輸血前相容性檢測閻

1、中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦輸血前相容性檢測輸血前相容性檢測中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 教學(xué)目的和要求教學(xué)目的和要求 掌握鹽水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法的原理、掌握鹽水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法的原理、方法及意義。方法及意義。 熟悉微柱凝膠法原理、方法。熟悉微柱凝膠法原理、方法。 了解酶法、白蛋白介質(zhì)法、了解酶法、白蛋白介質(zhì)法、lissliss法的原理和方法法的原理和方法。 熟悉熟悉abo/abo/rhrh血型鑒定方法及影響因素血型鑒定方法及影響因素 熟悉抗體篩選原理和意義熟悉抗體篩選原理和意義 熟悉交叉配血方法及意義熟悉交叉配

2、血方法及意義 了解抗體鑒定原理和意義了解抗體鑒定原理和意義中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦血型鑒定抗體篩選及鑒定交叉配血紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù)微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù) 聚凝胺試驗聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗酶介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)增強技術(shù)中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦鹽水介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗l 懸浮于鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體分

3、子結(jié)合，懸浮于鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體分子結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見的凝集。交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見的凝集。l 主要檢測主要檢測igmigm類抗體（類抗體（aboabo系統(tǒng)、抗系統(tǒng)、抗e e）。）。l 抗抗a a抗抗b b特異性特異性iggigg類抗體有時可直接凝集懸浮于鹽類抗體有時可直接凝集懸浮于鹽水中的紅細(xì)胞，與紅細(xì)胞表面抗原位點數(shù)目和抗水中的紅細(xì)胞，與紅細(xì)胞表面抗原位點數(shù)目和抗原決定簇位置有關(guān)。原決定簇位置有關(guān)。 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦鹽水介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗l 方法：玻片法方法：玻片法- -便于顯微鏡觀察結(jié)果便于顯微鏡觀察結(jié)果 試管法試管法

4、- -適用于不同溫度、便于洗滌適用于不同溫度、便于洗滌l 反應(yīng)溫度：反應(yīng)溫度：4 42222l 臨床意義：鹽水凝集試驗陽性，并在臨床意義：鹽水凝集試驗陽性，并在3737也有活性的抗體也有活性的抗體有意義，這些抗體通常能用其他方法證明。室溫有活性，有意義，這些抗體通常能用其他方法證明。室溫有活性，3737無活性者臨床意義不大。無活性者臨床意義不大。 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 試驗記錄試驗記錄 4+4+（+）：一個大凝集塊，背景透明，無游離）：一個大凝集塊，背景透明，無游離細(xì)胞細(xì)胞 3+3+（+）：數(shù)個大凝集塊，背景透明，無游離）：數(shù)個大凝集塊，背景透明，無游離

5、細(xì)胞細(xì)胞 2+2+（+）：許多小凝集塊，背景稍混濁，有游離）：許多小凝集塊，背景稍混濁，有游離細(xì)胞細(xì)胞 1+1+（+ +）：細(xì)小的凝集塊，背景渾濁）：細(xì)小的凝集塊，背景渾濁 w+w+（）：極細(xì)小凝集塊，要用顯微鏡觀察結(jié)果）：極細(xì)小凝集塊，要用顯微鏡觀察結(jié)果 0 0（- -）：無凝集，無溶血，細(xì)胞呈游離散在狀態(tài)）：無凝集，無溶血，細(xì)胞呈游離散在狀態(tài) phph：部分溶血：部分溶血 h h：完全溶血：完全溶血中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦weak reactions often difficult to int

6、erpret. can also be downgraded due to shaking the completed test.conventional testing.中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦鹽水介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗結(jié)果分析：陽性結(jié)果分析：陽性- -凝集或溶血凝集或溶血 陰性陰性- -無凝集或溶血無凝集或溶血先觀察有無溶血、再觀察有無凝集先觀察有無溶血、再觀察有無凝集注意事項：細(xì)胞濃度注意事項：細(xì)胞濃度2 25%5%（嚴(yán)格按說明（嚴(yán)格按說明書操作）、血清與細(xì)胞比例、反應(yīng)溫書操作）、血清與

7、細(xì)胞比例、反應(yīng)溫度、弱度、弱凝集分析凝集分析優(yōu)點：優(yōu)點：中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù)微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù) 聚凝胺試驗聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗酶介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)增強技術(shù)中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗 抗球蛋白試驗是抗球蛋白試驗是19451945年由年由coombscoombs等人等人建立的，又稱建立的，又稱coombscoombs試驗。抗球蛋白試驗?？骨虻鞍自囼灥慕⒃谘脱鍖W(xué)上有著非常試驗的建立在血型血清學(xué)上有著非常重要的

8、意義。重要的意義。 分為直接抗球蛋白試驗（分為直接抗球蛋白試驗（datdat）和間）和間接抗球蛋白試驗（接抗球蛋白試驗（iatiat）。）。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦抗人球蛋白試驗原理抗人球蛋白試驗原理 iggigg類血型抗體（主要是免疫抗體，如類血型抗體（主要是免疫抗體，如rhrh血血型抗體）分子量小，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)型抗體）分子量小，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，稱之為不完全抗體，但在加入抗集反應(yīng)，稱之為不完全抗體，但在加入抗- -iggigg后，以其搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。后，以其搭

9、橋作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。 補體成分在體內(nèi)被紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物補體成分在體內(nèi)被紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物激活以后，結(jié)合在紅細(xì)胞表面。在體外含激活以后，結(jié)合在紅細(xì)胞表面。在體外含補體的多克隆抗體，或抗補體的多克隆抗體，或抗c3bc3b、抗、抗c3dc3d等單等單特異性抗體與補體致敏的紅細(xì)胞反應(yīng)，使特異性抗體與補體致敏的紅細(xì)胞反應(yīng)，使之凝集也稱為抗球蛋白試驗。之凝集也稱為抗球蛋白試驗。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦抗人球蛋白試劑抗人球蛋白試劑 多特異性抗球蛋白試劑：應(yīng)含有抗多特異性抗球蛋白試劑：應(yīng)含有抗iggigg和抗和抗-c3d-c3d。 單特異性抗球蛋白試劑：抗單特異性

10、抗球蛋白試劑：抗iggigg、抗、抗igmigm、抗、抗igaiga、抗、抗c3c3、c4c4的片段。的片段。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦直接抗人球蛋白試驗直接抗人球蛋白試驗 datdat是用來檢測體內(nèi)紅細(xì)胞致敏情況是用來檢測體內(nèi)紅細(xì)胞致敏情況，尤其是，尤其是iggigg和和c3dc3d包被的紅細(xì)胞。包被的紅細(xì)胞。用于：用于： hdnhdn和自身免疫溶血性貧血的診斷和自身免疫溶血性貧血的診斷 紅細(xì)胞被藥物抗體致敏的檢查紅細(xì)胞被藥物抗體致敏的檢查 急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的檢查急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的檢查中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政

11、司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦間接抗人球蛋白試驗間接抗人球蛋白試驗 用于測定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的用于測定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體?？贵w。 用不完全抗體測定紅細(xì)胞血型，如用不完全抗體測定紅細(xì)胞血型，如rhrh血型。血型。 交叉配血。交叉配血。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦結(jié)果分析結(jié)果分析-假陽性假陽性用免疫兔或羊制備的抗人球蛋白含有種間抗用免疫兔或羊制備的抗人球蛋白含有種間抗體。體。紅細(xì)胞在用鹽水洗滌時已有凝集。紅細(xì)胞在用鹽水洗滌時已有凝集。 iat iat試驗中

12、所用紅細(xì)胞本身試驗中所用紅細(xì)胞本身datdat陽性。陽性。不抗凝標(biāo)本在冷環(huán)境里經(jīng)過一段時間的保存不抗凝標(biāo)本在冷環(huán)境里經(jīng)過一段時間的保存后，自身冷抗體發(fā)生作用，激活補體，補后，自身冷抗體發(fā)生作用，激活補體，補體成分結(jié)合在紅細(xì)胞上，用多特異性抗球體成分結(jié)合在紅細(xì)胞上，用多特異性抗球蛋白試劑會發(fā)生假陽性。蛋白試劑會發(fā)生假陽性。離心過度，紅細(xì)胞壓積過緊，不易充分搖散離心過度，紅細(xì)胞壓積過緊，不易充分搖散中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦結(jié)果分析結(jié)果分析-假陰性假陰性 致敏后的紅細(xì)胞洗滌不充分致敏后的紅細(xì)胞洗滌不充分, ,殘留的球蛋白中和了殘留的球蛋白中和了試劑中的抗球蛋白，造

13、成假陰性。試劑中的抗球蛋白，造成假陰性。 操作過程不連續(xù)，時間過長，結(jié)合在紅細(xì)胞上的操作過程不連續(xù)，時間過長，結(jié)合在紅細(xì)胞上的抗體解離。抗體解離。 紅細(xì)胞、血清和抗人球蛋白試劑保存不當(dāng)都可能紅細(xì)胞、血清和抗人球蛋白試劑保存不當(dāng)都可能發(fā)生活性減弱或喪失。發(fā)生活性減弱或喪失。 紅細(xì)胞過多，反應(yīng)減弱；紅細(xì)胞過少，看結(jié)果不紅細(xì)胞過多，反應(yīng)減弱；紅細(xì)胞過少，看結(jié)果不準(zhǔn)確，都影響結(jié)果。準(zhǔn)確，都影響結(jié)果。 試劑中抗人球蛋白濃度過大，有前帶現(xiàn)象。試劑中抗人球蛋白濃度過大，有前帶現(xiàn)象。 孵育時間和溫度不當(dāng)，會使反應(yīng)結(jié)果減弱或變?yōu)榉跤龝r間和溫度不當(dāng)，會使反應(yīng)結(jié)果減弱或變?yōu)榧訇幮浴Ｓ^察結(jié)果時過度搖動試管，搖散細(xì)小凝

14、假陰性。觀察結(jié)果時過度搖動試管，搖散細(xì)小凝塊。塊。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦注意事項注意事項 每次試驗要設(shè)有陰性和陽性對照。每次試驗要設(shè)有陰性和陽性對照。 陰性結(jié)果要加入一滴陰性結(jié)果要加入一滴iggigg致敏紅細(xì)胞致敏紅細(xì)胞 實驗器材清潔。實驗器材清潔。 注意抗原抗體比例、孵育時間、溫度等條注意抗原抗體比例、孵育時間、溫度等條件。件。 嚴(yán)格按照實驗方法操作。嚴(yán)格按照實驗方法操作。 排除自身抗體干擾。排除自身抗體干擾。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù)微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù) 聚凝胺試驗聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗酶介質(zhì)凝集試

15、驗鹽水介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)增強技術(shù)抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦微柱凝膠試驗微柱凝膠試驗 原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)物質(zhì)做成微型凝膠柱，柱的上端有一個加樣物質(zhì)做成微型凝膠柱，柱的上端有一個加樣反應(yīng)室?？乖贵w反應(yīng)后離心，凝膠柱起過反應(yīng)室?？乖贵w反應(yīng)后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細(xì)胞凝集塊不能通過凝膠的間隙篩作用，紅細(xì)胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細(xì)胞通過凝而留在凝膠的上部，未凝集的紅細(xì)胞通過凝膠的間隙，沉積到底部。膠的間隙，沉積到底

16、部。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦微柱凝膠反應(yīng)本質(zhì)：凝集反應(yīng)微柱凝膠反應(yīng)本質(zhì)：凝集反應(yīng) 紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)凝集。根紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)凝集。根據(jù)紅細(xì)胞在膠質(zhì)介質(zhì)中的位置肉眼判斷。據(jù)紅細(xì)胞在膠質(zhì)介質(zhì)中的位置肉眼判斷。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦微柱凝膠試驗注意事項微柱凝膠試驗注意事項 嚴(yán)格按照試劑說明書操作。嚴(yán)格按照試劑說明書操作。獻(xiàn)血者獻(xiàn)血者datdat陽性，干擾結(jié)果判讀。陽性，干擾結(jié)果判讀。患者自身抗體干擾?；颊咦陨?/p>

17、抗體干擾。注意加樣順序。注意加樣順序。配制配制細(xì)胞濃度準(zhǔn)確細(xì)胞濃度準(zhǔn)確。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù)微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù) 聚凝胺試驗聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗酶介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)增強技術(shù)抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦聚凝胺試驗聚凝胺試驗 原理：聚凝胺是一種多價陽離子聚合物，在溶液原理：聚凝胺是一種多價陽離子聚合物，在溶液中有多個陽離子基團(tuán)，能中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電中有多個陽離子基團(tuán)，能中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，并籍助正負(fù)電荷的作用，

18、引起紅細(xì)胞的非特荷，并籍助正負(fù)電荷的作用，引起紅細(xì)胞的非特異性凝集。異性凝集。 當(dāng)紅細(xì)胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育后，當(dāng)紅細(xì)胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育后，iggigg抗體與紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原結(jié)合，在聚凝胺的作抗體與紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原結(jié)合，在聚凝胺的作用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負(fù)電荷與聚再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負(fù)電荷與聚凝胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，凝胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，而真正的凝集不會消失。而真正的凝集不會消失。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司

19、主辦+ + +聚凝胺+無凝集+有凝集反應(yīng)- - - - - 枸櫞酸納- - - - -中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦聚凝胺試驗聚凝胺試驗 優(yōu)點：簡便快捷，可用于某些不完全抗體優(yōu)點：簡便快捷，可用于某些不完全抗體檢測。檢測。 缺點：對無唾液酸的紅細(xì)胞無作用，缺點：對無唾液酸的紅細(xì)胞無作用，例如多凝集紅細(xì)胞。例如多凝集紅細(xì)胞。 可增強自身抗體或冷凝集素干擾?？稍鰪娮陨砜贵w或冷凝集素干擾。 注意事項：抗原抗體比例適當(dāng)注意事項：抗原抗體比例適當(dāng) 聚凝胺（聚凝胺（1 1液）去除干凈。液）去除干凈。 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 微柱凝膠免疫學(xué)

20、技術(shù)微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù) 聚凝胺試驗聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗酶介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)增強技術(shù)抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦酶介質(zhì)凝集試驗酶介質(zhì)凝集試驗 原理：原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電荷，使紅細(xì)胞相互排斥。蛋白水解酶能負(fù)電荷，使紅細(xì)胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì)胞表面的負(fù)消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷以及紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)電荷以及紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)胞之間的距離，使胞之間的距離，使i

21、ggigg分子能與有相應(yīng)抗原分子能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集。的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦酶介質(zhì)凝集試驗酶介質(zhì)凝集試驗 常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶。果酶。方法：方法：期法期法- -酶液直接加入血清和細(xì)胞酶液直接加入血清和細(xì)胞的混合物中。的混合物中。 期法期法- -用酶處理細(xì)胞再與血清用酶處理細(xì)胞再與血清 進(jìn)進(jìn)行反應(yīng)。行反應(yīng)。兩種方法比較：兩種方法比較：期法期法 操作方便操作方便 期法期法 敏感敏感中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦酶介質(zhì)凝集試驗酶介質(zhì)凝集試驗 優(yōu)點：優(yōu)

22、點： 可以增強一些抗原抗體系統(tǒng)的反應(yīng)活性可以增強一些抗原抗體系統(tǒng)的反應(yīng)活性 rhrh和和kiddkidd系統(tǒng)最明顯系統(tǒng)最明顯缺點：缺點： 會破壞一些抗原的結(jié)構(gòu)會破壞一些抗原的結(jié)構(gòu)(m(m、n n、fyfya a、fyfyb b) ) 酶液批次不同，都需標(biāo)化最適孵育時間。酶液批次不同，都需標(biāo)化最適孵育時間。 操作繁復(fù)，少數(shù)人對酶液過敏。操作繁復(fù)，少數(shù)人對酶液過敏。 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù)微柱凝膠免疫學(xué)技術(shù) 聚凝胺試驗聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗酶介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)增強技術(shù)抗人球蛋白

23、試驗抗人球蛋白試驗中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦增強技術(shù)增強技術(shù)白蛋白增強凝集法白蛋白增強凝集法原理原理：白蛋白能提高紅細(xì)胞懸浮液中的介：白蛋白能提高紅細(xì)胞懸浮液中的介電常數(shù)，從而降低電常數(shù)，從而降低zetezete電位，縮小了細(xì)胞電位，縮小了細(xì)胞間距離，增加細(xì)胞與細(xì)胞的接觸面。間距離，增加細(xì)胞與細(xì)胞的接觸面。應(yīng)用應(yīng)用：血型鑒定和交叉配血：血型鑒定和交叉配血結(jié)果判定結(jié)果判定：出現(xiàn)凝集和溶血現(xiàn)象為陽性結(jié)：出現(xiàn)凝集和溶血現(xiàn)象為陽性結(jié)果。果。 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦增強技術(shù)增強技術(shù)低離子強度鹽溶液（低離子強度鹽溶液（lissliss

24、）法）法 原理原理：在凝集反應(yīng)第一階段，若降低介質(zhì)：在凝集反應(yīng)第一階段，若降低介質(zhì)的離子強度，就會減少紅細(xì)胞周圍的陽離的離子強度，就會減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，促進(jìn)帶正電荷的子云，促進(jìn)帶正電荷的iggigg與帶負(fù)電荷的紅與帶負(fù)電荷的紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。注意事項注意事項：不能增加額外血清量：不能增加額外血清量延延長孵育時間會使某些抗原長孵育時間會使某些抗原變質(zhì)，如變質(zhì)，如fyfya a。 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦抗體篩選及鑒定交叉配血紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)

25、紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)血型鑒定血型鑒定中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦abo血型鑒定 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦正反定型的意義正反定型的意義 準(zhǔn)確的血型判定利于指導(dǎo)臨床用血準(zhǔn)確的血型判定利于指導(dǎo)臨床用血發(fā)現(xiàn)亞型發(fā)現(xiàn)亞型抗原強度的改變與疾病相關(guān)抗原強度的改變與疾病相關(guān)新抗原出現(xiàn)與疾病相關(guān)新抗原出現(xiàn)與疾病相關(guān)排除假陰性或假陽性結(jié)果干擾排除假陰性或假陽性結(jié)果干擾中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦abo血型反應(yīng)格局血型反應(yīng)格局 血型血型 正定型正定型 反定型反定型 抗抗a 抗抗b ac bc oc a + - -

26、+ - b - + + - - o - - + + -ab + + - - -中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦cells v serumserum v cells中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦aboabo亞型鑒定亞型鑒定 亞型通常表現(xiàn)為凝集反應(yīng)強度弱，或正、反定亞型通常表現(xiàn)為凝集反應(yīng)強度弱，或正、反定型不符型不符 增加試劑：抗增加試劑：抗a1-a1-區(qū)分區(qū)分a1a1和和a2a2 抗抗h-h-有較強的有較強的h h抗原性抗原性 抗抗a,b-a,b-與與axax的反應(yīng)強度增強的反應(yīng)強度增強 增加方法：吸收放散試驗增加方法：吸收放散試驗 唾液

27、中血型物質(zhì)鑒定唾液中血型物質(zhì)鑒定 pcrpcr方法方法中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦rh血型鑒定血型鑒定紅細(xì)胞紅細(xì)胞rhrh表型可用表型可用特殊的具有抗特殊的具有抗d d、c c、c c、e e、和、和e e抗血清抗血清檢測來鑒定。但常規(guī)檢測來鑒定。但常規(guī)只用抗只用抗d d血清檢查有血清檢查有無無d d抗原抗原 d d抗原陽性者為抗原陽性者為rhrh陽性，否則為陰性陽性，否則為陰性 中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 rhrh血型鑒定方法血型鑒定方法 rhrh抗體屬抗體屬iggigg類，一般不能在鹽水介質(zhì)類，一般不能在鹽水介質(zhì)中與紅細(xì)胞發(fā)

28、生凝集，因此須采用以下中與紅細(xì)胞發(fā)生凝集，因此須采用以下鑒定方法（其中一種）：鑒定方法（其中一種）：1 1、酶介質(zhì)法、酶介質(zhì)法2 2、抗人球蛋白法、抗人球蛋白法+ +增強試驗增強試驗 （lissliss/ /白蛋白技術(shù)）白蛋白技術(shù)）rhdrhd檢測常用鹽水法。檢測常用鹽水法。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦血型鑒定交叉配血紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)抗體篩選及鑒定中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦抗體篩選和鑒定抗體篩選和鑒定有臨床

29、意義的抗體：有臨床意義的抗體： 能引起新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反能引起新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反 應(yīng)，或者使輸入的紅細(xì)胞存活期減少，在應(yīng)，或者使輸入的紅細(xì)胞存活期減少，在 37 37有反應(yīng)的同種抗體。有反應(yīng)的同種抗體。意外抗體：意外抗體： 抗抗a a，抗，抗b b以外的抗體。以外的抗體。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦目的和原則目的和原則目的：目的：對受血者的血清或血漿，應(yīng)常規(guī)作抗對受血者的血清或血漿，應(yīng)常規(guī)作抗體篩選實驗，以發(fā)體篩選實驗，以發(fā)現(xiàn)有臨床意義的意外現(xiàn)有臨床意義的意外抗體。抗體。原則：原則：讓受檢血清或血漿與特殊的試劑紅讓受檢血清或血漿與特殊的試

30、劑紅細(xì)胞（篩選細(xì)胞）起反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)細(xì)胞（篩選細(xì)胞）起反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)3737有反有反應(yīng)活性的抗體。應(yīng)活性的抗體。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦對血清中抗體檢測的要求對血清中抗體檢測的要求1.1.選擇足夠敏感、高特異性的技術(shù)檢測出受選擇足夠敏感、高特異性的技術(shù)檢測出受檢者血清中低水平的有臨床意義的抗體。檢者血清中低水平的有臨床意義的抗體。2. 2. 要高度注意，即使受血者血清中的抗體對要高度注意，即使受血者血清中的抗體對輸入的不相容紅細(xì)胞抗原呈弱反應(yīng)，也能輸入的不相容紅細(xì)胞抗原呈弱反應(yīng)，也能夠發(fā)生快速回憶反應(yīng)，抗體迅速產(chǎn)生，破夠發(fā)生快速回憶反應(yīng)，抗體迅速產(chǎn)生，破壞紅細(xì)胞

31、。壞紅細(xì)胞。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦對試劑紅細(xì)胞的要求對試劑紅細(xì)胞的要求不能將多人份紅細(xì)胞混合，一定要用不能將多人份紅細(xì)胞混合，一定要用2-32-3人份的試人份的試劑紅細(xì)胞，以避免紅細(xì)胞混合后，對弱抗原紅細(xì)胞的劑紅細(xì)胞，以避免紅細(xì)胞混合后，對弱抗原紅細(xì)胞的稀釋。稀釋。美國美國fdafda對注冊和批準(zhǔn)作為商品供應(yīng)的用作不規(guī)則對注冊和批準(zhǔn)作為商品供應(yīng)的用作不規(guī)則抗體篩檢的試劑紅細(xì)胞的要求為必須表達(dá)：抗體篩檢的試劑紅細(xì)胞的要求為必須表達(dá)：d d、c c、e e、c c、e e、m m、n n、s s、s s，plpl、lealea、lebleb、k k、k k、f

32、yfya a、fyfyb b，jkjka a、jkjkb b。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 臨床重要的人血清紅細(xì)胞抗體臨床重要的人血清紅細(xì)胞抗體抗體抗體自然發(fā)生自然發(fā)生 免疫免疫鹽水鹽水 coombs/lisshdnhtr相容表型相容表型抗-ayesyes mostmost yesyesb 、o抗-byesyes mostmost yesyesa、o抗-abyesyes mostmost yesyeso抗-hyesyes mostmost yesyesoh中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生

33、部醫(yī)政司主辦 抗體抗體自然發(fā)生自然發(fā)生 免疫免疫鹽水鹽水 coombs/lisshdnhtr相容表相容表型型抗抗dyes罕見罕見mostyesyesd陰性陰性血血抗抗cyes罕見罕見mostyesyesc陰性陰性血血抗抗eyessomemostyesyesc陰性陰性血血抗抗cyes罕見罕見mostyesyesc陰性陰性血血抗抗eyes罕見罕見mostyesyese陰性陰性血血中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 抗體篩選方法抗體篩選方法鹽水凝集法鹽水凝集法抗人球蛋白法抗人球蛋白法聚凝胺法聚凝胺法微柱凝膠法微柱凝膠法liss抗球蛋白法抗球蛋白法中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主

34、辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦dcece患者患者1患者患者21r1r1+00+-2r2r2+0+0+3rr000+-中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦 結(jié)果的判讀和解釋結(jié)果的判讀和解釋溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有無溶血，后觀察有無應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有無溶血，后觀察有無凝集。凝集。記錄結(jié)果，并與以前結(jié)果對照。記錄結(jié)果，并與以前結(jié)果對照?？贵w篩選試驗不一定能檢出所有有臨床意抗體篩選試驗不一定能檢出所有有臨床意義的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效義的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體，可能被漏檢

35、。應(yīng)的抗體，可能被漏檢。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦抗體鑒定抗體鑒定 通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應(yīng)進(jìn)一步通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒定試驗，以確定其特異性。作抗體鑒定試驗，以確定其特異性。1.1.自身細(xì)胞檢查自身細(xì)胞檢查- -排除非特異性排除非特異性2.2.譜紅細(xì)胞檢查譜紅細(xì)胞檢查中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦譜紅細(xì)胞：譜紅細(xì)胞：一般是由一般是由8-168-16人份的已知血型表現(xiàn)型人份的已知血型表現(xiàn)型o o型紅細(xì)胞型紅細(xì)胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜紅細(xì)胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜紅細(xì)胞的反應(yīng)格局一般可以

36、鑒定常見的抗體。的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見的抗體。方法：方法：在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、酶技在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、酶技術(shù)及抗人球蛋白實驗。術(shù)及抗人球蛋白實驗。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦血型鑒定血型鑒定抗體篩選及鑒定抗體篩選及鑒定交叉配血交叉配血紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦交叉配血交叉配血主側(cè)：主側(cè)：受血者血清受血者血清+ +供者紅細(xì)胞供者紅細(xì)胞檢測對供者紅細(xì)胞起反

37、應(yīng)的抗體檢測對供者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體次側(cè)：次側(cè)：受血者紅細(xì)胞受血者紅細(xì)胞+ +供者血清供者血清檢測對受者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體檢測對受者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體自身對照：自身對照：受血者紅細(xì)胞受血者紅細(xì)胞+ +受血者血清受血者血清排除自身抗體、直接抗球蛋白試驗陽性及紅細(xì)排除自身抗體、直接抗球蛋白試驗陽性及紅細(xì) 胞緡錢狀凝集干擾胞緡錢狀凝集干擾中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦接收申請單和血標(biāo)本接收申請單和血標(biāo)本 核對無誤核對無誤（如有錯誤與醫(yī)生（如有錯誤與醫(yī)生/護(hù)士聯(lián)系）護(hù)士聯(lián)系）進(jìn)行交叉配血進(jìn)行交叉配血 相合相合結(jié)果輸入微機結(jié)果輸入微機不相合不相合打印發(fā)血單打印發(fā)血單血液中心

38、血液中心交叉配血工作流程交叉配血工作流程中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦注意事項注意事項用于交叉配血的標(biāo)本應(yīng)該是新獲得的用于交叉配血的標(biāo)本應(yīng)該是新獲得的（3 3天之內(nèi)）；供者血標(biāo)本應(yīng)剛從血袋天之內(nèi)）；供者血標(biāo)本應(yīng)剛從血袋上剪下。上剪下。不能用玻片法作交叉配血。不能用玻片法作交叉配血。必要時用生理鹽水洗滌細(xì)胞。必要時用生理鹽水洗滌細(xì)胞。紅細(xì)胞濃度一般是紅細(xì)胞濃度一般是2-5%2-5%。嚴(yán)格按照試劑說明書操作。嚴(yán)格按照試劑說明書操作。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦抗篩和配血結(jié)果分析抗篩和配血結(jié)果分析紅細(xì)胞方面問題處理紅細(xì)胞方面問題處理血清方

39、面問題處理血清方面問題處理常見問題處理常見問題處理紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細(xì)胞抗原抗體檢測技術(shù)中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選陰性，交叉配血相合抗體篩選陰性，交叉配血相合見于臨床上絕大多數(shù)標(biāo)本。見于臨床上絕大多數(shù)標(biāo)本。抗體篩選陰性，血清中仍有可能含有臨床抗體篩選陰性，血清中仍有可能含有臨床有意義的抗體（方法或篩選細(xì)胞）有意義的抗體（方法或篩選細(xì)胞）鹽水介質(zhì)試驗作配血可能漏檢有意義的鹽水介質(zhì)試驗作配血可能漏檢有意義的iggigg類抗體。類抗體。只有用非鹽水介質(zhì)交叉配血，才能保證待只有用非鹽水介質(zhì)交叉配血，才能

40、保證待輸?shù)难褪苷呦嗪稀］數(shù)难褪苷呦嗪?。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選陰性，鹽水直接離心交叉抗體篩選陰性，鹽水直接離心交叉配血不合配血不合aboabo血型錯誤。血型錯誤?？箍筧 a1 1存在于存在于a a2 2或或a a2 2b b，在直接鹽水交叉，在直接鹽水交叉配血實驗中，抗配血實驗中，抗a a1 1能引起大部分能引起大部分a a型紅細(xì)型紅細(xì)胞不相合。胞不相合。存在室溫反應(yīng)的同種抗體，如抗存在室溫反應(yīng)的同種抗體，如抗m m。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦抗體篩選和交叉配血

41、結(jié)果分析抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選陰性，抗人球蛋白交叉配抗體篩選陰性，抗人球蛋白交叉配血不合血不合獻(xiàn)血者紅細(xì)胞獻(xiàn)血者紅細(xì)胞datdat陽性（約陽性（約1/100001/10000）患者抗體弱，獻(xiàn)血者紅細(xì)胞抗原性很患者抗體弱，獻(xiàn)血者紅細(xì)胞抗原性很強，表現(xiàn)為抗人球蛋白試驗陽性。強，表現(xiàn)為抗人球蛋白試驗陽性。針對低頻抗原的抗體，如針對低頻抗原的抗體，如diegodiego系統(tǒng)抗系統(tǒng)抗- -wrwra a。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析抗體篩選陽性，交叉配血不合抗體篩選陽性，交叉配血不合同種抗體、自身抗體、試劑問

42、題、緡同種抗體、自身抗體、試劑問題、緡錢狀凝集，應(yīng)在輸血前查明原因。錢狀凝集，應(yīng)在輸血前查明原因。必須進(jìn)行包括抗人球蛋白試驗在內(nèi)的必須進(jìn)行包括抗人球蛋白試驗在內(nèi)的交叉配血。交叉配血。緊急情況下無法找到血清學(xué)配合的血緊急情況下無法找到血清學(xué)配合的血液時，輸血科人員應(yīng)告之主管醫(yī)生此液時，輸血科人員應(yīng)告之主管醫(yī)生此種情況下輸血存在的可能危險。種情況下輸血存在的可能危險。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦同種抗體的處理對策同種抗體的處理對策交叉配合相合與否取決于涉及抗原的頻率。交叉配合相合與否取決于涉及抗原的頻率。鑒定抗體的特異性后，先用抗血清篩選相鑒定抗體的特異性后，先用抗

43、血清篩選相應(yīng)抗原陰性者，再與受者血清作交叉配血。應(yīng)抗原陰性者，再與受者血清作交叉配血。用受血者血清還是試劑抗血清篩選血液，用受血者血清還是試劑抗血清篩選血液，應(yīng)根據(jù)病人的血清反應(yīng)強度，能得到的受應(yīng)根據(jù)病人的血清反應(yīng)強度，能得到的受者血清量以及抗血清的來源和費用等決定。者血清量以及抗血清的來源和費用等決定。醫(yī)院庫存血中難以找到配合血時，求助血醫(yī)院庫存血中難以找到配合血時，求助血液中心。液中心。中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司主辦自身抗體自身抗體冷自身抗體干擾血型鑒定、抗體篩選和鑒定冷自身抗體干擾血型鑒定、抗體篩選和鑒定以及交叉配血試驗，結(jié)果判讀困難。最常以及交叉配血試驗，結(jié)果判讀困難。最常見的特異性是抗見的特異性是抗-i-i。 溫反應(yīng)自身抗體很少引起溫反應(yīng)自身抗體很少引起aboabo定型困難，但定型困難