lán)色）。三、實(shí)驗(yàn)用品1. 材料：洋蔥2. 試劑：0.2 M pH 7.3 磷酸緩沖液（PB），0.01 M 磷酸鹽緩沖液（P

40、BS）（0.2 M PB 50 ml 加0.15 M 氯化鈉50 ml 雙蒸水定至1L），M-緩沖液（50 mM 咪唑，0.5 mM 氯化鎂，50 mM 氯化鉀，1mM EGTA 乙二醇-雙-（2-氨基乙基醚）四乙酸，0.1 mM EDTA（乙二胺四乙酸），1 mM DTT（二硫蘇糖醇），4 mM 甘油），1% Triton X-100（用M-緩沖液配制），3% 戊二醛（用0.01 M PBS 配制），0.2% 考馬斯亮藍(lán)R250（用少許無水乙醇溶解，然后用12.5%三氯醋酸定容，裝瓶備用）3. 用具：燒杯、剪刀、鑷子、手術(shù)刀、滴管、稱量瓶、顯微鏡、載玻片等。四、實(shí)驗(yàn)方法1. 用鑷子撕取若干片

41、洋蔥鱗片的內(nèi)表皮（不要用靠近鱗片邊緣的表皮），剪成0.5×0.5 cm 大小，放入容器中，加入PBS，浸泡3 min；2. 吸去磷酸鹽緩沖液，加入1 % Triton X-100 ，處理30 min（28恒溫箱）。然后用M-緩沖液洗35次，每次5 min；3. 再加入3 % 戊二醛液，固定20 min（28恒溫箱）；然后用PBS 洗35次，每次5 min；4. 然后用0.2 % 考馬斯亮藍(lán)染色20 min（在載玻片上進(jìn)行）；之后用PBS沖洗至水無色；5. 蓋上蓋玻片，吸干水分，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。五、實(shí)驗(yàn)報告 采集細(xì)胞骨架圖片，并加以標(biāo)注。實(shí)驗(yàn)十、細(xì)胞有絲分裂標(biāo)本的制備與形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)?/p>

42、的通過標(biāo)本制備和觀察了解生物體細(xì)胞有絲分裂形態(tài)特征及分裂過程。二、實(shí)驗(yàn)用品 1. 材料：洋蔥根尖壓片 2. 器材和儀器：顯微鏡、擦鏡紙、解剖針、鑷子、載玻片、蓋玻片、吸水紙、培養(yǎng)皿3. 試劑：70乙醇、改良堿性品紅染液三、實(shí)驗(yàn)原理 有絲分裂是真核生物體細(xì)胞的基本增殖方式。通過DNA的復(fù)制，以及染色體的分裂，實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)平均分配到兩個新的子細(xì)胞。染色體復(fù)制一次，細(xì)胞分裂一次，結(jié)果1個細(xì)胞變?yōu)?個細(xì)胞，且兩個子細(xì)胞與母細(xì)胞遺傳物質(zhì)在質(zhì)量和數(shù)量上完全一致。其意義在于，維持了個體的正常生長和發(fā)育；保證了物種遺傳的連續(xù)性和穩(wěn)定性。植物細(xì)胞的細(xì)胞周期與動物細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞周期非常相似，含有 G1 期、S 期

43、、G2 期和 M 期四個時期。植物細(xì)胞不含中心體，但在細(xì)胞分裂時可以正常組裝紡錘體。植物細(xì)胞以形成中板的形式進(jìn)行胞質(zhì)分裂。四、實(shí)驗(yàn)方法1. 取材：將洋蔥置于盛有水的小燒杯上，使其鱗莖浸入水中，室溫培養(yǎng)35 d，每天換水。待其根尖長到23 cm 時，切取1 cm 左右的根尖。2. 預(yù)處理：將根尖浸入蒸餾水中，放置冰箱（4）中處理24 h。減緩細(xì)胞的有絲分裂，使處在分裂期的細(xì)胞數(shù)量增多，便于觀察。也可用秋水仙素進(jìn)行處理。3. 固定：取出材料，放入卡諾氏固定液中固定3 h 左右。固定液用量約為材料體積的 15倍以上，若固定不好，會影響以后的步驟。洋蔥根尖細(xì)胞有絲分裂4. 解離：將固定的根尖用清水漂洗

44、幾次，然后用1 mol/L 的HCl在60處理30 min 左右?；蛴? mol/L的HCl室溫處理510 min。5. 染色和制片：將解離后的根尖用水漂洗3次，放在載玻片上，用鑷子輕輕搗碎。用堿性品紅染色510 min 后，用吸水紙吸去多余的染料，蓋上蓋玻片，用鉛筆或橡皮頭輕輕敲打，使細(xì)胞彼此離散。6. 鏡檢：在顯微鏡下觀察根尖細(xì)胞。如果細(xì)胞染色過深，可加上45% 的醋酸（或95%乙醇），進(jìn)行分色處理。分色時，一般是在蓋玻片的一邊滴加45% 的醋酸，另一邊用吸水紙吸去多余的液體。如果細(xì)胞重疊比較嚴(yán)重，可用橡皮頭再次輕輕敲打，直至細(xì)胞在玻片上呈淡淡的云霧狀為止。注意：敲打時不要使細(xì)胞在玻片上發(fā)

45、生扭動，而使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化。將洋蔥根尖壓片（切片）標(biāo)本先在低倍鏡下觀察，尋找生長區(qū)，這部分的細(xì)胞分裂旺盛，大多處于分裂狀態(tài)，細(xì)胞形狀呈方形。換高倍鏡仔細(xì)觀察不同分裂時期的細(xì)胞形態(tài)特征。鏡檢觀察有絲分裂各期染色體形態(tài)：間期：從細(xì)胞在一次分裂結(jié)束之后到下次分裂之前的時期。處于分裂間期的細(xì)胞在形態(tài)上沒有什么變化，但染色體的復(fù)制以及多種蛋白質(zhì)的合成都發(fā)生在這一時期。前期：染色質(zhì)開始濃縮、凝集、折疊和螺旋化形成染色體，分裂極確立，紡錘體開始形成，核仁解體，核膜消失。中期：染色體達(dá)到最大程度的凝聚，并排列在細(xì)胞中央的赤道面上，形成赤道板。后期：姐妹染色單體在紡錘體的牽引下相互分離，并分別向兩極移動。末期

46、：染色體分別到達(dá)兩極，核膜重新形成，染色體伸展延長，最后成為染色質(zhì)，核仁重新出現(xiàn)。五、實(shí)驗(yàn)報告1. 在顯微鏡下觀察、截取洋蔥根尖有絲分裂中分裂前期、中期、后期、末期的圖片，并加以標(biāo)注。2. 與動物細(xì)胞有絲分裂特征比較，找出植物細(xì)胞有絲分裂的特點(diǎn)和兩者的區(qū)別。實(shí)驗(yàn)十一、蝗蟲精巢減數(shù)分裂壓片標(biāo)本的制備與觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^標(biāo)本制備和觀察了解生殖細(xì)胞的減數(shù)分裂過程。二、實(shí)驗(yàn)用品1. 材料和標(biāo)本：蝗蟲精巢2. 器材和儀器：顯微鏡、擦鏡紙、解剖針、鑷子、載玻片、蓋玻片、吸水紙、培養(yǎng)皿3. 試劑：70乙醇、改良堿性品紅染液。三、實(shí)驗(yàn)原理 減數(shù)分裂是發(fā)生于有性生殖配子成熟過程中的一種細(xì)胞分裂，又稱成熟分裂，

47、其主要特征是生殖細(xì)胞連續(xù)進(jìn)行兩次核分裂后，細(xì)胞中的染色體數(shù)目減半，保證了在有性生殖過程中上下代生物體染色體數(shù)目的恒定，從而使物種在遺傳上具有相對的穩(wěn)定性。與此同時，在減數(shù)分裂過程中發(fā)生的遺傳物質(zhì)的交換、重組及自由組合，使生物體增加了更多的變異機(jī)會，確保了生物的多樣性。蝗蟲精巢取材方便，標(biāo)本制備方法簡單，染色體數(shù)目較少。例如，蝗蟲初級精母細(xì)胞染色體數(shù)2n=22+X，經(jīng)過減數(shù)分裂形成四個精細(xì)胞，每個精細(xì)胞的染色體數(shù)為n=ll+X或n=11(注：蝗蟲的性別決定與人類不同，雌性有兩條X染色體、雄性為XO，即只有一條X染色體，沒有Y染色體)，一般多采用它來研究觀察減數(shù)分裂染色體形態(tài)變化。四、實(shí)驗(yàn)方法（一

48、）蝗蟲精巢壓片標(biāo)本的制備 l采集：采集到各期分裂相的標(biāo)本是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵，解決這一關(guān)鍵要把握兩點(diǎn)(1)時間：湖北地區(qū)采集，一般在7月15至25日為宜；(2)蟲體特征：雄蟲翹膀長到剛好蓋住腹部一半時，正好是雄蟲精子發(fā)生的高峰季節(jié)，最適合采集。在田埂、河邊、路旁的草叢中均可采到。 2取材：將采到的雄蟲，用大頭針固定在木板或紙盒上，沿腹部背中線剪開體壁，見消化管背側(cè)的淺黃色結(jié)構(gòu)即是精巢，用鑷子分離出來。 3固定：把取出的精巢立即放入Carnoy固定液中，固定1h，期間可用大頭針小心分離精細(xì)管，加速固定，促進(jìn)脂肪溶解。固定后移入70乙醇中存放于4冰箱備用。 4染色：挑取蝗蟲精細(xì)管，置于載玻片上，水洗并

49、吸干，滴加一滴改良苯酚品紅染色液，用鑷子將精細(xì)管輕輕搗碎，染色510 min。5壓片：在染色材料上蓋上蓋玻片，再在蓋玻片上放一塊吸水紙，用大拇指垂直在蓋玻片上適力下壓（壓片時不要滑動蓋片）使精細(xì)管破裂細(xì)胞平展開，吸去溢出的染液，即可觀察。 （二）蝗蟲精母細(xì)胞減數(shù)分裂過程觀察 蝗蟲精巢是由多條圓柱形的精細(xì)管組成，每條精細(xì)管由于生殖細(xì)胞發(fā)育階段的差別可分成若干區(qū)，良好壓片可見到從游離的頂端起始依次為精原細(xì)胞、精母細(xì)胞、精細(xì)胞及精子等各發(fā)育階段的區(qū)域。1精原細(xì)胞（Spermatogonia）：位于精細(xì)管的游離端，胞體較小，由有絲分裂來增殖，其染色體較粗短、染色較濃。 2減數(shù)分裂I（Meiotic d

50、ivision I）：減數(shù)分裂I是從初級精母細(xì)胞到次級精母細(xì)胞的一次分裂。 (1)前期I（Prophase I）：在減數(shù)分裂中，以前期I最有特征性、核的變化復(fù)雜，依染色體變化，又可分為下列各期：細(xì)線期（Leptotene stage）：染色體呈細(xì)長的絲，稱為染色線。彎曲繞成一團(tuán)，排列無規(guī)則，染色線上有大小不一的染色粒，形似念珠，核仁清楚。偶線期（zygotene stage）：同源染色體開始配對，同時出現(xiàn)極化現(xiàn)象，各以一端聚集于細(xì)胞核的一側(cè)，另一端則散開，形成花束狀。粗線期（Pachytene stage）：每對同源染色體聯(lián)合完成，縮短成較粗的線狀，稱為雙價染色體，因其由四條染單體組成，又叫四

51、分體。雙線期（Diplotene stage）：染色體縮的更短些，同源染色體開始有彼此分開的趨勢，但因兩者相互絞纏，有多點(diǎn)交叉，所以這時的染色體呈現(xiàn)麻花狀。終變期（Diakinesis）：染色體更為粗短，形成Y、V、O等形狀，核膜、核仁消失。(2)中期I（Metaphase I）：核膜和核仁消失，紡錘體形成，雙價染色體排列于赤道面，著絲點(diǎn)與紡錘絲相連。這時的染色體組居細(xì)胞中央，側(cè)面觀呈板狀，極面觀呈空心花狀。(3)后期I（Anaphase I）：由于紡錘絲的解聚變短，同源的兩條染色體彼此分開，分別向兩極移動。但每條染色體的著絲粒尚未分裂，故兩條姐妹染色單體仍連在一起同去一極。(4)末期I（Te

52、lophase I）：移動到兩極的染色體，呈聚合狀態(tài)，并解旋，同時核膜形成，胞質(zhì)也均分為二，即形成兩個次級精母細(xì)胞，這時每個新核所含染色體的數(shù)目只是原來的一半。到此減數(shù)分裂I結(jié)束。 3減數(shù)分裂（Meiotic divisison ）：減數(shù)分裂類似一般的有絲分裂，但從細(xì)胞形態(tài)上看，可見胞體明顯變小，染色體數(shù)目少。 (1)前期（Prophase ）：末期I的細(xì)胞進(jìn)入前期狀態(tài)，每條染色體的兩個單體顯示分開的趨勢，染色體象花瓣狀排列，使前期的細(xì)胞呈實(shí)心花狀。 (2)中期（Metaphase）：紡錘體再次出現(xiàn)，染色體排列于赤道面。 (3)后期（Anaphase）：著絲?？v裂，每條染色體的兩條單體彼此分離，各成一子染色體，分別移向兩極。(4)末期（Telophase）：移到兩極的染色體分別組成新核，新細(xì)胞的核具單倍數(shù)(n)的染色體組，胞質(zhì)再次分裂，這樣，通過減數(shù)分裂每個初級精母細(xì)胞就形成了四個精細(xì)胞。五、實(shí)驗(yàn)報告1. 截取減數(shù)分裂各期圖片，并加以標(biāo)注。2. 比較有絲分裂與減數(shù)分裂的異同。3. 區(qū)分二價