2蕓香苷的提取、精制、水解和鑒定

1、實(shí)驗(yàn)名稱(chēng)實(shí)驗(yàn)二 蕓香苜的提取、精制、水解和鑒定實(shí)驗(yàn)班級(jí)08藥本1、2班實(shí)驗(yàn)課吋間2010.5.11> 14、18、21課時(shí)數(shù)10分組12實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?. 學(xué)握堿-酸法提取黃酮類(lèi)化合物的原理及操作。2. 掌握黃酮苜的水解方法。3. 掌握黃酮甘的鑒定方法。實(shí)驗(yàn)原理：1. 蕓香甘分子中具有酚疑基，顯弱酸性，在堿水中成鹽增大溶解能力，用堿水 為溶劑煮沸提取，提取液加酸酸化后乂成為游離的蕓香甘而析出。并利用蕓香甘 對(duì)冷水和熱水的溶解度相差懸殊的特性進(jìn)行精制。2. 黃酮甘可通過(guò)酸水解得到甘元和糖，并可通過(guò)薄層色譜法進(jìn)行檢識(shí)。0how0ho-gic-rhaohorutinose注：蕓香甘(蘆丁，ruti

2、n)： c27h:i0016 - 3h20,淡黃色針狀結(jié)晶，mpl74°c178°c, 無(wú)水物為188°c190°c。溶解度：冷水中1 : 8000,熱水中1 : 200,冷乙 醇中1 : 300,熱乙醇中1 : 30,冷毗喘中1 : 12,微溶于丙酮、乙酸乙酯， 不溶于苯、氯仿、石油醸等溶劑。桝皮素(quercetin)： chwo； 2h20,黃色結(jié)品，mp313°c314°c,無(wú)水物為 316°co溶解度：冷乙醇中1 : 20,沸乙醇中1 : 23,可溶于甲醇、乙酸乙酯、 毗陀、丙酮等溶劑，不溶于水、乙瞇、苯、氯仿、石

3、油瞇。實(shí)驗(yàn)試藥與器材：試約：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸憾水、濃鹽酸、2%硫酸、乙醇、1% 氫氧化鈉溶液、1%鹽酸溶液、10% 酚溶液、濃硫酸、鎂粉、1%醋酸 鎂卬醇溶液、正丁醇、醋酸器材：電爐、漏斗、紫外分析儀、錐形瓶、量筒、燒杯、層析筒、試管實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法：一、蕓香甘的提取取槐花米20g （研碎），置于1000ml圓底燒瓶屮，加0.4%硼砂水溶液200ml, 在攪拌下加右灰乳調(diào)ph8,加熱微沸30分鐘，靜置幾分鐘傾出上清液，用棉花 過(guò)濾,藥渣同上重復(fù)一次。合并濾液用6n鹽酸調(diào)ph23,放置冰箱中析晶（一 夜以上），待全部結(jié)晶析岀，抽濾，得粗蕓香甘（濾餅用水洗34次），放置空氣 屮

4、自然干燥得粗品，稱(chēng)重、計(jì)算捉取率。二、蕓香甘的精制取2g加蒸餛水400ml,加熱煮沸溶解，趁熱抽濾，濾液放置過(guò)夜，析品， 抽濾，得精制蕓香試。烘干。三、蕓香苜的水解取精制蕓香貳lg,置250ml圓底燒瓶中,加2%h2so4溶液80ml,加熱冋流 30分鐘至1小時(shí)，開(kāi)始加熱10分鐘為澄清液，逐漸析岀黃色小針狀結(jié)晶，即為 楣皮素。放冷抽濾得結(jié)品，濾液保留作為糖的檢查，沉淀物用蒸傭水洗至屮性， 抽干水份，晾干稱(chēng)重，得粗制懈皮素。必要時(shí)可用稀乙醇重結(jié)晶。四、蕓香琶的檢識(shí)反應(yīng)1. 成鹽反應(yīng)取蕓香試10mg左右，置試管中加蒸憾水2ml,振搖，觀察試 管有無(wú)變化，滴加1%氫氧化鈉溶液數(shù)滴，振搖使蕓香試全部溶

5、解成為黃色澄 明溶液，然后再滴加1%鹽酸溶液數(shù)滴至成酸性反應(yīng)，溶液則由澄明轉(zhuǎn)為混濁狀 態(tài)（若當(dāng)時(shí)不岀現(xiàn)混濁時(shí)可放置片刻或放置冰箱中冷凍一定時(shí)間后再觀察）。2. 呈色反應(yīng)取蕓香苴和桝皮素約10mg,各用5ml乙醇溶解，制成樣品溶液，按下列方法 進(jìn)行試驗(yàn)，比較甘元和甘的反應(yīng)情況。（1）molish反應(yīng)取樣品溶液lml,加10% a -蔡酚乙醇溶液1ml,振搖后斜 置試管，沿管壁滴加0.5ml濃硫酸，靜置，觀察并記錄液面交界處顏色變化。（2）鹽酸鎂粉反應(yīng)蕓香試與懈皮素溶液分別置于試管中，加入金屬鎂粉少許，濃鹽酸23滴，觀察并記錄顏色變化。（3）醋酸鎂紙片反應(yīng)取兩張濾紙條，分別滴兩滴蕓香背、榊皮素的乙

6、醇溶液，然后各加1%醋酸鎂甲醇溶液兩滴，于紫外燈下觀察熒光變化，記錄現(xiàn)彖。五、蕓香甘及蒯皮素的紙層析鑒定層析材料：層析濾紙點(diǎn) 樣:（1）提取的蕓香昔乙醇溶液（2）提取的蒯皮素乙醇溶液展開(kāi)劑：正丁醇：醋酸：水（4： 1 ：5）上層溶液顯色：（1）先在可見(jiàn)光下觀察斑點(diǎn)顏色，然后在紫外燈下觀察斑點(diǎn)顏色（2）噴灑1%三氯化鋁乙醇試劑后再觀察斑點(diǎn)的變化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1. 提取過(guò)程中，加入硼砂的目的是為了保護(hù)蕓香甘分了中鄰二酚輕基，以減少 其氧化，并使其不與鈣離子結(jié)合（鈣鹽絡(luò)合物不溶于水），使蕓香甘不受損失， 提高產(chǎn)率。2. 實(shí)驗(yàn)屮應(yīng)嚴(yán)格控制堿提取、酸沉淀的ph值。加入石灰乳即可以達(dá)到堿性溶解 捉取的目的，述可以除去槐花米屮的多糖類(lèi)、粘液質(zhì)等，但堿性不宜過(guò)高（ph 不超過(guò)10）,因?yàn)樵趶?qiáng)堿性條件下煮沸，時(shí)間稍長(zhǎng)就可促使蕓香