藥物分析第十五章甾體激素類藥物的分析

1、激素激素（HormoneHormone，荷爾蒙），荷爾蒙） 是人體內(nèi)各種內(nèi)分泌腺所分泌的一種是人體內(nèi)各種內(nèi)分泌腺所分泌的一種生物活性物質(zhì)。激素作用于特定的稱為生物活性物質(zhì)。激素作用于特定的稱為靶靶器官器官的組織、細(xì)胞上而發(fā)揮作用。如果激的組織、細(xì)胞上而發(fā)揮作用。如果激素分泌出現(xiàn)平衡失調(diào)，可使人體發(fā)生病變，素分泌出現(xiàn)平衡失調(diào)，可使人體發(fā)生病變，如甲亢、糖尿病等。如甲亢、糖尿病等。甾體激素類甾體激素類藥物均具有藥物均具有環(huán)戊烷駢多環(huán)戊烷駢多氫菲氫菲母核。母核。1234567891011121314151617ABCD18181918192120按照按照C C1010,C,C1313,C,C1717

2、取代基取代基不同分類不同分類按藥理作用分類按藥理作用分類OHOOHOCH2OHHHH4 43 3酮基酮基（紫外吸收）（紫外吸收）天然天然皮質(zhì)激素皮質(zhì)激素：氫化可的松氫化可的松孕甾烷母核有孕甾烷母核有2121個(gè)碳原子個(gè)碳原子C C1717醇酮基醇酮基（還原性）（還原性）孕甾烷母核孕甾烷母核OHOOHOCH2OHHHH311172021氫化可的松(hydrocortisone)OHOOHOHFHOCH3OHCH3醋酸地塞米松(dexamethasone acetate)16-甲基21-酯化17-羥基9-氟3-酮1,2-雙鍵11-羥基20-酮OCH3OHCH3HHOPFHHCH3OHOOONaONa

3、OCH3CH3HOHHHODesoxycortisone Acetate)CH3OA環(huán)4-3-酮基,為共軛體系,在波長240nm附近有紫外吸收,部分藥物在C1-C2之間有雙鍵,也有紫外吸收腎上腺皮質(zhì)激素類藥物結(jié)構(gòu)特征腎上腺皮質(zhì)激素類藥物結(jié)構(gòu)特征OCH3OHHCH3HFHHOOOH3CCH3CH3OOABDC1234C17位上為-醇酮基,具有還原性.多數(shù)藥物有C17-羥基,部分藥物-醇羥基與酸成酯.OCH3OHCH3HHOPFHHCH3OHOOONaONaOCH3OHHCH3HFHHOOOH3CCH3CH3OO部分藥物的部分藥物的C6或或C9位由鹵素取代位由鹵素取代,呈相呈相應(yīng)的鹵化物反應(yīng)應(yīng)的鹵

4、化物反應(yīng)OCH3OHHCH3HFHHOOOH3CCH3CH3OO部分藥物部分藥物C11位上有羥位上有羥基或酮基取代基或酮基取代CH3HHCH3HOHCH3O甲睪酮(methyltestosterone)OOHHHHOCH3丙酸睪酮(testosterone propionate)OOHHHHO苯丙酸諾龍(nandrolone phenylpropionate)17-羥基CH3HHCH3HOHCH3O甲睪酮(methyltestosterone)A環(huán)環(huán)4-3-酮基酮基C17位上為羥基位上為羥基,部分藥部分藥物的羥基被酯化物的羥基被酯化雄性激素上的母核為雄性激素上的母核為19個(gè)碳原子個(gè)碳原子,蛋白

5、同化激素在蛋白同化激素在C10位上一般無角位上一般無角甲基甲基,母核只有母核只有18個(gè)碳原子個(gè)碳原子A環(huán)環(huán)4-3-酮基酮基C17位上有甲酮基或位上有甲酮基或乙炔基乙炔基. 孕甾烷孕甾烷母核有母核有2121個(gè)碳原子個(gè)碳原子 口服被迅速破壞失效，口服被迅速破壞失效，只能肌注只能肌注OCH3HHHCH3OHCH34 43 3酮基酮基COHHHCH3O黃體酮(progesterone)CH3OCH3OCH3OHHHO醋酸甲地孕酮(megestrol acetate )OHCH3HHOHCH3N米非司酮(mifepristone)天然的雌性激素：天然的雌性激素：雌二醇雌二醇 雌甾烷雌甾烷母核有母核有18

6、18個(gè)碳原子個(gè)碳原子 A A環(huán)為苯環(huán)，環(huán)為苯環(huán)，C C3 3位上有酚位上有酚羥基，羥基，C C1717位上有羥基位上有羥基 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，口服無效結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，口服無效OHCH3HHHHHOOHOHOHOCOCH2CH2CH2CH3OHOHCCHCOOOH結(jié)構(gòu)修飾結(jié)構(gòu)修飾 炔雌醇炔雌醇 戊酸雌二醇戊酸雌二醇 苯甲酸雌二醇苯甲酸雌二醇乙炔基引入，使乙炔基引入，使仲醇變叔醇，增仲醇變叔醇，增加空間位阻，阻加空間位阻，阻礙酶對藥物的氧礙酶對藥物的氧化代謝，化代謝，可口服可口服1717位羥基酯化，位羥基酯化，酯在體內(nèi)緩慢水酯在體內(nèi)緩慢水解，解，延效延效3 3位羥基酯化，位羥基酯化，酯在體內(nèi)緩慢酯在體內(nèi)緩慢

7、水解，水解，延效延效可口服可口服高效高效長效長效人工合成代用品：人工合成代用品：非甾體化合物非甾體化合物OHOH己烯雌二酚己烯雌二酚高效、長效高效、長效4 43 3酮酮C C1717醇醇酮基酮基C C1717羥基羥基C C1717甲酮基甲酮基A A環(huán)為環(huán)為3 3OHOH苯環(huán)苯環(huán)腎上腺皮質(zhì)腎上腺皮質(zhì)激素激素+ + +雄性與蛋白雄性與蛋白同化激素同化激素+ + +雌性激素雌性激素+ + +孕激素孕激素+ + +鑒別反應(yīng)鑒別反應(yīng)UVUV、羰基、羰基試劑、氨試劑、氨基脲反應(yīng)基脲反應(yīng)還原性（堿還原性（堿性酒石酸酮、性酒石酸酮、氨制氨制AgNOAgNO3 3）可成酯可成酯與亞硝基鐵氰與亞硝基鐵氰化鈉、間二

8、硝化鈉、間二硝基苯反應(yīng)基苯反應(yīng)UVUV、與重、與重氮苯磺酸氮苯磺酸鹽反應(yīng)鹽反應(yīng)特殊官能團(tuán)與分析方法特殊官能團(tuán)與分析方法白色至微黃色粉末或結(jié)晶性粉末。白色至微黃色粉末或結(jié)晶性粉末。三氯甲烷中微溶至易溶；三氯甲烷中微溶至易溶；甲醇或乙醇中微溶甲醇或乙醇中微溶乙醚或植物油極微溶乙醚或植物油極微溶水中不溶水中不溶1. 性狀與溶解度性狀與溶解度2、熔點(diǎn)、熔點(diǎn)一具有鑒定的意義；二則可以反映藥物的純度。一具有鑒定的意義；二則可以反映藥物的純度。炔諾酮：熔點(diǎn)炔諾酮：熔點(diǎn)2022083.比旋度比旋度甾體激素多具有手型碳原子，具有旋光性。甾體激素多具有手型碳原子，具有旋光性。4.吸收系數(shù)吸收系數(shù)（一）強(qiáng)酸的呈色反

9、應(yīng)（一）強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)強(qiáng)酸：強(qiáng)酸： H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl原理：酮基先質(zhì)子化，形成正碳離子，再與原理：酮基先質(zhì)子化，形成正碳離子，再與HSO4-作用呈色。作用呈色。甾體激素類甾體激素類藥物藥物硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸呈色呈色顯顯 色色熒光熒光加水稀釋加水稀釋氫化可的松氫化可的松棕黃色至紅色棕黃色至紅色 綠色綠色黃色至橙黃色黃色至橙黃色炔雌醇炔雌醇橙紅橙紅黃綠黃綠玫紅絮狀玫紅絮狀炔雌醚炔雌醚橙紅橙紅黃綠黃綠紅色紅色潑尼松潑尼松黃黃橙橙黃色漸變藍(lán)綠色黃色漸變藍(lán)綠色潑尼松龍潑尼松龍深紅深紅灰色絮狀灰色絮狀地塞米松地塞米松淡紅棕色淡紅棕色顏色消失顏色消失苯甲

10、酸雌二醇苯甲酸雌二醇黃綠色黃綠色藍(lán)色藍(lán)色淡橙色淡橙色與硫酸顯色反應(yīng)與硫酸顯色反應(yīng)1. C17-醇酮基醇酮基還原性還原性A. 呈色反應(yīng)呈色反應(yīng)C17-醇酮基醇酮基四氮唑鹽四氮唑鹽OH-呈色呈色B. 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)C17-醇酮基醇酮基氨制硝酸銀氨制硝酸銀銀鏡反應(yīng)銀鏡反應(yīng)C17-醇酮基醇酮基堿性酒石酸銅堿性酒石酸銅Cu2O（多倫試液）（多倫試液）（斐林試液）（斐林試液）2.C3酮基和酮基和C20酮基酮基甾酮類甾酮類2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼呈色呈色異煙肼、硫酸苯肼異煙肼、硫酸苯肼OOHNCONHNH2HClCONHNOHN異煙腙（黃色）睪酮CONHNCCH3NHNOCNN異煙雙腙（黃色）OCCH

11、3O2NCONHNH2HCl黃體酮成腙反應(yīng)中成腙反應(yīng)中 C20酮基受酮基受C18甲基的甲基的空間位阻影響，反應(yīng)較空間位阻影響，反應(yīng)較慢，需加熱或較長時(shí)間慢，需加熱或較長時(shí)間放置，才完成反應(yīng)。放置，才完成反應(yīng)。 C3酮基空間位阻最小，酮基空間位阻最小，最易起反應(yīng)，室溫下生成最易起反應(yīng)，室溫下生成單腙。單腙。OCH3HHHCH3OHCH33.3.甲酮基甲酮基或活潑亞甲基或活潑亞甲基COCH3O NOCNFe OHH2O2+-4Fe5CNNOCHCOO藍(lán)紫色黃體酮 適用：具有適用：具有甲酮基甲酮基或或活潑亞甲基活潑亞甲基的甾體激素類藥物。的甾體激素類藥物。 能與能與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛

12、亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛反應(yīng)呈色。反應(yīng)呈色。黃體酮專屬性反應(yīng)。黃體酮專屬性反應(yīng)。黃體酮黃體酮其他甾體其他甾體亞硝基鐵氰化鈉亞硝基鐵氰化鈉藍(lán)紫色藍(lán)紫色淡橙色或不顯色淡橙色或不顯色又稱為堿性硝普鈉反應(yīng)。又稱為堿性硝普鈉反應(yīng)。堿性堿性甲酮基：甲酮基：有機(jī)氟有機(jī)氟F有機(jī)破壞有機(jī)破壞有機(jī)氯有機(jī)氯4 4、鹵元素的呈色反應(yīng)、鹵元素的呈色反應(yīng)茜素氟藍(lán)茜素氟藍(lán)硝酸亞鈰硝酸亞鈰硝酸硝酸硝酸銀硝酸銀呈藍(lán)紫色呈藍(lán)紫色 ClAgCl氯原子結(jié)合氯原子結(jié)合在母核環(huán)上在母核環(huán)上 適用：雌激素類藥物。適用：雌激素類藥物。5.5.酚羥基的呈色反應(yīng)酚羥基的呈色反應(yīng) 能與能與重氮苯磺酸重氮苯磺酸發(fā)生偶合反應(yīng)，生成發(fā)生偶合反

13、應(yīng)，生成紅色偶氮紅色偶氮染料。染料。JP利用此反應(yīng)鑒別苯甲酸雌二醇利用此反應(yīng)鑒別苯甲酸雌二醇6. 6. 乙炔基乙炔基RCCHAgNO3RCCAgOHCCHHO炔雌醇3AgNOOHCCAgHO白含炔基的甾體激素，炔諾酮，炔雌醇等含炔基的甾體激素，炔諾酮，炔雌醇等 原理：一些甾體激素類藥物具有醋酸酯、戊酸原理：一些甾體激素類藥物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的結(jié)構(gòu)，可先行水解，根據(jù)水解產(chǎn)物酯及已酸酯的結(jié)構(gòu)，可先行水解，根據(jù)水解產(chǎn)物來鑒別。來鑒別。7、酯的水解產(chǎn)物的反應(yīng)、酯的水解產(chǎn)物的反應(yīng) 適用：適用： 本類藥物本類藥物C3、C17或或C21位上羥基的酯位上羥基的酯 結(jié)果：結(jié)果： 醋酸酯醋酸酯水解后生成

14、的醋酸可與乙醇反應(yīng)，生成水解后生成的醋酸可與乙醇反應(yīng)，生成有香氣醋酸乙酯。有香氣醋酸乙酯。 戊酸或己酸酯戊酸或己酸酯類水解后可生成有特臭的戊酸或類水解后可生成有特臭的戊酸或己酸，進(jìn)行鑒別。己酸，進(jìn)行鑒別。-3-酮酮240nm左右左右280nm左右左右苯環(huán)苯環(huán)其他共軛結(jié)構(gòu)其他共軛結(jié)構(gòu)200-760nm有特征吸收。有特征吸收?？梢?guī)定最大吸收波長、可規(guī)定最大吸收波長、A、吸收系數(shù)、吸收系數(shù)、A大大/A小小。原原 理理方方 法法示示 例例結(jié)構(gòu)特征：結(jié)構(gòu)特征： 酚羥基酚羥基 C17 OH C17 乙炔基乙炔基例例:炔雌醇炔雌醇OHCCHHO1505cm-13505cm-13300cm-1CHv CC15

15、90cm-13610cm-1酚羥基酚羥基醇羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動苯環(huán)的骨架振動eg2：黃體酮：黃體酮COHHHCH3O結(jié)構(gòu)特征：結(jié)構(gòu)特征： -3-3-酮酮 C C1717- -酮基酮基1700cm-1 C=O20位酮基位酮基1665cm-13位酮基位酮基1615cm-1870cm-1 C-H雙鍵雙鍵TLC法法HPLC應(yīng)用應(yīng)用甾體激素類藥物原料與甾體激素類藥物原料與制劑的鑒別制劑的鑒別甾體激素類藥物原料與制劑甾體激素類藥物原料與制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）軟膏、醋酸氟輕松軟膏）方法方法對照品法對照品法對照品法對照品法結(jié)果結(jié)果判斷判斷

16、要求供試品溶液所顯主要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對斑點(diǎn)的顏色和位置與對照品溶液的主斑點(diǎn)相同照品溶液的主斑點(diǎn)相同要求在含量測定項(xiàng)下記錄的要求在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的色譜圖中，供試品峰的tR與與對照品峰的對照品峰的tR一致一致 雜質(zhì)來源：雜質(zhì)來源：原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物以原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物以及試劑和溶劑。及試劑和溶劑。 其他甾體：其他甾體：有些雜質(zhì)與該有些雜質(zhì)與該甾體激素藥物結(jié)構(gòu)類似甾體激素藥物結(jié)構(gòu)類似，也具有一定的藥理作用而又互不相同，因此在甾體激也具有一定的藥理作用而又互不相同，因此在甾體激素類藥物的質(zhì)量控制中，素類藥物的質(zhì)量控制中，“其他甾體其他

17、甾體”的限度檢查顯的限度檢查顯得很重要。得很重要。 檢查方法：檢查方法：u 判定方法：規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目判定方法：規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目 規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色1 1、TLCTLC法（自身對照法）法（自身對照法）egeg：氫化可的松中其他甾體的檢查：氫化可的松中其他甾體的檢查 供試液：本品供試液：本品+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9 9：1 1） 濃度：濃度：3.0mg/ml3.0mg/ml 對照液：供試液（對照液：供試液（3.0mg/ml3.0mg/ml）+ +氯仿氯仿- -甲醇（甲醇（9 9：1 1） 60g/ml 60g/ml 層析：供試液層析：供試液 對照液對照液 點(diǎn)樣、展開、斑點(diǎn)

18、檢出。點(diǎn)樣、展開、斑點(diǎn)檢出。 判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3 3個(gè)，其顏色與對照液的主個(gè)，其顏色與對照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。斑點(diǎn)比較，不得更深。氫化可的松氫化可的松中中其他甾體其他甾體檢查檢查對照品對照品60g/ml供試品供試品3.0mg/ml圖圖A A中峰中峰1 1面積的四分之三面積的四分之三u 判定方法：判定方法： 規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目 規(guī)定雜質(zhì)峰面積規(guī)定雜質(zhì)峰面積2 2、HPLCHPLC法（法（自身對照法自身對照法） 雜質(zhì)來源：地塞米松、氟輕松和曲安奈得等甾體激雜質(zhì)來源：地塞米松、氟輕松和曲安奈得等甾體激素類藥物，在生產(chǎn)中使用二氧化硒素

19、類藥物，在生產(chǎn)中使用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脫氫工藝，脫氫工藝，藥物可能引入雜質(zhì)硒。藥物可能引入雜質(zhì)硒。（0.0050.0050.010.01） 46SeSe鹽酸羥胺氧瓶燃燒有機(jī)藥物苯苯并并苯苯硒硒二二唑唑二二氨氨基基萘萘5 , 43,24 Se .pHnmA環(huán)環(huán)己己烷烷egeg：地塞米松磷酸鈉：地塞米松磷酸鈉 雜質(zhì)來源：地塞米松磷酸鈉生產(chǎn)中，使用大量雜質(zhì)來源：地塞米松磷酸鈉生產(chǎn)中，使用大量甲醇和丙酮。甲醇和丙酮。甲醇峰，甲醇含量甲醇峰，甲醇含量0.30.3 丙酮規(guī)定不得過丙酮規(guī)定不得過5.0%5.0% 方法：對照品（方法：對照品（KH2PO4），磷鉬酸比色法），磷鉬酸比色法 雜質(zhì)

20、來源：地塞米松磷酸鈉生產(chǎn)過程中，由磷酸酯雜質(zhì)來源：地塞米松磷酸鈉生產(chǎn)過程中，由磷酸酯化時(shí)殘存的過量磷酸鹽?；瘯r(shí)殘存的過量磷酸鹽。有色甲瓚有色甲瓚四氮唑鹽四氮唑鹽醇酮基醇酮基 a a 11COH -（一）四氮唑鹽比色法（一）四氮唑鹽比色法（1 1）原理：腎上腺皮質(zhì)激素類）原理：腎上腺皮質(zhì)激素類C C1717-醇酮基強(qiáng)醇酮基強(qiáng)還原性。還原性。CNNNN+Cl-CNNNNHe2氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）三苯甲瓚三苯甲瓚深紅深紅nm490480max 氫氧化四甲基銨氫氧化四甲基銨對照液對照液供試液供試液ATTC4045暗暗（2 2）方法：對照品法）方法：對照品法（3 3）影響因素）影響因素

21、A. A. 基團(tuán)對反應(yīng)速度的影響基團(tuán)對反應(yīng)速度的影響C11= OC17OHC21OH未酯化未酯化C21-OH酯酯化化B、溶劑和水分的影響、溶劑和水分的影響 以無水無醛的乙醇為溶劑，水含量大時(shí)，呈以無水無醛的乙醇為溶劑，水含量大時(shí)，呈色減慢，不超過色減慢，不超過5對結(jié)果沒有影響。對結(jié)果沒有影響。C、O2與光線的影響與光線的影響避光、隔絕空氣、快速、充避光、隔絕空氣、快速、充N2除去除去O2D、堿的種類及加入順序、堿的種類及加入順序以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳加入順序：皮質(zhì)激素溶液加入順序：皮質(zhì)激素溶液四氮唑鹽四氮唑鹽堿試液堿試液皮質(zhì)激素與堿接觸會部分分解皮質(zhì)激素與堿接觸會

22、部分分解E. 溫度與時(shí)間溫度與時(shí)間室溫（室溫（25）反應(yīng)）反應(yīng)4045 minF. 干擾物的影響干擾物的影響 選擇性的測定選擇性的測定C17位未被氧化和降解的藥物位未被氧化和降解的藥物氧化物和水解產(chǎn)物不發(fā)生反應(yīng)氧化物和水解產(chǎn)物不發(fā)生反應(yīng)1.原理原理異煙腙（黃）異煙腙（黃）HCl420nm420nm（二）異煙肼比色法（二）異煙肼比色法C C3 3- -酮基酮基+ +異煙肼異煙肼H2O腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素 雄性激素雄性激素蛋白同化激素蛋白同化激素孕激素孕激素2.2.方法：對照品法方法：對照品法66異煙肼異煙肼無水甲醇無水甲醇對照液對照液供試液供試液A3CHCl暗暗60酸性酸性3.3.影響因

23、素影響因素A.反應(yīng)速度（反應(yīng)專屬性）反應(yīng)速度（反應(yīng)專屬性） C3=OC17= O 、C20= O C11= O 不反應(yīng)不反應(yīng)B. 溶劑的選擇溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽異煙肼鹽酸鹽受溶解度的影響受溶解度的影響無水甲醇無水甲醇無水乙醇無水乙醇甲醇對試劑的穩(wěn)定性好甲醇對試劑的穩(wěn)定性好甲醇呈色強(qiáng)度較無水乙醇中高甲醇呈色強(qiáng)度較無水乙醇中高乙醇對植物油的溶解度小乙醇對植物油的溶解度小C.水分、溫度、水分、溫度、O2與光線的影響與光線的影響 含水量含水量腙水解腙水解A% O2與光線對反應(yīng)的影響不大與光線對反應(yīng)的影響不大 t D.酸的種類和濃度及異煙肼的濃度酸的種類和濃度及異煙肼的濃度 酸酸:異煙肼異煙肼 = 2:1 吸光度最大吸光度最大4-3-酮基的甾體激素在室溫不到酮基的甾體激素在室溫不到1h即可定即可定量地與酸性異煙肼反應(yīng)；其他長時(shí)間放置或加量地與酸性異煙肼反應(yīng)；其他長時(shí)間放置或加熱后方可反應(yīng)完全，因此在反應(yīng)條件下，本法熱后方可反應(yīng)完全，因此在反應(yīng)條件下，本法對對4-3-酮基甾體具有一定的專屬性。酮基甾體具有一定的專屬性。E:反應(yīng)的專屬性反應(yīng)的專屬性原理原理m