P16、Stathmin-1及Ki67在宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)與意義

1、p16、stathmin-1及ki67在宮頸上皮內(nèi) 瘤變中的表達(dá)與意義張晴李丹岳欣朱藹黃馨逸王旭波 南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬徐州市中醫(yī)院病理科摘要：目的:探討p16、stathmin-k ki67在宮頸上皮內(nèi)瘤變屮的表達(dá)與臨床意義。方 法:收治宮頸病變患者92例作為觀察組，選擇20例慢性宮頸炎標(biāo)本作為對(duì)照組, 均檢測(cè)p16、stathmin-1> ki67表達(dá)情況。結(jié)果:對(duì)照組p16、stathmin-1及ki67 的陽(yáng)性率顯著低于觀察組(p<0. 05)。直線相關(guān)性顯示，p16>stathmin-l及ki67 表達(dá)都呈現(xiàn)兩兩正向相關(guān)性(p<0. 05) <>結(jié)論

2、:p16、stathmin-1和ki67在不同 級(jí)別的宮頸上皮內(nèi)瘤變的病理診斷屮有重要意義。關(guān)鍵詞：免疫組化技術(shù);p16; stathmin-1; ki67;子宮頸上皮內(nèi)瘤變;expression and significance of p16, starthmin-1 and ki67 in cervical intraepithelial neoplasiazhang qi ng li dan yue xin zhu xi huang xinyi wangxubodepartment of pathology, the traditional chinesemedicine hospita

3、l of xuzhou city aff訂iated tonanjing university of chinese medicine;abstract：objective:to explore the expression and significance of pl6, stathmin-1 and ki67 in cervical intraepithelial neoplasia. methods:92 patients with cervical lesions were selected as the observation group. 20 cases of chronic c

4、ervici tis specimens were seiected as the control group. the cxprcssions of p16, stathmint and ki67 were detected. rcsults:thc positive rates of pl6, stathmin-1 and ki67 in the control group were significantly lower than those in the observation group (p<0. 05) . linear correlation showed that th

5、e expression of p16, stathmin-1 and ki67 showed positive correlation with each other (p<0. 05) . conclusion:p16, stathmint and ki67 had importemt signifiedncc in the pathological diagnosis of different grades of cervical intraepithelial neoplasia.keyword：innn uno histochemical technique; p16; sta

6、thm int ; ki67; cervical intraepithelial neoplasia;宮頸癌是婦科腫瘤屮的第二大惡性腫瘤，是由宮頸上皮內(nèi)瘤變(cin)漸進(jìn)性發(fā) 展的一種腫瘤。c1ni在臨床上以隨訪為主，c1nii、c1niii臨床上則需要積極地 手術(shù)治療。我們通常把常規(guī)病理診斷認(rèn)作是“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是，因?yàn)槿狈陀^依 據(jù)，而且受到病理科醫(yī)師自身及彼此之間的可變性的因素影響，對(duì)宮頸鱗狀上 皮病變的病理學(xué)診斷很人程度上會(huì)岀現(xiàn)偏差，可導(dǎo)致臨床漏診或者過(guò)度治療。因 此，為了提高宮頸病變?cè)\斷的準(zhǔn)確性，使用有效的生物學(xué)標(biāo)記物為組織病理學(xué) 診斷提供客觀依據(jù)就顯得尤為重要止迢1。而p16、sta

7、thmin-k ki67在宮頸病 變的過(guò)程中可以作用于細(xì)胞的周期，并參與細(xì)胞的增殖、分裂及腫瘤生成的過(guò)程, 在臨床醫(yī)學(xué)中具有較高的應(yīng)用價(jià)值。2015年10月-2017年5月收治宮頸上皮內(nèi) 瘤變患者92例作為研究對(duì)象，探討宮頸內(nèi)皮上皮瘤變pl6、stathmin-1及ki67 的表達(dá)情況，并分析其臨床診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。資料與方法對(duì)2015年10月-2017年5月于我院就診的首次行宮頸活檢手術(shù)的92例(觀察 組)宮頸上皮內(nèi)瘤變患者行石蠟組織包埋，并口排除子宮次全切除后、既往有子 宮疾病病史診療后的患者。患者年齡2074歲，平均36. 67歲。其屮，cin i 32 例，c1nii30例，c1n

8、iii30例。選所有的切片均由資歷較深的兩名病理醫(yī)師共同 閱片。慢性宮頸炎20例作為對(duì)照組。檢測(cè)方法:所有標(biāo)木均用10%的中性甲醛固定，常規(guī)進(jìn)行脫水、透明、浸蠟、石 蠟包埋，然后連續(xù)4口 m厚度切片，行he染色，在奧林巴斯cx31光學(xué)顯微鏡下 進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察，確定病理診斷及分組。p16、stathmin-1和ki67檢測(cè)采 用免疫組織化學(xué)sp法，實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格地按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，以已知陽(yáng)性片 分別做p16> stathmin-1和ki67陽(yáng)性對(duì)照染色，以磷酸鹽緩沖液(pbs)代替一 抗做陰性對(duì)照染色。其中鼠抗人p16單克隆抗體、鼠抗人stathmin-1單克隆抗體、鼠抗人ki67單

9、克隆抗體及sp法試劑盒等均為福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生 產(chǎn)。判定標(biāo)準(zhǔn):用光學(xué)顯微鏡觀察顯色反應(yīng)，在高倍鏡下(x400)對(duì)每一張切片隨 機(jī)選擇具有代表性的5個(gè)視野，并且每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，一共計(jì)數(shù)1000 個(gè)細(xì)胞，然后計(jì)算每張切片陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占的百分比。p16蛋口表達(dá):細(xì)胞核 或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，見(jiàn)圖1。stathmin-1蛋白表達(dá):細(xì)胞質(zhì)內(nèi)見(jiàn) 到棕黃色顆粒為陽(yáng)性，見(jiàn)圖2。ki67表達(dá):細(xì)胞核內(nèi)岀現(xiàn)棕黃色顆粒陽(yáng)性，見(jiàn) 圖3。按照陽(yáng)性細(xì)胞百分比的多少分4級(jí):無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞(-)為0"10%,弱陽(yáng)性 (+)為 10%25%,屮度陽(yáng)性(+) , 25%50%, >50%強(qiáng)陽(yáng)

10、性(+)。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采取spss 13.0分析，以spearman相關(guān)分析比較患者p16、 stathmin-1及ki67的表達(dá)關(guān)系，運(yùn)用秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)p16、stathmin-1及ki67 在宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)差異，p<0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果各種不同病變組織屮p16和ki67的表達(dá):p16蛋白在對(duì)照組的陽(yáng)性率為20%,顯 著低于觀察組(cini、cinii及cinhi) 6&0%、100%及100%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義(p<0. 05) o陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度結(jié)果顯示:cini、c1nii及cinui之間比較，差異 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0. 05)，且cin

11、1 <cinikcinllio表明p16的表達(dá)強(qiáng)度隨著病 變的加重呈正相關(guān)。stathmin-1蛋白在對(duì)照組的陽(yáng)性率30%,顯著低于觀察組 (cini、cinii 及 ciniid71%、93%及 96%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0. 05)。陽(yáng)性 表達(dá)強(qiáng)度上cini、cinii及ciniii之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0. 05),且 cin i <clnn<clniiio表明stathmin-1的表達(dá)強(qiáng)度隨著病變的加重呈正相關(guān)。 ki67表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果顯示，ki67在對(duì)照組的陽(yáng)性率30%,顯箸低于觀察組 (cini、cinii及ciniii) 78%、96

12、%及 100%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0. 05) °cin i、 cinii及ciniiiz間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0. 05),且c1ni <clnn<clniiio表明ki67的表達(dá)強(qiáng)度與病變的加重呈正相關(guān)，見(jiàn)表1。下載原表表1 p16、stathmin-1及ki67在宮頸各型病變中的表達(dá)(n)組別p16+對(duì)照組慢性宮頸炎163觀察組 cini109cinn03cinm01p16、stathmin-1及ki67三者間的關(guān)聯(lián)性:3種抗體在宮頸組織中的表達(dá)結(jié)果經(jīng) spearman相關(guān)分析，p16陽(yáng)性表達(dá)在慢性宮頸炎和cin之間呈正相關(guān)(r二0. 785

13、, p<0. 05) ;stathmin-l陽(yáng)性表達(dá)在慢性宮頸炎和cin之間呈正相關(guān)("0.719,p<0. 05) ;ki67陽(yáng)性表達(dá)慢性宮頸炎和cin之間呈正相關(guān)(r二0.683, p<0. 05)。討論宮頸癌是婦科最常見(jiàn)得惡性腫瘤之一，其發(fā)病率有逐年上升及年輕化的趨勢(shì)， 其中多數(shù)為鱗狀細(xì)胞癌，多數(shù)人認(rèn)為宮頸癌的發(fā)牛與性牛活過(guò)早、多產(chǎn)、多個(gè)性 伴侶及hpv感染等因素有關(guān)臣1。但是宮頸癌的發(fā)展過(guò)程吋間比較長(zhǎng)，病變的發(fā) 展過(guò)程為長(zhǎng)期慢性宮頸炎-宮頸上皮內(nèi)瘤變-原位癌-浸潤(rùn)癌，尤其是癌前病變， 病理上根據(jù)異型增生的細(xì)胞累及的宮頸鱗狀上皮的層次，分為c1ni、c1nii

14、及 cin11l針對(duì)癌前病變進(jìn)行及時(shí)、準(zhǔn)確的分析，有利于預(yù)防與控制宮頸癌的發(fā)生。p16基因是直接參與細(xì)胞周期調(diào)控的抑癌基因，p16基因的失活可使得宮頸上皮 細(xì)胞的細(xì)胞周期發(fā)生紊亂，從而啟動(dòng)了一系列的癌變過(guò)程。p16基因定位于細(xì)胞 核內(nèi)，屬于抑癌基因，編碼產(chǎn)物是16kd的蛋白，是作用于細(xì)胞分裂周期關(guān)鍵酶 之一的cdk4的抑制因子，可以抑制細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生。本組資料顯示，cin 組中p16陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于止常對(duì)照組，差界有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;p16在宮頸cinii 及cini1i組陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于宮頸cin i組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此結(jié)果與顧 依群等的報(bào)道相近凹，數(shù)據(jù)表明p16的表達(dá)隨著宮頸病變的級(jí)

15、別上升而表達(dá)強(qiáng) 度增強(qiáng)，與既往研究結(jié)果一致7, 8,是宮頸上皮內(nèi)瘤變病理診斷的很好的補(bǔ)充 £91，有效提高了對(duì)早期宮頸病變進(jìn)展的預(yù)測(cè)效果，從而可以對(duì)這部分患者進(jìn)行 密切監(jiān)測(cè)及早期干預(yù)治療。stathmin-1是一種微管解聚蛋白，調(diào)節(jié)微管動(dòng)力和紡錘體的形成，影響細(xì)胞的 有絲分裂，從而改變細(xì)胞周期分布，影響細(xì)胞的生物學(xué)行為。brooke等研究證 實(shí)stathmin-1在宮頸上皮內(nèi)瘤變高表達(dá)，且與病變級(jí)別相關(guān)10。本研究屮stathmin-1在慢性宮頸炎中的陽(yáng)性表達(dá)率30%,在cin i中的陽(yáng)性表達(dá)率71%, 在cin1級(jí)中的陽(yáng)性表達(dá)率93%,在ciniii級(jí)中的陽(yáng)性表達(dá)率96%,總體陽(yáng)性

16、表達(dá) 率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。本研究中cin組織中stathmin-1與p16蛋白 表達(dá)有正相關(guān)性，與iiowiitt等的報(bào)道一致11。所以stathmin-1協(xié)同p16檢 測(cè)可提高宮頸上皮內(nèi)病變的分級(jí)準(zhǔn)確率。ki67是表達(dá)于增殖期細(xì)胞的核抗原，參與細(xì)胞周期的調(diào)控。ki67主要用于判斷 細(xì)胞的增殖活性，可在除g0期外的活動(dòng)周期(gl、s、g2和有絲分裂期)中表 達(dá)，被公認(rèn)為是能夠準(zhǔn)確且可靠反映細(xì)胞增殖活性的客觀指標(biāo)。本研究中，ki67 在慢性宮頸炎、cini、cinii及ciniii中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為30%、78%、96%、 100%,且陽(yáng)性的強(qiáng)度隨著病變級(jí)別的升高而越來(lái)越

17、強(qiáng)。mimica等研究發(fā)現(xiàn)12, ki67檢測(cè)可預(yù)測(cè)hr hpv感染，且ki67蛋白與cin程度相關(guān),在cinik ciniii 中的表達(dá)更高，說(shuō)明ki-67檢測(cè)是使cin分類更準(zhǔn)確的輔助方法。近些年來(lái)，有 些學(xué)者在對(duì)ctn的研究中，發(fā)現(xiàn)p16和ki67兩種蛋白的表達(dá)在ctn病變中呈正 相關(guān)13,提示宮頸腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多基因突變的結(jié)果，并且提示p16和 ki67在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中具有協(xié)同作用，因此聯(lián)合檢測(cè) p16和ki67,可作為cin分級(jí)診斷的輔助方法。綜上所述，宮頸上皮內(nèi)瘤變是多基因、多因素共同作用的結(jié)果，準(zhǔn)確、客觀地診 斷宮頸腫瘤和分級(jí)對(duì)臨床上進(jìn)一步治療以及預(yù)后評(píng)價(jià)

18、是非常重要的。本研究結(jié)果 顯示，cin組屮聯(lián)合檢測(cè)p16、stathmin-1和ki-67,可以輔助cin的病理診斷, 提高c1n的診斷準(zhǔn)確率，使診斷更加客觀，為以后的治療方案提供合理依據(jù)， 進(jìn)而可以減輕患者的精神及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。美國(guó)陰道鏡協(xié)會(huì)及cap頒布的專家共識(shí)中 提出，在判斷宮頸高、低級(jí)別cin中，p16被公認(rèn)為是有診斷意義的標(biāo)記，而 stathmin-1作為一個(gè)新的指標(biāo)是否能單獨(dú)作為診斷參考指標(biāo)還有待進(jìn)一步研究 證實(shí)。下載原圖圖 1 p16 在 cinii 的表達(dá)(spxloo)圖2 stathmin-1在cinii的表達(dá)(spxloo) 下載原圖下載原圖圖 3 ki67 在 cinii

19、的表達(dá)(spxloo)參考文獻(xiàn)1 zhong pp, li jf, gu yq, et al.pl6 and ki-67expression improves the diagnosticaccuracy of cervical lesions but not predict persistent high risk human pap訂lomavirus infection with cin i j. int j clin exp pathol, 2015, 8 (3) : 2979-2986.2 yang qc, zhu y, liu i1b, et al. a cocktail of m

20、cm2 and t0p2a, pl6 ink4a and ki-67as biomarkcrs for the improved diagnosis of cervical intraepithelial lesionj.pol j pathol, 2013, 1:21-27.3 bergeron c, ordi j, schmidt d, et al. conjunc-tive pl6 ink4a testing significemtly increases accuracy in diagnosing high-grade cervical intracpithclial acoplas

21、iajam j clin pathoi, 2010, 133:395一4064 nuno t, garcia f. the last project and its implications for clinical carej. obstet gynecol clin north am, 2013, 40 (2) :225.5 jiang b, xue m. correiation of e6 and e7 levels in high-risk hpv16 type cervical lesions with ccl20 and langerhans cellsj.genet mol re

22、s, 2015, 14 (3) :10473-10481.6 顧依群，高子芬，汪穎南，等人乳頭狀瘤病毒、p161nk4a在宮頸鱗狀上皮 病變中的意義j病理診斷學(xué)雜志，200& 15 (4) :315-3177 黃惠英，錢德英,岑堅(jiān)敏免疫組化p16蛋白在不同級(jí)別宮頸病變中表達(dá)差 異的研究j現(xiàn)代醫(yī)院,2008, 8 (3) : 14-15.8 劉艷君，臧春逸.p16ink4a> ki-67在宮頸上皮病變組織中的表達(dá)規(guī)律及其與 hpv負(fù)荷量的相關(guān)性研究j 北京醫(yī)學(xué)，2011, 33 (11) : 904-9079 鐘玲，賴妙玲，唐甜，等不同級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變中pl6、p53及ki-67的 表達(dá)及意義j廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)