家兔驗性彌散性血管內(nèi)凝血

1、家兔實驗性彌散性血管內(nèi)凝血家兔實驗性彌散性血管內(nèi)凝血experiment of disseminated intravascular coagulation (dic) in rabbit目的應(yīng)用靜脈注射應(yīng)用靜脈注射兔腦浸液兔腦浸液方法，復(fù)制方法，復(fù)制家兔實驗性家兔實驗性dicdic。通過實驗和幾項血液。通過實驗和幾項血液學(xué)指標(biāo)的測定及結(jié)果分析，了解實驗室學(xué)指標(biāo)的測定及結(jié)果分析，了解實驗室診斷診斷dicdic的常用方法，聯(lián)系理論知識加的常用方法，聯(lián)系理論知識加深理深深理深dicdic的病因及發(fā)病機理。的病因及發(fā)病機理。 實驗內(nèi)容1.1. 稱重、固定（稱重、固定（清醒狀態(tài)清醒狀態(tài)）、）、局部浸潤

2、麻局部浸潤麻醉醉2.2. 手術(shù)：頸動脈插管，采集正常血標(biāo)本手術(shù)：頸動脈插管，采集正常血標(biāo)本3.3. 造模：造模：i.v.2i.v.2兔腦浸液，兔腦浸液，60mg/kg60mg/kg（慢（慢,2ml/min,2ml/min，注意兔子掙扎注意兔子掙扎) )4.4. 采集采集dicdic血標(biāo)本，離心分離血漿備用血標(biāo)本，離心分離血漿備用5.5. 測定樣本：測定樣本：kptt,kptt,pt,pt,fg,fg,3p3p6.6. 結(jié)果匯總結(jié)果匯總測定指標(biāo)和方法1.1. 白陶土部分凝血活酶時間白陶土部分凝血活酶時間（kaolin partial thromboplastin time , kptt）玻片法（

3、挑絲法）玻片法（挑絲法） 2.2. 凝血酶原時間凝血酶原時間( (prothrombin time, pt) )玻片法玻片法（挑絲法）（挑絲法） 3.3. 纖維蛋白原纖維蛋白原（fibrinogen, fg）含量，飽和鹽水法）含量，飽和鹽水法4.4. 血漿魚精蛋白副凝固試驗血漿魚精蛋白副凝固試驗（plasma protamine paracoagulation test，3p） 清潔平皿和試劑清潔平皿和試劑3737預(yù)熱預(yù)熱滴加滴加20ul20ul血漿和血漿和20ul kptt20ul kptt試劑試劑, ,用清潔針頭混勻預(yù)熱用清潔針頭混勻預(yù)熱3min3min滴加滴加20ul 0.025mol/

4、l20ul 0.025mol/l氯化鈣溶液氯化鈣溶液, ,立即啟動立即啟動秒表，同時用清潔針頭不斷混勻和挑撥秒表，同時用清潔針頭不斷混勻和挑撥一旦挑出絲狀物立即停止秒表一旦挑出絲狀物立即停止秒表記錄時間（正常值記錄時間（正常值353545s45s）kptt測定方法清潔平皿和試劑清潔平皿和試劑3737預(yù)熱預(yù)熱滴加滴加20ul20ul血漿預(yù)熱血漿預(yù)熱1min1min滴加滴加40ul pt40ul pt試劑，立即啟動秒表，試劑，立即啟動秒表，同時用清潔針頭不斷混勻和挑撥同時用清潔針頭不斷混勻和挑撥一旦挑出絲狀物立即停止秒表一旦挑出絲狀物立即停止秒表記錄時間（正常值記錄時間（正常值111113s13s

5、）pt測定方法纖維蛋白含量測定方法試管編號試管編號1 12 23 34 4調(diào)零管調(diào)零管測定管測定管調(diào)零管調(diào)零管測定管測定管生理鹽水生理鹽水4.5ml4.5ml4.5ml4.5ml飽和鹽水飽和鹽水4.5ml4.5ml4.5ml4.5ml正常血漿正常血漿0.5ml0.5ml0.5ml0.5mldicdic血漿血漿0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml3737孵浴孵浴3min3min，520nm520nm波長比色，讀取波長比色，讀取odod值值纖維蛋白含量測定方法各加生理鹽水各加生理鹽水4.5ml 4.5ml 各加飽和鹽水各加飽和鹽水4.5ml4.5ml（調(diào)零管）（調(diào)零管） （測定管）（測定管）

6、1423正常血漿各正常血漿各0.5ml dic0.5ml dic血漿各血漿各0.5ml0.5ml3p試驗試管標(biāo)記試管標(biāo)記1.1.正常正常2.dic2.dic正常血漿正常血漿0.5ml0.5mldicdic血漿血漿0.5ml0.5ml1 1魚精蛋白溶液魚精蛋白溶液50ul50ul50ul50ul輕輕搖勻，輕輕搖勻，3737水浴孵浴水浴孵浴15min15min，黑色背景觀察沉淀物，黑色背景觀察沉淀物結(jié)果組別組別kptt(sec.)pt(sec.)fg(mg%)3p正常正常dic正常正常dic正常正常dic正常正常dic12345注意事項1.1.采血時不得將動脈夾移開，以免放血后不能及時采血時不得將

7、動脈夾移開，以免放血后不能及時夾閉動脈造成放血過量和失血。夾閉動脈造成放血過量和失血。2.2.采集抗凝血需掌握好血液采集抗凝血需掌握好血液: :抗凝劑之比例抗凝劑之比例(1:9)(1:9)并并充分混勻（顛倒混勻）。充分混勻（顛倒混勻）。3.3.注射兔腦浸液前，要做好第二次采血的一切準(zhǔn)備注射兔腦浸液前，要做好第二次采血的一切準(zhǔn)備工作，并向?qū)Ч軆?nèi)注入生理鹽水（因原來插管工作，并向?qū)Ч軆?nèi)注入生理鹽水（因原來插管內(nèi)可能已有血栓阻塞）。內(nèi)可能已有血栓阻塞）。4.4.注射兔腦浸液是實驗成敗的關(guān)鍵步驟，要緩慢推注射兔腦浸液是實驗成敗的關(guān)鍵步驟，要緩慢推注注(2ml/min)(2ml/min)，密切注意家兔反

8、應(yīng)，如有，密切注意家兔反應(yīng)，如有明顯明顯的呼吸急促和躁動不安的呼吸急促和躁動不安，應(yīng)，應(yīng)立即放血立即放血。注意事項5.5.離心分離血漿前，必須先平衡離心管。分離出離心分離血漿前，必須先平衡離心管。分離出血漿吸入清潔試管備用。血漿吸入清潔試管備用。6.6.測測kpttkptt、ptpt的平皿必須清潔、干燥、無油脂。的平皿必須清潔、干燥、無油脂。kpttkptt試劑使用前須搖勻。試劑使用前須搖勻。7.7.測測fgfg時，血漿一旦與飽和鹽水接觸。要立即進時，血漿一旦與飽和鹽水接觸。要立即進行充分混勻，以防產(chǎn)生局部沉淀，同樣，比濁行充分混勻，以防產(chǎn)生局部沉淀，同樣，比濁前亦要再次混勻。前亦要再次混勻。

9、8.8.測測3p3p時，要先加血漿，再加魚精蛋白，以免魚時，要先加血漿，再加魚精蛋白，以免魚精蛋白接觸管底不潔物造成假陽性。精蛋白接觸管底不潔物造成假陽性。討論1.1. 兔腦浸液引起兔腦浸液引起dicdic的原因和機制？的原因和機制？2.2. kpttkptt、ptpt、fgfg和和3p3p各指標(biāo)的臨床意義是什各指標(biāo)的臨床意義是什么？分別反應(yīng)什么變化么？分別反應(yīng)什么變化? ?3.3. kpttkptt、ptpt、fgfg和和3p3p的測定原理及發(fā)生變化的測定原理及發(fā)生變化的原因和機制的原因和機制? ?dic動物模型的復(fù)制方法l凝血酶凝血酶l蛇毒蛇毒l兔腦浸液兔腦浸液l內(nèi)毒素內(nèi)毒素l羊水羊水實驗室診斷dic的方法 篩選指標(biāo)篩選指標(biāo)：l血小板計數(shù)（血小板計數(shù)（platelet，plt）l凝血酶原時間凝血酶原時間( (prothrombin time，pt) ) l纖維蛋白原含量（纖維蛋白原含量（fibrinogen，fg）l纖溶指標(biāo)：纖溶指標(biāo)：fdpfdp測定、測定、3p3p試驗、優(yōu)球蛋白溶解試驗、優(yōu)球蛋白溶解時間、時間、d-d-二聚體，等二聚體，等實驗室診斷標(biāo)準(zhǔn)實驗室診斷標(biāo)準(zhǔn)( (以下三項以上異常以下三項以上異常) ) 1. pt延長或縮短延長或縮短3s以上，以上，kptt延長或縮短延長或縮短10s以上；以上；2. 血漿血小板活化產(chǎn)物含量增加：血漿血小板活化產(chǎn)物含量增加