生物化學(xué)第4章

1、第四章第四章 蛋白質(zhì)的共價(jià)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的共價(jià)結(jié)構(gòu)一、蛋白質(zhì)通論一、蛋白質(zhì)通論二、肽二、肽三、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測定三、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測定四、蛋白質(zhì)的氨基酸序列與生物功能四、蛋白質(zhì)的氨基酸序列與生物功能五、肽與蛋白質(zhì)的人工合成五、肽與蛋白質(zhì)的人工合成一、蛋白質(zhì)通論一、蛋白質(zhì)通論蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)(Protein)(Protein)是生物體的基本組成成份。在人體內(nèi)蛋白是生物體的基本組成成份。在人體內(nèi)蛋白質(zhì)的含量很多，約占人體固體成分的質(zhì)的含量很多，約占人體固體成分的45%45%，它的分布很廣，它的分布很廣，幾乎所有的器官組織都含蛋白質(zhì)，并且它又與所有的生命活幾乎所有的器官組織都含蛋白質(zhì)，并且它又與所有的生

2、命活動(dòng)密切聯(lián)系。動(dòng)密切聯(lián)系。 機(jī)體新陳代謝過程中的一系列化學(xué)反應(yīng)幾乎都依賴于生物催化劑酶機(jī)體新陳代謝過程中的一系列化學(xué)反應(yīng)幾乎都依賴于生物催化劑酶的作用，而酶的本質(zhì)就是蛋白質(zhì)；調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝的激素有許多也是蛋的作用，而酶的本質(zhì)就是蛋白質(zhì)；調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝的激素有許多也是蛋白質(zhì)或它的衍生物；其它諸如肌肉的收縮，血液的凝固，免疫功能，白質(zhì)或它的衍生物；其它諸如肌肉的收縮，血液的凝固，免疫功能，組織修復(fù)以及生長、繁殖等主要功能無一不與蛋白質(zhì)相關(guān)。近代分子組織修復(fù)以及生長、繁殖等主要功能無一不與蛋白質(zhì)相關(guān)。近代分子生物學(xué)的研究表明，蛋白質(zhì)在遺傳信息的控制、細(xì)胞膜的通透性、神生物學(xué)的研究表明，蛋白質(zhì)在遺傳信息

3、的控制、細(xì)胞膜的通透性、神經(jīng)沖動(dòng)的發(fā)生和傳導(dǎo)以及高等動(dòng)物的記憶等方面都起著重要的作用。經(jīng)沖動(dòng)的發(fā)生和傳導(dǎo)以及高等動(dòng)物的記憶等方面都起著重要的作用。 （一）蛋白質(zhì)的化學(xué)組成和分類（一）蛋白質(zhì)的化學(xué)組成和分類單純蛋白質(zhì)的元素組成為單純蛋白質(zhì)的元素組成為C 50C 5055%55%、H 6%H 6%7%7%、O 19%O 19%24%24%、N 13%N 13%19%19%，除此之外還有，除此之外還有S 0S 04%4%。有的蛋白質(zhì)含有。有的蛋白質(zhì)含有P P、I I。少數(shù)含少數(shù)含F(xiàn)eFe、CuCu、ZnZn、MnMn、CoCo、MoMo等金屬元素。等金屬元素。 各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近，平均為各種蛋

4、白質(zhì)的含氮量很接近，平均為16%16%。由于體內(nèi)組織的主。由于體內(nèi)組織的主要含氮物是蛋白質(zhì)，因此，只要測定生物樣品中的氮含量，要含氮物是蛋白質(zhì)，因此，只要測定生物樣品中的氮含量，就可以按下式推算出蛋白質(zhì)大致含量：就可以按下式推算出蛋白質(zhì)大致含量： 蛋白質(zhì)含量蛋白氮蛋白質(zhì)含量蛋白氮6.256.25 （凱氏（凱氏(Kjedahl(Kjedahl) )定氮法的計(jì)算基礎(chǔ)）定氮法的計(jì)算基礎(chǔ)）單純蛋白質(zhì)（單純蛋白質(zhì)（simple protein)simple protein)：僅由氨基酸組成，不含其：僅由氨基酸組成，不含其它化學(xué)成分。它化學(xué)成分。綴合蛋白質(zhì)綴合蛋白質(zhì)(conjugated protein)

5、(conjugated protein)：除含有氨基酸外的各種：除含有氨基酸外的各種化學(xué)成分作為其結(jié)構(gòu)的一部分。非蛋白質(zhì)部分稱為化學(xué)成分作為其結(jié)構(gòu)的一部分。非蛋白質(zhì)部分稱為輔基輔基(prosthetic group)(prosthetic group)或或配體配體(ligand(ligand) )。 單純蛋白質(zhì)單純蛋白質(zhì) （按溶解度分類）（按溶解度分類）清蛋白清蛋白球蛋白球蛋白谷蛋白谷蛋白谷醇溶蛋白谷醇溶蛋白組蛋白組蛋白魚精蛋白魚精蛋白硬蛋白硬蛋白 綴合蛋白質(zhì)綴合蛋白質(zhì) （按非氨基酸（按非氨基酸 成分分類）成分分類）糖蛋白糖蛋白脂蛋白脂蛋白核蛋白核蛋白磷蛋白磷蛋白金屬蛋白金屬蛋白血紅素蛋白血紅

6、素蛋白黃素蛋白黃素蛋白單純蛋白質(zhì)分類單純蛋白質(zhì)分類結(jié)合蛋白質(zhì)分類結(jié)合蛋白質(zhì)分類 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)（按生物學(xué)功能分類）（按生物學(xué)功能分類）酶酶調(diào)節(jié)蛋白調(diào)節(jié)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白貯存蛋白貯存蛋白收縮和游動(dòng)蛋白收縮和游動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)構(gòu)蛋白支架蛋白支架蛋白保護(hù)和開發(fā)蛋白保護(hù)和開發(fā)蛋白異常蛋白異常蛋白（二）蛋白質(zhì)的形狀和大?。ǘ┑鞍踪|(zhì)的形狀和大小形狀形狀纖維狀纖維狀球狀球狀膜蛋白膜蛋白蛋白質(zhì)的相對分子量從大約蛋白質(zhì)的相對分子量從大約600060001 110106 6或更大一些?；蚋笠恍?。單體蛋白質(zhì)單體蛋白質(zhì)(monomeric(monomeric protein)protein)：僅由一條多肽鏈組成。

7、：僅由一條多肽鏈組成。其相對分子量除以其相對分子量除以110110估計(jì)氨基酸殘基的數(shù)目。估計(jì)氨基酸殘基的數(shù)目。寡聚蛋白質(zhì)寡聚蛋白質(zhì)(oligomeric(oligomeric protein)protein)：由兩條或多條多肽鏈：由兩條或多條多肽鏈組成。每條多肽鏈稱為亞基組成。每條多肽鏈稱為亞基(subunit)(subunit)。（三）蛋白質(zhì)構(gòu)象和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的組織層次（三）蛋白質(zhì)構(gòu)象和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的組織層次一級(jí)結(jié)構(gòu)一級(jí)結(jié)構(gòu)(primary structure)(primary structure)：多肽鏈的氨基酸序列。多肽鏈的氨基酸序列。二級(jí)結(jié)構(gòu)二級(jí)結(jié)構(gòu)(secondary structure

8、)(secondary structure)：多肽鏈中主鏈原子的局多肽鏈中主鏈原子的局部空間排布即構(gòu)象，不涉及側(cè)鏈部分的構(gòu)象。部空間排布即構(gòu)象，不涉及側(cè)鏈部分的構(gòu)象。三級(jí)結(jié)構(gòu)三級(jí)結(jié)構(gòu)(tertiary structure)(tertiary structure)：蛋白質(zhì)的多肽鏈在各種二蛋白質(zhì)的多肽鏈在各種二級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上再進(jìn)一步盤曲或折迭形成具有一定規(guī)律的三級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上再進(jìn)一步盤曲或折迭形成具有一定規(guī)律的三維空間結(jié)構(gòu)。維空間結(jié)構(gòu)。四級(jí)結(jié)構(gòu)四級(jí)結(jié)構(gòu)(quarternary(quarternary structure) structure)：具有二條或二條以上具有二條或二條以上獨(dú)立三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽

9、鏈組成的蛋白質(zhì)，其多肽鏈間通過次級(jí)獨(dú)立三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈組成的蛋白質(zhì)，其多肽鏈間通過次級(jí)鍵相互組合而形成的空間結(jié)構(gòu)。鍵相互組合而形成的空間結(jié)構(gòu)。四、蛋白質(zhì)功能的多樣性四、蛋白質(zhì)功能的多樣性 蛋白質(zhì)的序列異構(gòu)現(xiàn)象是蛋白質(zhì)生物功能多樣性和物種蛋白質(zhì)的序列異構(gòu)現(xiàn)象是蛋白質(zhì)生物功能多樣性和物種特異性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。特異性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能：蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能：1.1.催化；催化；2.2.調(diào)節(jié)；調(diào)節(jié)；3.3.轉(zhuǎn)運(yùn)；轉(zhuǎn)運(yùn)；4.4.貯存；貯存；5.5.運(yùn)動(dòng)；運(yùn)動(dòng)；6.6.結(jié)構(gòu)成分；結(jié)構(gòu)成分；7.7.支架作用；支架作用；8.8.防御與進(jìn)攻；防御與進(jìn)攻；9.9.異常功能；異常功能； 蛋白質(zhì)（蛋白質(zhì)（pro

10、teinprotein）是生活細(xì)胞內(nèi)含量最豐富、功能最）是生活細(xì)胞內(nèi)含量最豐富、功能最復(fù)雜的生物大分子，并參與了幾乎所有的生命活動(dòng)和生命過復(fù)雜的生物大分子，并參與了幾乎所有的生命活動(dòng)和生命過程。因此，研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能始終是生命科學(xué)最基本程。因此，研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能始終是生命科學(xué)最基本的命題。的命題。 生物體最主要的特征是生命活動(dòng)，而蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)生物體最主要的特征是生命活動(dòng)，而蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的體現(xiàn)者，具有以下主要功能：的體現(xiàn)者，具有以下主要功能：二、肽二、肽肽是氨基酸的線性聚合物，常稱多肽鏈（肽是氨基酸的線性聚合物，常稱多肽鏈（peptide chainpeptide chain

11、）。）。蛋白質(zhì)是由一條或多條具有確定的氨基酸序列的多肽鏈構(gòu)成蛋白質(zhì)是由一條或多條具有確定的氨基酸序列的多肽鏈構(gòu)成的大分子。的大分子。（一）肽和肽鍵的結(jié)構(gòu)（一）肽和肽鍵的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)分子中氨基酸連接的基本方式是肽鍵。蛋白質(zhì)分子中氨基酸連接的基本方式是肽鍵。CCNCCNCCNCCNCCH2CHCH2CH2CH2COO-OHCO2HCH2CONH2OHCH3H3N+OOOOHHHHHHHHHSerValTyrAspGlnCH3N-端C-端肽鍵肽鏈寫法肽鏈寫法：游離：游離-氨基在左，游離氨基在左，游離-羧基在右，氨基酸之間用羧基在右，氨基酸之間用“-”表示肽鍵。表示肽鍵。H2N-絲氨酸絲氨酸-纈氨酸纈氨

12、酸-酪氨酸酪氨酸-天冬氨酸天冬氨酸-谷氨酰氨谷氨酰氨-COOHSer-Val-Tyr-Asp-Gln（S-V-Y-D-Q）由于羰基碳由于羰基碳- -氧雙鍵的靠攏，允許存在共振結(jié)構(gòu)（氧雙鍵的靠攏，允許存在共振結(jié)構(gòu)（resonance structureresonance structure），），碳與氮之間的肽鍵有部分雙鍵性質(zhì)，由碳與氮之間的肽鍵有部分雙鍵性質(zhì)，由CO-NHCO-NH構(gòu)成的肽單元呈現(xiàn)相對的剛性構(gòu)成的肽單元呈現(xiàn)相對的剛性和平面化，肽鍵中的和平面化，肽鍵中的4 4個(gè)原子和它相鄰的兩個(gè)個(gè)原子和它相鄰的兩個(gè)-碳原子多處于同一個(gè)平面碳原子多處于同一個(gè)平面上。上。多肽鏈可以看成由多肽鏈可以看

13、成由C C串聯(lián)起來的無數(shù)個(gè)酰胺平面組成串聯(lián)起來的無數(shù)個(gè)酰胺平面組成共振產(chǎn)生的重要結(jié)果：共振產(chǎn)生的重要結(jié)果： 限制繞肽鍵的自由旋轉(zhuǎn)限制繞肽鍵的自由旋轉(zhuǎn) 形成酰胺平面形成酰胺平面 產(chǎn)生鍵的平均化產(chǎn)生鍵的平均化 肽鍵呈反式構(gòu)型肽鍵呈反式構(gòu)型sp2sp2sp2sp3共振雜化體共振雜化體（二）肽的物理和化學(xué)性質(zhì)（二）肽的物理和化學(xué)性質(zhì)短肽的晶體是離子晶格，在水溶液中以偶極離子存在。在短肽的晶體是離子晶格，在水溶液中以偶極離子存在。在pH0-14pH0-14范圍內(nèi)，肽鍵中的亞氨基不能解離。范圍內(nèi)，肽鍵中的亞氨基不能解離。小肽的滴定曲線和氨基酸的滴定曲線很相似。小肽的滴定曲線和氨基酸的滴定曲線很相似。肽的化

14、學(xué)反應(yīng)也和氨基酸一樣，游離的肽的化學(xué)反應(yīng)也和氨基酸一樣，游離的氨基、氨基、羧羧基和基和R R基可以發(fā)生與氨基酸中相應(yīng)的基團(tuán)類似的反應(yīng)。雙縮基可以發(fā)生與氨基酸中相應(yīng)的基團(tuán)類似的反應(yīng)。雙縮脲反應(yīng)是肽和蛋白質(zhì)所特有的，而為氨基酸所沒有的一個(gè)脲反應(yīng)是肽和蛋白質(zhì)所特有的，而為氨基酸所沒有的一個(gè)顏色反應(yīng)。顏色反應(yīng)。一般短肽的旋光度約等于組成該肽中各個(gè)氨基酸的旋光度一般短肽的旋光度約等于組成該肽中各個(gè)氨基酸的旋光度的總和，但較長的肽或蛋白質(zhì)的旋光度則不能這樣簡單相的總和，但較長的肽或蛋白質(zhì)的旋光度則不能這樣簡單相加。加。（三）天然存在的活性肽（三）天然存在的活性肽生物體內(nèi)游離存在著很多活性肽，具有各種特殊的

15、生物生物體內(nèi)游離存在著很多活性肽，具有各種特殊的生物學(xué)功能。學(xué)功能。激素：催產(chǎn)素、加壓素、舒緩激肽激素：催產(chǎn)素、加壓素、舒緩激肽抗生素：短桿菌肽、多粘菌素抗生素：短桿菌肽、多粘菌素E E、放線菌素、放線菌素D D蕈的劇毒毒素：蕈的劇毒毒素：鵝膏蕈堿鵝膏蕈堿還原型谷胱甘肽還原型谷胱甘肽鵝肌肽、肌肽鵝肌肽、肌肽天然肽中含有蛋白質(zhì)中不存在的天然肽中含有蛋白質(zhì)中不存在的-肽鍵、肽鍵、丙氨酸和丙氨酸和D D型氨基酸。型氨基酸。三、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測定三、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測定蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)指多肽鏈中的氨基酸序列。蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)指多肽鏈中的氨基酸序列。（一）蛋白質(zhì)測序的策略（一）蛋白質(zhì)測序的策略 (1)

16、 (1)測定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目。測定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目。 (2)(2)拆分蛋白質(zhì)分子的多肽鏈。拆分蛋白質(zhì)分子的多肽鏈。 (3)(3)測定多肽鏈的氨基酸組成。測定多肽鏈的氨基酸組成。 (4)(4)分析多肽鏈的分析多肽鏈的N N末端和末端和C C末端殘基。末端殘基。 (5)(5)斷裂多肽鏈內(nèi)的二硫鍵。斷裂多肽鏈內(nèi)的二硫鍵。 (6)(6)多肽鏈斷裂成肽段。多肽鏈斷裂成肽段。 (7)(7)測定各個(gè)肽段的氨基酸順序。測定各個(gè)肽段的氨基酸順序。 (8)(8)確定肽段在多肽鏈中的次序。確定肽段在多肽鏈中的次序。 (9)(9)確定原多肽鏈中二硫鍵的位置。確定原多肽鏈中二硫鍵的位置。將肽段順序進(jìn)行疊

17、聯(lián)以確定完整的順序?qū)㈦亩雾樞蜻M(jìn)行疊聯(lián)以確定完整的順序 將肽段分離并測出順序?qū)㈦亩畏蛛x并測出順序?qū)Ｒ恍粤呀鈱Ｒ恍粤呀饽┒税被釡y定末端氨基酸測定二硫鍵拆開二硫鍵拆開純蛋白質(zhì)純蛋白質(zhì)（二）（二）N-N-末端和末端和C-C-末端氨基酸殘基的鑒定末端氨基酸殘基的鑒定1.N-1.N-末端分析末端分析（1 1）DNFBDNFB法；法；（2 2）DNSDNS法法（3 3）PITCPITC法法（4 4）氨肽酶法）氨肽酶法2.C-2.C-末端分析末端分析（1 1）肼解法；）肼解法；（2 2）還原法）還原法（3 3）羧肽酶法）羧肽酶法 SangerSanger法。法。2,4-2,4-二硝基氟苯在堿性條件下，能夠與

18、二硝基氟苯在堿性條件下，能夠與肽鏈肽鏈N-N-端的游離氨基作用，生成二硝基苯衍生物端的游離氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNPDNP）。）。 在酸性條件下水解，得到黃色在酸性條件下水解，得到黃色DNP-DNP-氨基酸。該產(chǎn)物氨基酸。該產(chǎn)物能夠用乙醚抽提分離。不同的能夠用乙醚抽提分離。不同的DNP-DNP-氨基酸可以用色氨基酸可以用色譜法進(jìn)行鑒定。譜法進(jìn)行鑒定。O2NFNO2+ H2NCHCROHNCHCROO2NNO2H+H2OO2NNO2HNCHCROOH+氨基酸DNFBN-端氨基酸DNP衍生物DNP-氨基酸在堿性條件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以與在堿性條件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺

19、酰氯）可以與N-N-端氨端氨基酸的游離氨基作用，得到丹磺酰氨基酸。基酸的游離氨基作用，得到丹磺酰氨基酸。此法的優(yōu)點(diǎn)是丹磺酰此法的優(yōu)點(diǎn)是丹磺酰- -氨基酸有很強(qiáng)的熒光性質(zhì)，檢測靈敏度氨基酸有很強(qiáng)的熒光性質(zhì)，檢測靈敏度可以達(dá)到可以達(dá)到1 1 1010-9-9molmol。N(CH3)2SO2ClH2NCHCROHNCHCROSO2N(CH3)2+水解N(CH3)2SO2HNCHCROOH+氨基酸丹磺酰氯多肽N-端丹磺酰N-端氨基酸丹磺酰氨基酸 氨肽酶是一種肽鏈外切酶，它能從多肽氨肽酶是一種肽鏈外切酶，它能從多肽鏈的鏈的N-N-端逐個(gè)的向里水解。端逐個(gè)的向里水解。 根據(jù)不同的反應(yīng)時(shí)間測出酶水解所釋放

20、根據(jù)不同的反應(yīng)時(shí)間測出酶水解所釋放出的氨基酸種類和數(shù)量，按反應(yīng)時(shí)間和出的氨基酸種類和數(shù)量，按反應(yīng)時(shí)間和氨基酸殘基釋放量作動(dòng)力學(xué)曲線，從而氨基酸殘基釋放量作動(dòng)力學(xué)曲線，從而知道蛋白質(zhì)的知道蛋白質(zhì)的N-N-末端殘基順序。末端殘基順序。 最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解以亮氨酸殘基為以亮氨酸殘基為N-N-末端的肽鍵速度最大。末端的肽鍵速度最大。 此法是多肽鏈C-C-端氨基酸分析法端氨基酸分析法。多肽與肼在無水條件下加熱，C-端氨基酸即從肽鏈上解離出來，其余的氨基酸則變成肼化物。肼化物能夠與苯甲醛縮肼化物能夠與苯甲醛縮合成不溶于水的物質(zhì)合成不溶于水的物質(zhì)而與C-端氨

21、基酸分離。H2NCH CROHNCH CROORnCCHHNOHn-1N-端氨基酸 C-端氨基酸ORnCCHH2NOHH2NCH CRONHNH2+H+NH2NH2氨基酸酰肼C-端氨基酸 羧肽酶是一種肽鏈外切酶，它能從多肽鏈的羧肽酶是一種肽鏈外切酶，它能從多肽鏈的C-C-端逐個(gè)的水解端逐個(gè)的水解AAAA。根據(jù)不同的反應(yīng)時(shí)間測。根據(jù)不同的反應(yīng)時(shí)間測出酶水解所釋放出的氨基酸種類和數(shù)量，從出酶水解所釋放出的氨基酸種類和數(shù)量，從而知道蛋白質(zhì)的而知道蛋白質(zhì)的C-C-末端殘基順序。末端殘基順序。 目前常用的羧肽酶有四種：目前常用的羧肽酶有四種：A,B,CA,B,C和和Y Y；A A和和B B來自胰臟；來自

22、胰臟；C C來自柑桔葉；來自柑桔葉；Y Y來自面包酵母。來自面包酵母。 羧肽酶羧肽酶A A能水解除能水解除Pro,ArgPro,Arg和和LysLys以外的所有以外的所有C-C-末端氨基酸殘基；末端氨基酸殘基；B B只能水解只能水解ArgArg和和LysLys為為C-C-末末端殘基的肽鍵。端殘基的肽鍵。（三）二硫橋的斷裂（三）二硫橋的斷裂斷裂二硫橋的主要方法是過甲酸氧化法和巰基化合物還原斷裂二硫橋的主要方法是過甲酸氧化法和巰基化合物還原法。法。s ss sHCOOOHHCOOOHSOSO3 3H HSOSO3 3H HS SS SS SS SS SS S胰島素胰島素HO-CHHO-CH2 2-

23、CH-CH2 2-SH-SHSHSHSHSHSHSHSHSHSHSHSHSHSCHSCH2 2C00HC00H SCHSCH2 2C00HC00HSCHSCH2 2C00HC00HSCHSCH2 2C00HC00HSCHSCH2 2C00HC00HSCHSCH2 2C00HC00HICHICH2 2COOHCOOH作用：作用：這些反應(yīng)可用于巰基的保護(hù)這些反應(yīng)可用于巰基的保護(hù)。-OOCCHCH2SHNH3+CH2OCClO-OOCCHCH2SNH3+OCCH2OCH2-OOCCHCH2SNH3+CH2ClICH2CNH2OCH2CNH2O-OOCCHCH2SNH3+（四）氨基酸組（四）氨基酸組成

24、的分析成的分析用于蛋白的氨基酸用于蛋白的氨基酸組成測定的水解方組成測定的水解方法主要是酸水解，法主要是酸水解，同時(shí)輔以堿水解。同時(shí)輔以堿水解。氨基酸分析儀圖譜氨基酸分析儀圖譜（五）多肽鏈的部分裂解和肽段混合物的分離（五）多肽鏈的部分裂解和肽段混合物的分離純化純化1.1.酶裂解法酶裂解法胰蛋白酶胰蛋白酶(trypsin(trypsin) ) 這是最常這是最常用的蛋白水解酶，專一性強(qiáng)，只斷用的蛋白水解酶，專一性強(qiáng)，只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵。得到的是以的肽鍵。得到的是以ArgArg或或LysLys為為C-C-末端殘基的肽段，肽段數(shù)目等于多末端殘基的肽段，

25、肽段數(shù)目等于多肽鏈中肽鏈中ArgArg和和LysLys總數(shù)加總數(shù)加1 1。為了減少胰蛋白酶的作用位點(diǎn)，可以通過化學(xué)修飾將其側(cè)鏈為了減少胰蛋白酶的作用位點(diǎn)，可以通過化學(xué)修飾將其側(cè)鏈基因保護(hù)起來。用馬來酸酐可以保護(hù)基因保護(hù)起來。用馬來酸酐可以保護(hù)LysLys殘基側(cè)鏈上的殘基側(cè)鏈上的NHNH2 2，胰蛋白酶就不會(huì)水解，胰蛋白酶就不會(huì)水解LysLys竣基參與形成的肽鍵，只能斷竣基參與形成的肽鍵，只能斷裂裂ArgArg羧基所形成的肽鍵；反之，如果用羧基所形成的肽鍵；反之，如果用1 1，2 2環(huán)己二酮修飾環(huán)己二酮修飾ArgArg的胍基，則胰蛋白面只能裂解的胍基，則胰蛋白面只能裂解LysLys羧基所形成的肽

26、鍵。羧基所形成的肽鍵。如果想增加多肽鏈中胰蛋白酶的斷裂點(diǎn)，可以用丫丙啶處理如果想增加多肽鏈中胰蛋白酶的斷裂點(diǎn)，可以用丫丙啶處理多肽鏈樣品，這時(shí)多肽鏈樣品，這時(shí)CysCys殘基側(cè)鏈被修飾成類似殘基側(cè)鏈被修飾成類似LysLys的側(cè)鏈，也的側(cè)鏈，也具有具有NHNH2 2。這樣胰蛋白酶便能斷裂。這樣胰蛋白酶便能斷裂CysCys羧基端的肽鍵。羧基端的肽鍵。NHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR1R R1 1=Lys=Lys和和ArgArg側(cè)鏈（專一性較強(qiáng)，水解速度快）。側(cè)鏈（專一性較強(qiáng)，水解速度快）。R R2 2=Pro =Pro 水水解受抑。解受抑。糜蛋白酶糜蛋白酶(chymo

27、trypin(chymotrypin) )或胰凝乳蛋白酶或胰凝乳蛋白酶(C(Chymotrypsinhymotrypsin) )：它斷裂它斷裂PhePhe、TrpTrp和和TyrTyr等疏水氨基酸的羧基參與形成的肽鍵。等疏水氨基酸的羧基參與形成的肽鍵。斷裂鍵鄰近的基團(tuán)是堿性的，裂解能力增加；是酸性的，裂斷裂鍵鄰近的基團(tuán)是堿性的，裂解能力增加；是酸性的，裂解能力將減弱。解能力將減弱。NHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR1肽鏈水解位點(diǎn)水解位點(diǎn)R R1 1=Phe, Trp,Tyr=Phe, Trp,Tyr時(shí)水解快時(shí)水解快; R; R1 1= = LeuLeu，MetMet

28、和和HisHis水解稍慢。水解稍慢。R R2 2=Pro =Pro 水解受抑。水解受抑。NHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR1肽鏈水解位點(diǎn)水解位點(diǎn)胃蛋白酶胃蛋白酶(pepsin)(pepsin) 它要求被斷裂鍵兩側(cè)的殘基都是疏水它要求被斷裂鍵兩側(cè)的殘基都是疏水性氨基酸，如性氨基酸，如Phe-PhePhe-Phe。此外與糜蛋白酶不同的是酶作用的。此外與糜蛋白酶不同的是酶作用的最適最適pHpH，前者是，前者是pH2pH2，后者是，后者是pH8-9pH8-9，由于二硫鍵在酸性條件，由于二硫鍵在酸性條件下穩(wěn)定，因此確定二硫鍵位置時(shí)，常用胃蛋白酶來水解。下穩(wěn)定，因此確定二硫鍵位

29、置時(shí)，常用胃蛋白酶來水解。R R1 1和和R R2 2Phe, Trp, Tyr; LeuPhe, Trp, Tyr; Leu以及以及其它疏水性氨基酸水解速度較快。其它疏水性氨基酸水解速度較快。R R1 1=Pro =Pro 水解受抑。水解受抑。NHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR1肽鏈水解位點(diǎn)水解位點(diǎn)嗜熱菌蛋白酶（嗜熱菌蛋白酶（thermolysinthermolysin）: :常用于斷裂較短的多肽鏈。常用于斷裂較短的多肽鏈。R R2 2=Phe, Trp, Tyr; Leu=Phe, Trp, Tyr; Leu，IleIle, Met, Met以及其它疏水性強(qiáng)的氨

30、以及其它疏水性強(qiáng)的氨基酸水解速度較快?；崴馑俣容^快。R R2 2=Pro=Pro或或GlyGly 水解受抑。水解受抑。R R1 1或或R R3 3=Pro =Pro 水解受抑。水解受抑。葡萄球菌蛋白酶（葡萄球菌蛋白酶（Staphylococcal protease)Staphylococcal protease) 當(dāng)裂解在當(dāng)裂解在磷酸緩沖液磷酸緩沖液(pH7.8)(pH7.8)中進(jìn)行的，它能在中進(jìn)行的，它能在GluGlu殘基和殘基和AspAsp殘基的殘基的羧基側(cè)斷裂肽鍵。如果改用碳酸氫銨緩沖液羧基側(cè)斷裂肽鍵。如果改用碳酸氫銨緩沖液(pH7.8)(pH7.8)或醋酸或醋酸銨緩沖液銨緩沖液(p

31、H4.0)(pH4.0)時(shí)，則只能斷裂時(shí)，則只能斷裂GluGlu殘基的羧基側(cè)肽鍵。殘基的羧基側(cè)肽鍵。梭菌蛋白酶（梭菌蛋白酶（clostripainclostripain） 專門裂解專門裂解ArgArg殘基的羧基所形殘基的羧基所形成的肽鍵。即使在成的肽鍵。即使在6mol/L6mol/L尿素中尿素中2020小時(shí)內(nèi)仍具活力，這樣對小時(shí)內(nèi)仍具活力，這樣對不溶性蛋白質(zhì)的長時(shí)間裂解將是很有效的。不溶性蛋白質(zhì)的長時(shí)間裂解將是很有效的。（Phe.Tyr.Trp）（Arg.Lys）（脂肪族）（脂肪族）胰凝乳胰凝乳蛋白酶蛋白酶胃蛋白酶胃蛋白酶彈性蛋白酶彈性蛋白酶羧肽酶羧肽酶胰蛋白酶胰蛋白酶氨肽酶氨肽酶羧肽酶羧肽酶

32、（Phe. Trp）2. 2. 化學(xué)裂解法化學(xué)裂解法 溴化氰溴化氰只斷裂由只斷裂由MetMet殘基的羧基參加形成的肽鍵。殘基的羧基參加形成的肽鍵。CH3S：CH2CH2CHNHCNHCHCOOR+BrC+NBr-CH3S+CH2CH2CHNHCNHCHCOORCNCH3SCN CH2CHNHCNHCHCOORCH2+H2O+CH2CHNHCOCH2OH3N+CHCOR高絲氨酸內(nèi)酯羥胺羥胺能專一性地?cái)嗔涯軐Ｒ恍缘財(cái)嗔袮sn-GlyAsn-Gly之間的肽鍵。但專一性不之間的肽鍵。但專一性不很強(qiáng)，如很強(qiáng)，如Asn-LeuAsn-Leu及及AsnAsn-Ala-Ala鍵也能部分裂解。鍵也能部分裂解。肽

33、段的分離提純肽段的分離提純 多肽鏈用上述方法斷裂后，所得的肽段混多肽鏈用上述方法斷裂后，所得的肽段混合物通常使用凝膠過濾、凝膠電泳、離子交換纖維素和離子合物通常使用凝膠過濾、凝膠電泳、離子交換纖維素和離子交換萄聚糖柱層析、高效液相色譜、高效薄層層析等方法進(jìn)交換萄聚糖柱層析、高效液相色譜、高效薄層層析等方法進(jìn)行分離提純。行分離提純。1.Edman1.Edman化學(xué)降解化學(xué)降解（六）肽段氨基酸序列的測定（六）肽段氨基酸序列的測定2.2.酶降解法酶降解法 蛋 白 水 解 酶 中 有 一 類 是 肽 鏈 外 切 酶 或 稱 外 肽 酶蛋 白 水 解 酶 中 有 一 類 是 肽 鏈 外 切 酶 或 稱

34、外 肽 酶（exopeptidasesexopeptidases) )，例如氨肽酶和羧肽酶，它們分別從肽鏈的，例如氨肽酶和羧肽酶，它們分別從肽鏈的N N端和端和C C端逐個(gè)地向里切。因此，原則上只要能跟隨酶水解的過端逐個(gè)地向里切。因此，原則上只要能跟隨酶水解的過程分別定量測出釋放的氨基酸，便能確定肽的順序。然而這種程分別定量測出釋放的氨基酸，便能確定肽的順序。然而這種方法實(shí)際上有許多困難，局限性很大，它只能用來測定末端附方法實(shí)際上有許多困難，局限性很大，它只能用來測定末端附近很少幾個(gè)殘基的順序。近很少幾個(gè)殘基的順序。3.3.質(zhì)譜法質(zhì)譜法質(zhì)譜法一次能測的氨基酸殘基一般質(zhì)譜法一次能測的氨基酸殘基一

35、般1010個(gè)左右，但質(zhì)譜法具有個(gè)左右，但質(zhì)譜法具有樣品用量少，分析速度快的優(yōu)點(diǎn)。樣品用量少，分析速度快的優(yōu)點(diǎn)。4.4.根據(jù)核苷酸序列的推定法根據(jù)核苷酸序列的推定法推定的依據(jù)是推定的依據(jù)是“中心法則中心法則”。推定法仍需與直接的氨基酸序列分析相配合，如果沒有必需推定法仍需與直接的氨基酸序列分析相配合，如果沒有必需的部分氨基酸序列分析，就不可能找到正確的密碼讀框。的部分氨基酸序列分析，就不可能找到正確的密碼讀框。（七）肽段在多肽鏈中次序的決定（七）肽段在多肽鏈中次序的決定A A法水解得到四個(gè)小肽：法水解得到四個(gè)小肽： A A1 1 Ala-Phe Ala-Phe A A2 2 Gly-Lys-As

36、n-Tyr Gly-Lys-Asn-Tyr A A3 3 Arg-Tyr Arg-Tyr A A4 4 His-Val His-ValB B法水解得到三個(gè)小肽：法水解得到三個(gè)小肽： B B1 1 Ala-Phe-Gly-Lys Ala-Phe-Gly-Lys B B2 2 Asn-Tyr-Arg Asn-Tyr-Arg B B3 3 Tyr Tyr- His-Val- His-Val重疊法：重疊法： Ala-Phe-Gly-LysAla-Phe-Gly-LysAsn-Tyr-ArgAsn-Tyr-ArgTyrTyr-His-Val-His-Val（八）二硫橋位置的確定（八）二硫橋位置的確定一般

37、采用胃蛋白酶處理含有二硫鍵的多肽鏈一般采用胃蛋白酶處理含有二硫鍵的多肽鏈( (切點(diǎn)多；酸性環(huán)境切點(diǎn)多；酸性環(huán)境下防止二硫鍵發(fā)生交換下防止二硫鍵發(fā)生交換) )。將所得的肽段利用將所得的肽段利用BrownBrown及及HartlayHartlay的對角線電泳技術(shù)進(jìn)行分離。的對角線電泳技術(shù)進(jìn)行分離。+ +- -+ +- -第二向第二向第一向第一向a ab bBrownBrown和和HartlayHartlay對角線電泳圖解對角線電泳圖解pH6.5pH6.5圖中圖中a a、b b兩個(gè)斑點(diǎn)是由兩個(gè)斑點(diǎn)是由一個(gè)二硫鍵斷裂產(chǎn)生的一個(gè)二硫鍵斷裂產(chǎn)生的肽段肽段（九）蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫（九）蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫由于測定

38、克隆基因的核苷酸序列比測定蛋白質(zhì)氨基酸的序由于測定克隆基因的核苷酸序列比測定蛋白質(zhì)氨基酸的序列更快、更有效，現(xiàn)在大多數(shù)蛋白質(zhì)序列是從核苷酸序列列更快、更有效，現(xiàn)在大多數(shù)蛋白質(zhì)序列是從核苷酸序列翻譯成氨基酸序列。要確定一個(gè)新序列，研究者所作的第翻譯成氨基酸序列。要確定一個(gè)新序列，研究者所作的第一件事就是將它與數(shù)據(jù)庫中的其它已知的序列進(jìn)行比較，一件事就是將它與數(shù)據(jù)庫中的其它已知的序列進(jìn)行比較，確定其中是否存在同源性。確定其中是否存在同源性。四、蛋白質(zhì)的氨基酸序列四、蛋白質(zhì)的氨基酸序列與生物功能與生物功能（一）同源蛋白質(zhì)的物種差異與生物進(jìn)化（一）同源蛋白質(zhì)的物種差異與生物進(jìn)化1.1.同源蛋白質(zhì)同源蛋

39、白質(zhì)在不同生物體中行使相同或相似功能的蛋白質(zhì)稱為在不同生物體中行使相同或相似功能的蛋白質(zhì)稱為同源蛋同源蛋白質(zhì)白質(zhì)。同源蛋白質(zhì)的氨基酸序列具有明顯的相似性稱為同源蛋白質(zhì)的氨基酸序列具有明顯的相似性稱為序列同源序列同源性性。同源蛋白質(zhì)一般具有幾乎相同長度的多肽鏈，它同源蛋白質(zhì)一般具有幾乎相同長度的多肽鏈，它們的氨基酸序列與那些提取它們的物種的親緣關(guān)們的氨基酸序列與那些提取它們的物種的親緣關(guān)系具有同一性。系具有同一性。14106100134323029271817675952514845413887848280706891GlyGlyPheCysGlyGlyGlyArgLysGlyCysLysPhe

40、HisProLeuGlyArgTyrAlaAsnTrpTyr707580LysLysLysProProTyrIleGlyThrMetAsnLeu血紅素血紅素細(xì)胞色素細(xì)胞色素c c分子的空間結(jié)構(gòu)分子的空間結(jié)構(gòu)不變不變的的AAAA殘基殘基 35個(gè)不變的個(gè)不變的AA殘基，是殘基，是Cyt C 的生物功能所不的生物功能所不可缺少的。其中有的可能參加維持分子構(gòu)象；有的可缺少的。其中有的可能參加維持分子構(gòu)象；有的可能參與電子傳遞；有的可能參與可能參與電子傳遞；有的可能參與“識(shí)別識(shí)別”并結(jié)合并結(jié)合細(xì)胞色素還原酶和氧化酶。細(xì)胞色素還原酶和氧化酶。不同種屬不同種屬氨基酸殘基的差異數(shù)目氨基酸殘基的差異數(shù)目分歧時(shí)間

41、分歧時(shí)間(百萬年百萬年)人人-猴猴150-60人人-馬馬1270-75人人-狗狗1070-75豬豬-牛牛-羊羊0馬馬-牛牛360-65哺乳類哺乳類-雞雞10-15280哺乳類哺乳類-猢猢17-21400脊椎動(dòng)物脊椎動(dòng)物-酵母酵母43-481,100細(xì)胞色素細(xì)胞色素C C分子中氨基酸殘基的差異數(shù)目及分歧時(shí)間分子中氨基酸殘基的差異數(shù)目及分歧時(shí)間 細(xì)胞色素細(xì)胞色素c c肽鏈中肽鏈中2727個(gè)位置的氨基酸殘基對所有已測試的種個(gè)位置的氨基酸殘基對所有已測試的種屬都是相同的，表明這些殘基是規(guī)定細(xì)胞色素屬都是相同的，表明這些殘基是規(guī)定細(xì)胞色素c c的生物活性的生物活性所必需。例如第所必需。例如第1414和第

42、和第1717位置上的位置上的CysCys殘基可能保證與輔基殘基可能保證與輔基血紅素連接的必要位置，第血紅素連接的必要位置，第7070到到8080位置上的不變肽段可能是位置上的不變肽段可能是細(xì)胞色素細(xì)胞色素c c與酶相結(jié)合的部分。肽鏈中的可變殘基可能是一與酶相結(jié)合的部分。肽鏈中的可變殘基可能是一些些“填充填充”或間隔的區(qū)域，氨基酸的變換不影響蛋白質(zhì)的功或間隔的區(qū)域，氨基酸的變換不影響蛋白質(zhì)的功能。能。在不同種屬來源的細(xì)胞色素在不同種屬來源的細(xì)胞色素c c中，可以變換的氨基酸殘基數(shù)中，可以變換的氨基酸殘基數(shù)目與這些種屬在系統(tǒng)發(fā)生上的位置有密切關(guān)系，即在進(jìn)化位目與這些種屬在系統(tǒng)發(fā)生上的位置有密切關(guān)系

43、，即在進(jìn)化位置上相距愈遠(yuǎn)，則氨基酸順序之間的差別愈大。細(xì)胞色素置上相距愈遠(yuǎn)，則氨基酸順序之間的差別愈大。細(xì)胞色素c c的氨基鼓順序分析資料已被用來核對各個(gè)物種之間的分類學(xué)的氨基鼓順序分析資料已被用來核對各個(gè)物種之間的分類學(xué)關(guān)系，以及繪制進(jìn)化樹關(guān)系，以及繪制進(jìn)化樹(evolutionary tree)(evolutionary tree)即系統(tǒng)發(fā)生樹即系統(tǒng)發(fā)生樹(phylogenetic(phylogenetic tree) tree)。根據(jù)進(jìn)化樹不僅可以研究從單細(xì)胞。根據(jù)進(jìn)化樹不僅可以研究從單細(xì)胞有機(jī)體到多細(xì)胞有機(jī)體的生物進(jìn)化過程，而且可以粗略估計(jì)有機(jī)體到多細(xì)胞有機(jī)體的生物進(jìn)化過程，而且可以粗

44、略估計(jì)現(xiàn)存的各類種屬生物的分歧現(xiàn)存的各類種屬生物的分歧(divergence)(divergence)時(shí)間。時(shí)間。生物生物 與人不同的與人不同的AAAA數(shù)目數(shù)目黑猩猩黑猩猩 0恒河猴恒河猴 1兔兔 9袋鼠袋鼠 10牛、豬、羊、狗牛、豬、羊、狗 11馬馬 12雞、火雞雞、火雞 13響尾蛇響尾蛇 14海龜海龜 15金槍魚金槍魚 21角餃角餃 23小蠅小蠅 25蛾蛾 31小麥小麥 35粗早鏈孢霉粗早鏈孢霉 43酵母酵母 44 根據(jù)細(xì)胞色素根據(jù)細(xì)胞色素 C的的順序種屬差異建立順序種屬差異建立起來的進(jìn)化樹起來的進(jìn)化樹圓圈代表進(jìn)化中的圓圈代表進(jìn)化中的分歧點(diǎn)，支干旁的分歧點(diǎn)，支干旁的數(shù)字是給定有機(jī)體數(shù)字是給

45、定有機(jī)體譜系的細(xì)胞色素譜系的細(xì)胞色素c c與其祖先差異的殘與其祖先差異的殘基數(shù)基數(shù)（二）同源蛋白質(zhì)具有共同的進(jìn)化起源（二）同源蛋白質(zhì)具有共同的進(jìn)化起源1.1.氧合血紅素蛋白氧合血紅素蛋白肌紅蛋白、血紅蛋白肌紅蛋白、血紅蛋白鏈和鏈和鏈?zhǔn)侵榈鞍?，它們有很鏈?zhǔn)侵榈鞍?，它們有很高的序列同源。這種同源關(guān)系表明隨機(jī)突變一級(jí)結(jié)構(gòu)方面高的序列同源。這種同源關(guān)系表明隨機(jī)突變一級(jí)結(jié)構(gòu)方面氨基酸取代和分歧或趨異事件的進(jìn)化順序。氨基酸取代和分歧或趨異事件的進(jìn)化順序。2.2.絲氨酸蛋白酶類絲氨酸蛋白酶類胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和彈性蛋白酶顯示足夠的序列同胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和彈性蛋白酶顯示足夠的序列同源性，它們是經(jīng)過祖

46、先絲氨酸蛋白酶基因的復(fù)制而來。源性，它們是經(jīng)過祖先絲氨酸蛋白酶基因的復(fù)制而來。3.3.一些功能差異很大的蛋白質(zhì)一些功能差異很大的蛋白質(zhì)溶菌酶和溶菌酶和乳清蛋白的功能很少相似，但它們的三級(jí)結(jié)構(gòu)乳清蛋白的功能很少相似，但它們的三級(jí)結(jié)構(gòu)卻十分相似。根據(jù)它們的序列同源性可以推論出它們的進(jìn)化卻十分相似。根據(jù)它們的序列同源性可以推論出它們的進(jìn)化關(guān)系關(guān)系具有共同的起源。具有共同的起源。（三）血液凝固與氨基酸序列的局部斷裂（三）血液凝固與氨基酸序列的局部斷裂在動(dòng)物體內(nèi)的某些生物化學(xué)過程中，蛋白質(zhì)分子的部分肽在動(dòng)物體內(nèi)的某些生物化學(xué)過程中，蛋白質(zhì)分子的部分肽鏈必須先按特定的方式斷裂，然后才呈現(xiàn)生物活性。蛋白鏈必

47、須先按特定的方式斷裂，然后才呈現(xiàn)生物活性。蛋白質(zhì)分子的這一特性具有它的重要生物學(xué)意義。它是在生物質(zhì)分子的這一特性具有它的重要生物學(xué)意義。它是在生物進(jìn)化過程中發(fā)展起來的，是蛋白質(zhì)分于的結(jié)構(gòu)與功能具有進(jìn)化過程中發(fā)展起來的，是蛋白質(zhì)分于的結(jié)構(gòu)與功能具有高度統(tǒng)一性的表現(xiàn)。高度統(tǒng)一性的表現(xiàn)。1.1.血液凝固的生物化學(xué)原理血液凝固的生物化學(xué)原理血液凝固是一系列復(fù)雜的生物化學(xué)過程。這一過程的主要血液凝固是一系列復(fù)雜的生物化學(xué)過程。這一過程的主要環(huán)節(jié)有二：一是血漿中的凝血酶原受到血漿和血小板中一環(huán)節(jié)有二：一是血漿中的凝血酶原受到血漿和血小板中一些因子的激活而形成凝血酶些因子的激活而形成凝血酶(thrombin

48、)(thrombin)；二是血漿中的纖；二是血漿中的纖維蛋白原在凝血酶的激活下轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白維蛋白原在凝血酶的激活下轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白(fibrin)(fibrin)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使血液變成凝膠。網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使血液變成凝膠。凝血酶原是一種糖蛋白。在凝凝血酶原是一種糖蛋白。在凝血酶原致活物的催化下，凝血血酶原致活物的催化下，凝血酶 原 分 子 中 的 二 個(gè) 肽 鍵酶 原 分 子 中 的 二 個(gè) 肽 鍵(Arg274-Thr275(Arg274-Thr275和和Arg323-Arg323-Ile324Ile324）發(fā)生斷裂，釋放出分）發(fā)生斷裂，釋放出分子量力子量力3200032000的氨基末端

49、片的氨基末端片段形成有活性的凝血酶。段形成有活性的凝血酶。凝血酶由二條肽鏈通過一個(gè)二凝血酶由二條肽鏈通過一個(gè)二硫鍵交聯(lián)而成，一條肽鍵（硫鍵交聯(lián)而成，一條肽鍵（A A鏈鏈) )含含4949個(gè)殘基，另一條肽鍵個(gè)殘基，另一條肽鍵含含259259個(gè)殘基。個(gè)殘基。纖維蛋白原分子長纖維蛋白原分子長46nm46nm，分子量為，分子量為340 000340 000，屬纖維狀蛋白，屬纖維狀蛋白質(zhì)。每一分子含質(zhì)。每一分子含6 6條肽鏈，這條肽鏈，這6 6條肽鏈兩兩相同，分三種類，條肽鏈兩兩相同，分三種類，分別稱為分別稱為鏈鏈( (含含600600個(gè)殘基左右個(gè)殘基左右) )、鏈鏈(461(461個(gè)殘基個(gè)殘基) )和和鏈鏈(410(410個(gè)殘基個(gè)殘基) )。整個(gè)分子由對稱的兩部分組成，。整個(gè)分子由對稱的兩部分組成，6 6條肽鏈的條肽鏈的N N末端部分集中在中間。纖維蛋白原分子共含末端部