感染的檢查與防治

1、2021-11-141第十章 病原微生物感染的檢查及防治原則第一節(jié) 細菌感染的檢查2021-11-142標本的采集和送檢標本的采集和送檢避免雜菌污染運送注意保存不同期不同標本用抗菌素以前采集病變明顯部位標本必須新鮮2021-11-143一、細菌學診斷，病原菌的檢查程序一、細菌學診斷，病原菌的檢查程序藥物敏感試驗直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)生化試驗血清學試驗動物試驗明明確確診診斷斷初步診斷初步診斷檢測核酸（雜交、pcr、dna指紋）其他檢測技術（測抗原）（檢測病原菌）2021-11-144原理原理二、血清學診斷二、血清學診斷 雙份血清標本，恢復期血清中抗體效價比急性期血清中抗體效價升高4倍者方有意義種類

2、種類 標本標本凝集試驗：沉淀試驗：補體結合試驗：中和試驗： 肥達試驗、外斐試驗、顯微鏡凝集試驗等梅毒vdrl、rpr試驗等抗“o”試驗等q熱柯克斯體抗體檢測等2021-11-145 將疫苗或類毒素接種于人體，使機體獲得免疫力的一種防治微生物感染的措施。第二節(jié) 細菌感染的免疫防治一、人工主動免疫人工主動免疫主要生物制品死疫苗活疫苗類毒素亞單位疫苗dna重組疫苗核酸疫苗治療性疫苗2021-11-146抗毒素細胞免疫制劑二、人工被動免疫二、人工被動免疫 注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白抗體，或細胞因子等免疫制劑，使機體獲得特異性免疫力主要生物制品抗菌血清胎盤球蛋白丙種球蛋白2021-11

3、-147區(qū)別要點區(qū)別要點人工主動免疫人工主動免疫人工被動免疫人工被動免疫免疫物質免疫物質抗原抗原抗體或細胞因子等抗體或細胞因子等免疫出現(xiàn)時間免疫出現(xiàn)時間滿，滿，24周周快，立即快，立即免疫維持時間免疫維持時間長，數(shù)年長，數(shù)年數(shù)月數(shù)月短，短，23周周主要用途主要用途預防預防治療或緊急預防治療或緊急預防2021-11-148比較區(qū)別點區(qū)別點死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗制劑特點制劑特點死，強毒株死，強毒株活減毒株活減毒株接種劑量與特點接種劑量與特點量較大，量較大，23次次 量較小，量較小，1次次保存及有效期保存及有效期易保存，約易保存，約1年年不易保存，不易保存，4數(shù)周數(shù)周免疫效果免疫效果較低，較低，維

4、持數(shù)月維持數(shù)月2年年較高，較高，維持維持35年甚至更長年甚至更長2021-11-149 第三節(jié)第三節(jié) 病毒感染的檢查病毒感染的檢查l標本的采集與送檢標本的采集與送檢 用于分離培養(yǎng)的標本：用于分離培養(yǎng)的標本： a a、采集急性期標本、采集急性期標本 b b、采集感染部位標本、采集感染部位標本 c c、冷藏、冷藏 血清學診斷的標本：血清學診斷的標本： 急性期和恢復期急性期和恢復期雙份血清雙份血清，-20-20保存保存2021-11-14102021-11-1411動物接種動物接種雞胚接種雞胚接種組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)移植培養(yǎng) 細胞培養(yǎng) 原代細胞培養(yǎng)二倍體細胞培養(yǎng)傳代細胞培養(yǎng)2021-11-141

5、2常用的細胞培養(yǎng)類型名稱原代細胞培養(yǎng)恒河猴腎細胞培養(yǎng)， 人胚腎、 肺等細胞培養(yǎng)，雞胚成纖維細胞培養(yǎng)二倍體細胞株wi-38（人胚肺細胞株） ，hl-8（恒河猴胚細胞株）傳代細胞系hela 細胞，detroit 細胞（胸骨髓細胞系） ，chang c/i/l/k（人結膜 c，腸 i，肝 l 與腎k 細胞系） ，vero（綠猴腎細胞系） ，bhk-21（幼地鼠腎細胞系）2021-11-14132021-11-1414（二）病毒在細胞內增殖的指標（二）病毒在細胞內增殖的指標1、cpe2、紅細胞吸附、紅細胞吸附正常細胞正常細胞病變細胞病變細胞2021-11-1415狂犬病毒包涵體（negri body）

6、3.包涵體2021-11-1416巨細胞病毒包涵體4.免疫技術2021-11-1417（三）（三）病毒數(shù)量和感染性病毒數(shù)量和感染性測定測定1 1、蝕斑試驗斑試驗2 2、idid5050 或或 tcidtcid5050 病毒感染雞胚、動物或細胞后，引起 50% 發(fā)生死亡或病變的最小量。 病毒感染單層細胞后，產生的局限性病灶，稱蝕斑，蝕斑是由一個感染性病毒體復制形成的，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位pfu來表示。2021-11-1418病毒的快速診斷病毒的快速診斷光鏡光鏡-包涵體電鏡電鏡免疫熒光免疫熒光elisa分子生物學技術分子生物學技術雜交southern bl

7、otpcrnorthern blot2021-11-1419檢測病毒抗原與抗體檢測病毒抗原與抗體 已知抗體測病毒感染脫落細胞或分泌物已知抗體測病毒感染脫落細胞或分泌物細胞中的細胞中的抗原抗原 已知抗原測血清中已知抗原測血清中抗體抗體測測igmigm，或動態(tài)，或動態(tài)測測iggigg（雙份血清）（雙份血清） 三、檢測病毒核酸三、檢測病毒核酸 pcrpcr試驗試驗 引物引物 核酸雜交試驗核酸雜交試驗 探針探針 基因芯片技術基因芯片技術2021-11-1420第四節(jié)病毒感染的防治第四節(jié)病毒感染的防治一、病毒感染的治療一、病毒感染的治療（一）藥物治療（一）藥物治療 1.1.核苷類藥物核苷類藥物 2.蛋白

8、酶抑制劑 3.3.天然藥物天然藥物（二）基因治療（二）基因治療 1.1.反義寡核脫氧核酸反義寡核脫氧核酸 2. 2. 核酶核酶（三）免疫治療2021-11-1421 1.1.核苷類藥物核苷類藥物（1 1）抑制病毒基因復制）抑制病毒基因復制 碘尿苷碘尿苷( (皰疹凈皰疹凈) )用異常嘧啶取代胸腺嘧啶用異常嘧啶取代胸腺嘧啶, ,眼眼皰疹病毒感染。也可滲入細胞皰疹病毒感染。也可滲入細胞dna,dna,故有毒性。故有毒性。 無環(huán)鳥苷無環(huán)鳥苷( (啊昔洛韋啊昔洛韋) ) ，競爭病毒復制酶。，競爭病毒復制酶。（2 2）抑制病毒基因轉錄）抑制病毒基因轉錄 病毒唑病毒唑 2.蛋白酶抑制劑 “ “雞尾酒雞尾酒”

9、治療治療hivhiv，3tc3tc加蛋白酶抑制物加蛋白酶抑制物 3.3.天然藥物天然藥物 中草藥治療：黃芪、板藍根、大青葉中草藥治療：黃芪、板藍根、大青葉2021-11-1422 （二）基因治療（二）基因治療 1.1.反義寡核脫氧核酸反義寡核脫氧核酸( (反義反義dna)dna) 與病毒與病毒dnadna關鍵基因互補關鍵基因互補 反義寡核苷酸反義寡核苷酸( (反義反義rna)rna) 與病毒與病毒rnarna關鍵基因互補關鍵基因互補 2. 2. 核酶核酶 與病毒與病毒rnarna結合結合, ,切割降解靶切割降解靶rnarna （三）免疫治療 細胞因子：干擾素、細胞因子：干擾素、tnftnf、i

10、l-12il-12等等2021-11-1423 策略：阻斷病毒復制周期中策略：阻斷病毒復制周期中吸附穿入吸附穿入、 脫殼脫殼、核酸復制核酸復制、或、或裝配釋放裝配釋放 任一環(huán)節(jié)，從而抑制病毒復制任一環(huán)節(jié)，從而抑制病毒復制 要求：抗病毒藥物能穿入細胞選擇性地要求：抗病毒藥物能穿入細胞選擇性地 抑制病毒復制又不損傷宿主細胞抑制病毒復制又不損傷宿主細胞 1 1、阻斷吸附、阻斷吸附 特異免疫球蛋白特異免疫球蛋白中和抗體中和抗體 如：乙腦病毒包膜抗原的單抗如：乙腦病毒包膜抗原的單抗2021-11-1424 可溶性的病毒受體可溶性的病毒受體 如：如：hiv hiv 用可溶性用可溶性cd4 cd4 （不理想

11、）（不理想） 2 2、抑制脫殼、抑制脫殼 如：金剛烷胺，用于流感病毒的防治如：金剛烷胺，用于流感病毒的防治 （副作用大）（副作用大） 3 3、抑制核酸復制、抑制核酸復制 a.a.核苷類化合物核苷類化合物( (最早用于臨床治療最早用于臨床治療) ) 用異常嘧啶取代胸腺嘧啶用異常嘧啶取代胸腺嘧啶 如如: :碘尿苷碘尿苷( (皰疹凈皰疹凈),),眼皰疹病毒感染眼皰疹病毒感染 2021-11-1425 也可滲入細胞也可滲入細胞dna,dna,故有毒性故有毒性 無環(huán)鳥苷無環(huán)鳥苷( (啊昔洛韋啊昔洛韋) ) 毒性作用小毒性作用小 b.b.抗病毒基因治療抗病毒基因治療 反義寡核脫氧核酸反義寡核脫氧核酸( (

12、反義反義dna)dna) 與病毒與病毒dnadna關鍵基因互補關鍵基因互補 反義寡核苷酸反義寡核苷酸( (反義反義rna)rna) 與病毒與病毒rnarna關鍵基因互補關鍵基因互補 核酶核酶 與病毒與病毒rnarna結合結合, ,切割降解靶切割降解靶rna rna 2021-11-1426 c.c.病毒蛋白酶抑制物病毒蛋白酶抑制物 病毒蛋白酶病毒蛋白酶: :病毒復制病毒復制 轉錄后剪接、加工轉錄后剪接、加工 如：如：“雞尾酒雞尾酒”治療治療hivhiv 3tc 3tc加蛋白酶抑制物加蛋白酶抑制物 d.d.細胞因子：干擾素、細胞因子：干擾素、tnftnf、il-12il-12等等 4 4、疫苗治

13、療、疫苗治療 如：乙肝、如：乙肝、hivhiv、狂犬病疫苗、狂犬病疫苗 5 5、中草藥治療：黃芪、板藍根、大青葉、中草藥治療：黃芪、板藍根、大青葉 2021-11-1427 二、病毒感染的預防二、病毒感染的預防（一）人工主動免疫（一）人工主動免疫（artificial active immunityartificial active immunity） 定義：是將疫苗或類毒素接種于人體，使定義：是將疫苗或類毒素接種于人體，使 機體產生獲得性免疫力，抵抗微生機體產生獲得性免疫力，抵抗微生 物感染，主要用于預防。物感染，主要用于預防。 2021-11-1428 制劑：制劑： 1 1）死疫苗死疫苗：

14、選用免疫原性強的病原，：選用免疫原性強的病原， 經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法 殺死或滅活。殺死或滅活。 2 2）活疫苗活疫苗：用減毒的或無毒力的活：用減毒的或無毒力的活 病原體制成病原體制成 3 3）類毒素類毒素：細菌外毒素經(jīng)：細菌外毒素經(jīng)0.3%-0.4%0.3%-0.4% 甲醛處理獲得甲醛處理獲得2021-11-1429 4)4)基因工程疫苗基因工程疫苗: :重組重組dnadna表答的病原蛋白表答的病原蛋白 5)5)核酸疫苗核酸疫苗:dna:dna和和rnarna疫苗疫苗, ,由載體和編碼由載體和編碼 病原體某種抗原的病原體某種抗原的cdnacdna或或 mrnamrna組成組成 6)6)其它其它: :合成肽疫苗、抗獨特型疫苗等合成肽疫苗、抗獨特型疫苗等2021-11-1430（二）人工被動免疫（二）人工被動免疫（artificial passive immunizationartificial passive immunization） 定義：定義： 注 射 含 有 特 異 性 抗 體 的 免 疫 血 清注 射 含 有 特 異 性 抗