實驗2 蛋白質(zhì)的沉淀與透析

1、實驗二實驗二 蛋白質(zhì)的沉淀與透析蛋白質(zhì)的沉淀與透析l生物化學(xué)實驗之生物化學(xué)實驗之山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院【實驗?zāi)康摹俊緦嶒災(zāi)康摹?1. 學(xué)習(xí)蛋白質(zhì)沉淀和透析的基本原理學(xué)習(xí)蛋白質(zhì)沉淀和透析的基本原理 2. 掌握蛋白質(zhì)可逆沉淀、透析的基本操作方法掌握蛋白質(zhì)可逆沉淀、透析的基本操作方法 【實驗原理】【實驗原理】 某些試劑（如硫酸銨、氯化鈉）與蛋白質(zhì)作某些試劑（如硫酸銨、氯化鈉）與蛋白質(zhì)作用，可使蛋白質(zhì)沉淀；但當(dāng)除去使蛋白質(zhì)沉淀的用，可使蛋白質(zhì)沉淀；但當(dāng)除去使蛋白質(zhì)沉淀的因素后，蛋白質(zhì)又可再次溶于原來的溶劑中，這因素后，蛋白質(zhì)又可再次溶于原來的溶劑中，這種沉淀作用稱為可逆的沉淀

2、作用。種沉淀作用稱為可逆的沉淀作用。 一些物理因素（如劇烈震蕩、攪拌等）或一些物理因素（如劇烈震蕩、攪拌等）或化學(xué)因素（如重金屬離子、有機酸等），會破化學(xué)因素（如重金屬離子、有機酸等），會破壞蛋白質(zhì)的穩(wěn)定的構(gòu)象，引起蛋白質(zhì)變性。即壞蛋白質(zhì)的穩(wěn)定的構(gòu)象，引起蛋白質(zhì)變性。即使除去了使蛋白質(zhì)沉淀的因素，蛋白質(zhì)也不能使除去了使蛋白質(zhì)沉淀的因素，蛋白質(zhì)也不能再溶于原來的溶劑中再溶于原來的溶劑中, 即為不可逆沉淀作用。即為不可逆沉淀作用。 在實驗室分離純化蛋白質(zhì)的過程中，常利在實驗室分離純化蛋白質(zhì)的過程中，常利用透析的方法除去蛋白質(zhì)溶液中的小分子物質(zhì)用透析的方法除去蛋白質(zhì)溶液中的小分子物質(zhì)（無機鹽、單糖等

3、）。利用透析膜的半透膜作（無機鹽、單糖等）。利用透析膜的半透膜作用，小分子物質(zhì)可以自由通過與周圍的緩沖溶用，小分子物質(zhì)可以自由通過與周圍的緩沖溶液進行物質(zhì)交換，大分子物質(zhì)（蛋白質(zhì)）保留液進行物質(zhì)交換，大分子物質(zhì)（蛋白質(zhì)）保留在透析袋中而彼此分離。在透析袋中而彼此分離?！緦嶒灢襟E】【實驗步驟】 1. 蛋白質(zhì)的檢查蛋白質(zhì)的檢查 取卵清蛋白取卵清蛋白/NaCl/NaCl溶液溶液2ml2ml和和10%NaOH10%NaOH溶溶液液1ml1ml，搖勻，加，搖勻，加1%CuSO1%CuSO4 4溶液溶液1 12 2滴，滴，邊加邊搖。邊加邊搖。 2. 蛋白質(zhì)的可逆沉淀作用蛋白質(zhì)的可逆沉淀作用 1） 球蛋白沉

4、淀球蛋白沉淀 取卵清蛋白取卵清蛋白/NaCl溶液溶液2ml，傾斜試管，沿管壁，傾斜試管，沿管壁慢慢加入飽和硫酸銨溶液慢慢加入飽和硫酸銨溶液2ml，輕輕混勻，靜置，輕輕混勻，靜置5min。 2）清蛋白沉淀）清蛋白沉淀 過濾，除去鹽過濾，除去鹽析出的蛋白質(zhì)。析出的蛋白質(zhì)。 向濾液中加入向濾液中加入硫酸銨粉末至飽和。硫酸銨粉末至飽和。 3. 蛋白質(zhì)的透析蛋白質(zhì)的透析（1）裝樣：取一段透析袋，將一端夾住，由）裝樣：取一段透析袋，將一端夾住，由開口端加入含有硫酸銨的清蛋白沉淀（不可開口端加入含有硫酸銨的清蛋白沉淀（不可裝太滿，并適當(dāng)排出空氣），夾住袋口。裝太滿，并適當(dāng)排出空氣），夾住袋口。（2）透析：?。┩肝觯喝?0倍以上蛋白質(zhì)體積的去離子倍以上蛋白質(zhì)體積的去離子水，將裝好樣品的透析袋懸于大燒杯中部。水，將裝好樣品的透析袋懸于大燒杯中部。在燒杯底部放一個磁子，緩慢攪拌以促進溶在燒杯底部放一個磁子，緩慢攪拌以促進溶液交換。更換洗脫溶液數(shù)次（約液交換。更換洗脫溶液數(shù)次（約30min一次），一次），至達到透析平衡為止。至達到透析平衡為止。4. 蛋白質(zhì)透析效果檢查蛋白質(zhì)透析效果檢查 1）Cl-的檢查：的檢查： 取洗出液約取洗出液約2ml，加加10%HNO3溶液溶液12滴滴至酸性，加至酸性，加1%AgNO3 23滴，觀察有無白色滴，觀察有無白色沉淀。沉淀。