日立L-8900全自動氨基酸分析儀簡易標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程要點(diǎn)

1、文件編號:題目：日立l-8900全自動氨基酸分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程日立l-8900全自動氨基酸分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程目的為規(guī)范日立l-8900全自動氨基酸分析儀的基本操作、維護(hù)保養(yǎng)、異常處理程序，防止 人為操作失誤，確保氨基酸分析儀正常運(yùn)轉(zhuǎn)，特制定本程序。2 .適用范圍本程序適用于日立l-8900全自動氨基酸分析儀。3 .責(zé)任1 .本程序的實(shí)施者為氨基酸分析儀操作者，各實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人對本程序的實(shí)施情況進(jìn)行監(jiān) 督。2 .日常運(yùn)行及維護(hù)、定期維護(hù)、定期點(diǎn)檢及保養(yǎng)由氨基酸分析儀操作者負(fù)責(zé)。4 .內(nèi)容(1)打開電腦(2)打開l-8900主機(jī)電源elite (3)雙擊桌面的圖標(biāo)iii 4,進(jìn)入1-1畫面，雙擊肛矮

2、耍圖標(biāo)，進(jìn)入程序。1-1(4)在菜單欄中依次點(diǎn)擊controlinstrument status出現(xiàn)1-2畫面，單擊變成8加苗 聯(lián)機(jī)。大約兩分鐘，初始化完畢"svse,n status|jniritietlii:ed中 uninitializedsy mem statusidleidle,圖1-2變成了圖1-3,各個組件可以進(jìn)行控制了。初始化完畢后，分離柱的溫度逐漸上升，分離柱的溫度會升到50co如果打開反應(yīng)柱的柱溫控制，則溫度大約20分鐘升到135 c,li option j l-8900 )tenn -column|treactor|puirp2 r1 b2 r3aiia

3、3;amplihvmhoii n vdynretempmodefltwu |ml/mlnpyesaurempa-manual openalionautosam?lercolumn owreactor h «ierwlwp1-2本溪本草堂藥物科技有限公司：規(guī)程文件page19/page16,j l-b9d0 |.j option270 tautoiamplcirvial no- tempcolumn曲r1-r3reacloiirjvolurnestemcomecldiseonnectmodule inf or rrkatanwashing stop20.0 比 | th xchanne

4、ll data |2 4疝charnel? data-59270g1-b6uuitemp1-32、手動各組件控制操作(1) 泵1和泵2,出現(xiàn)2-1的畫面。設(shè)置泵1,流量0.1ml/分鐘，b6 100%。點(diǎn)擊打開泵1。泵打開后，泵的背景顏色由灰色變?yōu)辄S色。點(diǎn)擊喇plimp2 sw2-1出現(xiàn)2-2的畫面,設(shè)置泵2,流量0.1ml/分鐘，r3 100%。點(diǎn)擊打開泵2。泵打開后，泵的背景顏色由灰色變?yōu)辄S色(2)自動進(jìn)樣器2-22-3的畫面，設(shè)置sampler wash不少于3次。2-3(3)分離柱柱溫箱點(diǎn)擊 el ,出現(xiàn)2-4畫面，設(shè)置柱溫50 c,設(shè)置on,打開柱溫箱。柱溫箱打開后，背 景顏色由灰色

5、變?yōu)辄S色。2-4(4)反應(yīng)柱柱溫箱點(diǎn)擊-0-,出現(xiàn)2-5畫面，設(shè)置柱溫135 c,設(shè)置on,打開柱溫箱。柱溫箱打開后, 背景顏色由灰色變?yōu)辄S色。2-5(5)鴇燈點(diǎn)擊 普|,出現(xiàn)2-6畫面，設(shè)置on,打開鴇燈。鴇燈打開后，背景顏色由灰色變?yōu)辄S2-63、編輯方法(1) stand by 程序(a)依次點(diǎn)擊method.現(xiàn)3-1-1的畫面。open method file陽岡查找范圍q)二| 口 method 官 5 雨，昌旦 lbb_ff-stdag),mt 國場魚ffttu. met |lbs_fh-stb®g).mst 向l88_fh-std met 回 lb3_s t and-by

6、 c25min). m lb3_stand-by(40min).4.6x60-2622 mt4. 6k6c-2622 (stand-by)一 mat4. 6x60-2622, tr«t4.8d60-3622 (eg). net打開暨取消幫助第園lb9_fm 4 6x60-2622.met-lb9 fh 4. &k60-2622 (stand-by). uhtmet文件名：|l69_fk 4 6x60-2&22($tani-by)文件類型建)；|llethcd filss 0*. net),find files that match these criteria:i e

7、xt in deso： | created: anytime二| find nowanalyst |二 modified:|any time二|n吆”司助search results3-1-1(b)選中l(wèi)3lfh 4. 6x6c-£622(51 and-by. met點(diǎn)擊i打開里再依次點(diǎn)擊method,出現(xiàn)3-1-2的畫面。instrun tnt sttup. . . ctrl+shi ft+f23-1-2columngudrd colurnn| guard columritoooo- 丁main columnammoniafiuer columnruction column(c)

8、在設(shè)置中選中各個柱(也可以不選)，其余參數(shù)默認(rèn)。| reaction column(000 (d)將方法另存為stand-by,文件名及路徑均可自選。注意最好不要覆蓋原來的方法,最好另存方法。(2)再生程序如同stand by程序，只是選中1j8uh 4 6x60-2622 (rg)而已。將方法另存為rg(3)分析程序(a)如同 stand by程序，選中,參數(shù)默認(rèn)，將方法另存為analyze。4、編輯 sequence(1 )依次點(diǎn)擊,出現(xiàn)4-1畫面。選中" for acquisition,其余參數(shù)默認(rèn)。sequence wizard - methodmethod ：data fi

9、le type* for acquisitionfrom existing daia fifesamount valuessample amourit:internal standard amount:multiplication factors:dilution factors:4-1(2)點(diǎn)擊 談心,出現(xiàn)4-2畫面，根據(jù)需要填寫各個參數(shù)(未知樣品的個數(shù)、未知樣 品重復(fù)次數(shù)等)。sequence wizard - unknownsnumber unknown runs in sequence :repetitions per run :sample id :|<d>|idata

10、pmth :|d:enterpriseproiectsdej3ultkdatadata fife:|<id>30create a separate row in the sequence for each repetition4-24-3(4)點(diǎn)擊next >,出現(xiàn)4-4畫面，根據(jù)需要填寫各個參數(shù)(標(biāo)樣品的個數(shù)、標(biāo)樣的重(3)點(diǎn)擊 班心,出現(xiàn)4-3畫面，根據(jù)需要填寫各個參數(shù)(標(biāo)樣和未知樣品的第一個 瓶號，增量、進(jìn)樣體積等)。|<d><cl>|d： enterpiiseproiect$defadtdatas|<dxcl> 一krepetiti

11、ons per level:sequence wizard - calibrationcalibiation id:cafibration pathcalibration file ：number of calibration leveh.r clear all calibration 司 mart of sequence create a separate row in the sequence for each repetition-p multiple calbration etsnumber of unknot run* between wet畬:|hji g intersperse

12、calitirdrcn vis內(nèi)力i叮出口,力寸泊區(qū) ：:：reuse caieiratiorf 中山太 f工rm first cdibration set4-4(5)點(diǎn)擊：!當(dāng)，出現(xiàn)4-5畫面。 seauefice； uatitled- seq_ run#stilusrun tjjpelevel |conerep*vm ivdkjrnesample idmethfidfilftramesarftplearrt.isidaint1caibrxion 也1叵1120001anahse.iretrlcal_ooi d口底12unknown0nia1320002如期南metma血13nn/a14.2

13、0003andy沮卬時(shí)14unknownae31520ao+andyse.ffiet004. dd15unknown0n/a1右20005aralyw&mmoo5,dm1eunknn0n/a1720odemaiy；se.metgdaii7uriknwn0心1g加007analy溫印時(shí)甌心1eurlkran01920008and暨 c.m008.d1aunknown0n/a11020009analiise.niflt期.胡110unknown0n/a11120iamaiyse.metoldidai111uhlkrwin0n/a1122qonanalyse.mer011. dai1124-

14、5(6)通過復(fù)制、編輯，最終將sequence編輯如圖4-6所示。注意此時(shí)第一行是升溫程序(stand-by),第二行是再生程序(rg),兩行的進(jìn)樣體積均為0, run type是unknown ,第三行是標(biāo)準(zhǔn)樣品，四行起是未知樣 sequence: wititl&d. seq.1®rio#stah* run typelevelconerepsvialvolumesample idmelhodfilenamesample1unknown 叵|0n/a叵11|_j002stand-bv.mellj002. d 巫12unknownn/a110003rg.inel003.dat1

15、3calibratkin11220001analyse, mel:cd_001.dat14unknown0n/a1320002analyse. nw!002.dd15unknown0n/a1420003analyse.003.dat16unknown0心1520004analyse. met004.dat17unkrwwi0n/j1620005analyse m005.dtf18unknown0n/a1720006analyse, nid006.dat19unknown0n/a1820007analyse, nuei007. dt110unknow0n/a1920008analysis. rn

16、eiooe.dai111unknown0法ft11020009analyse, rrffii009.dat112unknown0n/a11120010analyse, rnel010.d113| unknown口n/a112醺oilanalyse, nsel01l.dat11 ji(7)將 sequence 另存為 test。5、采集數(shù)據(jù)點(diǎn)擊 control、sequence run , 運(yùn)行 sequence test。數(shù)據(jù)采集完后，機(jī)器自動進(jìn)入清洗程序。清洗一個小時(shí)后，自動關(guān)泵，關(guān)燈，關(guān)柱溫箱。6、關(guān)機(jī)點(diǎn)擊d吧co!吧1斷開連接，關(guān)閉程序，關(guān)閉主機(jī)電源。7、試劑的準(zhǔn)備反應(yīng)液 r1、 r2

17、:醋酸鈉(ch3coona 2h2o)、冰醋酸(ch3cooh)、西三酮(c9h6o4)、 丙二醇甲醴(ch3ch(oh) ch2och3 )、硼氫化鈉(nabh4 )緩沖液b1到b6:檸檬酸鈉(na3c6h5o7 2h2o)、檸檬酸(c6h8o7 h2o)、氯化鈉(nacl)、 無水乙醇(c2h5oh)、氫氧化鈉(naoh)、硫代雙乙醇(硫二甘醇)(s(c2h4oh)2)、苯甲醇(oem)、brj-35(聚氧乙烯十二烷基謎 卜 辛酸(c7h15cooh)試劑建議用優(yōu)級純的。nameph-1ph-2ph.3phkrh-rgvessel (buffer)blb2b3b4b6sodium conc

18、entration (n)1.20.2density1.021.021.021.061.001. disti led 7;ater ： approx. j700 ml700 ml700 ml700 ml700 ml2, sodium citrate (2比0)619 g7.74 g13.31 g26.67 g3. sodium hydroxide8.00 g4. sodium chloride5.66 g7.07 g3.74 g54.35 g5. citric acid (h2o)19.80 g22 00 g1280 g6 10 g6. ethanol130.020.0 m

19、l4.0 ml100.0 ml7. benzyl alcohol5.0 ml8. thiodiglycol5.0 ml5.0 ml5.0 ml9. 8葉35.4,0 ml4.0 ml4 0 ml4 0 ml4.0 ml10. ph (nominal)4.911. total (adjust)1.0 l1.0l1 0l1.0l1 ol12. caprylic acid0.1 ml0.1 ml0.1 ml0 1 ml口 1 ml,dissolve 25 g into 100 ml of distilled water.vesselstepreagentmeasurement1pr

20、opylene glycol monomethyl ether979 ml2ninhydnn39 gr1 (ninhydrin)3nitrogen bubbling, dissolution5 min minimum4sodium borohydride81 mg5nitrogen bubbling30 min minimumdensity0 961distilled water336 ml2lithium acetate dihyda怡204 gr2 for ninhydrin3glacial acetic acid123 mlbuffer solution4propylene glycol

21、 monomethyl ether401 ml6total1000 ml6nitrogen bubbling10 min minimumdensity0.961distilled water900 mlr3 for 5% of2ethanol50 mlethanol3total1000 mldensity1.008 .出峰情況asp :天門冬氨酸pro:脯氨酸val:繳氨酸t(yī)yr ：酪氨酸his:組氨酸t(yī)hr：蘇氨酸gly:甘氨酸met:蛋氨酸phe：苯基丙氨酸t(yī)rp：色氨酸ser:絲氨酸ala：丙氨酸ile：異亮氨酸lys：賴氨酸arg：精氨酸glu:谷氨酸 cys：胱氨酸 leu:亮氨酸n

22、h3:氨氣9 .儀器使用注意事項(xiàng)(1)氮?dú)鈮毫Γ簝x器需要的壓力為 0.050.1mpa,壓力過高會損壞儀器。(2)為避免堵塞，注意泵1泵2的打開順序。先開泵1,再開泵2。泵1用b6100% , 0.1ml/分鐘；泵2用r3100% , 0.1ml/分鐘。(3)電腦嚴(yán)禁更改設(shè)置，嚴(yán)禁安裝其他程序，嚴(yán)禁上網(wǎng)。注意避免染上病毒。因軟件需要注冊，如果操作系統(tǒng)發(fā)生故障，請通知大美公司。(4)進(jìn)樣濃度范圍：0.4 10 nmol,過高的濃度會影響分析結(jié)果，且容易堵塞反應(yīng)柱。(5)注意檢查儀器泵的壓力是否正常。(6)計(jì)劃長期不用可以用 b5清洗泵的流路。但最好只清洗泵頭，即開泵時(shí)最好將排放閥打開。10 .樣

23、品的前處理準(zhǔn)備想做測試的樣品，在開動氨基酸分析儀之前，需要進(jìn)行適合該項(xiàng)檢測目的的處理，在這上分有兩大系統(tǒng)，一個是將氨基酸以及和它有關(guān)連的化合物為對象對游離氨基酸的測定法(以下稱生物液分析法)，另一個是由蛋白質(zhì)加水分解而得到的氨基酸對它的分析法(以下稱蛋白質(zhì)加水分解物分析法)在此對其中的幾個作介紹。另外，作為原則請用 0.45um的過 濾器對樣品過濾。(1)生物液分析法的前處理：主要目的是做氨基酸成分的提取(萃取)，除去蛋白質(zhì)以及不溶性物質(zhì)。(a)血液 把血液用7,00010,000 rpm(700010000 g) 離心分離15分鐘 在澄清液中加入510%三氯醋酸，稀釋23倍。 用 7,000

24、10,000 rpm （700010000 g ）離心分離 15 分鐘。將澄清液作為樣品。注意事項(xiàng)：1）澄清液有混蝕時(shí)，要么提高離心分離的轉(zhuǎn)速，要么進(jìn)一步使用過濾器。2）雖然三氯醋酸的濃度根據(jù)蛋白質(zhì)的量而不一樣，通常把添加后的濃度 做為3%左右。3）將血液就這樣做除蛋白操作，回收率很低，特別是 arg的消失明顯。4）最終樣品量做成0.050.1ml（b） 濾紙?zhí)崛⊙海ㄖ睆?10mm的點(diǎn)約30ul,最少也是直徑3mme 5片） 剪開濾紙，沿著離心管的管壁放入（例如：加入0.5ml的1%三氯醋酸 用超聲波清洗器震動2分鐘 用 7,00010,000rpm （700010000g ）離心分離 15

25、 分鐘 用0.45um的過濾器將澄清液過濾，使用微量小玻璃瓶裝進(jìn)自動進(jìn)樣器注意事項(xiàng)：樣品的混濁多的時(shí)候，不要使用三氯醋酸，用水/乙醇提?。ㄝ腿。?，待減壓干硬后，用0.02n-hci稀釋的話，分析柱的污染將減少。（c）尿 在原尿中加入1%三氯醋酸再稀釋25倍（由于有異常的尿有大量的氨基酸 出來，所以要提高稀釋倍率）。 有混濁時(shí)，進(jìn)行過濾或者離心分離。 把得到的液體的0.050.1ml作樣品。注意事項(xiàng)：檢測微量成分的良好靈敏度時(shí)，在除蛋白后，減壓干硬之后用稀釋液再溶解。濃度就和原液吻合。（d）醬汁（調(diào)味汁）、果汁等含有蔬菜原料的食品類 用15%三氯醋酸溶液稀釋10倍 用 7,00010,000rp

26、m （700010000g ）離心分離 15 分鐘把澄清液作樣品（e）醬油、酒等設(shè)有沉淀物的水系食品類 0.02nhci稀釋做樣品（和ph的關(guān)系在3倍以上）注意事項(xiàng)：食醋等雖然在低稀釋度就可以，但醬油等由于氨基酸濃度高，要稀釋200300倍左右再作樣品。（f） 從植物葉的提?。ㄝ腿。┯醚欣弻悠反晁椋蚴墙?cái)喑杉?xì)小狀。 在含有乙醇的20%30%水中讓其散開（1g樣品/3ml乙醇/水）在水浴器上用80 c,約20分鐘以上提取（萃?。?。 將澄清液過濾提取，提?。ㄝ腿。┮磸?fù) 3次。 使用漏斗將剩下的樣品用酒精清洗。 由以及的液體在水浴器上除去酒精。 往殘留下來的水溶液中加入乙醴提取（萃?。┖?，采取

27、水層把水層減壓干硬 在0.02 n hci給一定的容量（2）蛋白質(zhì)加水分解物分析法的前處理把混合了藥液的氨基酸，以及用蛋白質(zhì)加水分解得到的氨基酸作對象。（a）藥液由0.02 n hci稀釋3倍以上（根據(jù)氨基酸的濃度）作樣品，包含有糖、核酸、 維生素等水溶性物質(zhì)，也不妨礙。（b）鹽酸加水分解將樣品在加水分解用的玻璃試管上秤加入6n-hci在減壓狀態(tài)下封管，此時(shí)，若置換 n2的話，將更正確。 在加水分解爐中，用110c、22小時(shí)加熱分解。分解時(shí)間以上面為準(zhǔn)，根據(jù) 目的而變更。減壓干硬，除去hci 在0.02nhci稀釋一定的容量作樣品注意事項(xiàng)：1）最終濃度以0.5mg蛋白質(zhì)/ml為標(biāo)準(zhǔn)。2）加水分

28、解時(shí)的容量以6nhci1mg中，樣品在3mg以下為基準(zhǔn)。3）減壓干硬之際，在4080c之間加溫。（c）以回收trp為目的的加水分解 代替6n-hci的是使用4n甲烷磺酸，依從前面所述，鹽酸加水分解的方法讓 其分解。分解后，由于不能減壓干硬，加入 4n-naoh,在ph=2調(diào)節(jié)。在0.02n-hci給一定的容量作樣品。注意事項(xiàng)：1）甲烷磺酸是用1ml小玻璃瓶裝入，由技術(shù)化學(xué)制品株式會社出售，其組成是在4n甲烷磺酸中含有0.2% 3-（2-氨基乙烷）呷咪氮（雜）甫2）中和時(shí)的ph,使用ph試紙3）分析了 20個被檢體后，將分解柱用再生液清洗 4小時(shí)左右，這是為除去從樹脂中混入到試劑的吸附物質(zhì)。4）對氫硫基乙烷磺也有效（d）以回收cys、met為目的的加水分解 精確不?量12mg樣品。加入2ml過蟻酸，在0 c放置424小時(shí)。添加 48%hbr0.3ml。減壓干硬。依從鹽酸加水分解的方法，減壓進(jìn)行到干硬為止。加入1ml的a2n-naoh ,放置1小時(shí)。在0.05na1nchi ,進(jìn)行ph調(diào)制和給一定的容量。五.儀器維護(hù)與保養(yǎng)1、樣品處理嚴(yán)格按照程序處理樣品，特別對生理體液樣品，更需小心謹(jǐn)慎，加沉淀劑一定要過量， 離心所用時(shí)間寧長勿短，最后，一定要用 0.22 pm超濾膜進(jìn)行超濾后方可上機(jī)，以防樹脂的 污染和柱頭的堵塞。2、緩沖液配置緩沖液配置后首先用3