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1、-作者xxxx-日期xxxx細(xì)胞遷移-劃痕實(shí)驗(yàn)1【精品文檔】細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)技術(shù) 劃痕實(shí)驗(yàn)一、基本原理 細(xì)胞劃痕（修復(fù)）法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上， 用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間（例如72h），取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長(zhǎng)（修復(fù)）至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力，實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過(guò)不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。二、操作步驟

2、1先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻的劃?rùn)M線，大約每隔0.51cm一道，橫穿過(guò)孔。每孔至少穿過(guò)5條線。 2在孔中加入約5×105個(gè)細(xì)胞，具體數(shù)量因細(xì)胞種類不同而不同，接種原則為過(guò)夜后融合率達(dá)到100%。3第二天用槍頭比著直尺，盡量垂至于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜(不同孔之間最好使用同一只槍頭)。4PBS洗細(xì)胞3次，去處劃下的細(xì)胞，加入無(wú)血清培養(yǎng)基。5放入37 5% CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)?？砂?，6，12，24h時(shí)間點(diǎn)取樣，拍照(具體時(shí)間依實(shí)驗(yàn)需要而定)。6.統(tǒng)計(jì)方法：使用Image J軟件打開(kāi)圖片后，隨機(jī)劃取6至8條水平線，計(jì)算細(xì)胞間距離的均值。三、注意事項(xiàng)：1.在用PBS緩沖液沖洗時(shí)，注意貼壁慢慢加入，以免沖散單層貼壁細(xì)胞，影響實(shí)驗(yàn)拍照結(jié)果。2.一般做劃痕實(shí)驗(yàn)，都是無(wú)血清或者低血清（<2%）否則細(xì)胞增殖就不能忽略。3.按照6孔板背后畫(huà)線的垂直方向劃痕，可以形成若干

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