特殊顯微鏡的使用PPT課件

1、I I 暗視野顯微鏡一、實驗目的 了解暗視野顯微鏡觀察活細胞的基本原理； 了解暗視野顯微鏡的特殊組件和位置； 掌握調(diào)節(jié)暗視野顯微鏡的基本步驟。實驗一實驗一 特殊顯微鏡的原理及其使用特殊顯微鏡的原理及其使用第1頁/共14頁二、原理和結(jié)構(gòu)特點1.1.原理l根據(jù)丁達爾效應(yīng)原理設(shè)計的一種在黑色背景條件下觀察被檢物體的顯微鏡。l不讓直射光線進入物鏡的鏡頭，而是先讓直射光線經(jīng)過暗視野聚光器后改變途徑，使其斜向射向被檢物體。l能觀察到明視野下看不到的極其微小的物體，可判斷物質(zhì)顆粒的存在與否。最高分辨率可達0.004微米l主要用于微小粒子、細菌形態(tài)、細菌記數(shù)，透明標本觀察等。第2頁/共14頁2 .結(jié)構(gòu)特點 使

2、用中央遮光板或暗視野聚光器（常用的是拋物面聚光器），使光源的中央光束被阻擋。不能由下而上地通過標本進入物鏡。從而使光線改變途徑，傾斜地照射在觀察的標本上，標本遇光發(fā)生反射或散射，散射的光線投入物鏡內(nèi)，因而整個視野是黑暗的。第3頁/共14頁三、實驗步驟1.1.樣品制備：在一張無劃痕、清潔的載玻片上滴一滴生理鹽水，用牙簽取牙垢或用鑷子撕洋蔥內(nèi)表皮細胞與載玻片上的生理鹽水混合均勻，蓋上蓋玻片，用濾紙條吸取蓋片四周多余的水分，鏡檢。2.2.將暗視野聚光器安裝在顯微鏡上，調(diào)強照明光。3.在聚光器透鏡的上表面滴上鏡頭油。向上緩慢調(diào)升聚光鏡，使鏡頭油與載玻片下表面緩緩接觸。只有在油滴與載玻片的底面相接觸后，

3、光線才能射向標本。4.4.將標本置于載物臺上，插入10 x10 x物鏡，用調(diào)焦螺旋聚焦樣品。第4頁/共14頁II.相差顯微鏡的原理和使用 一、實驗目的 了解相差顯微鏡觀察活細胞的基本原理； 了解相差顯微鏡的特殊組件和位置； 掌握調(diào)節(jié)相差顯微鏡的基本步驟。第5頁/共14頁二、原理和結(jié)構(gòu)特點1 1 原理 光波有振幅（亮度）、波長（顏色）及相位( (指在某一時間上光的波動所能達到的位置) )的不同。 當光通過物體時，如波長和振幅發(fā)生變化，人們的眼睛才能觀察到，這就是普通顯微鏡下能夠觀察到染色標本的道理。而活細胞和未經(jīng)染色的生物標本，因細胞各部微細結(jié)構(gòu)的折射率和厚度略有不同，光波通過時，波長和振幅并不

4、發(fā)生變化，僅相位有變化( (相應(yīng)發(fā)生的差異即相位差) )，而這種微小的變化，人眼是無法加以鑒別的，故在普通顯微鏡下難以觀察到。第6頁/共14頁相差顯微鏡能夠改變直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉現(xiàn)象，把相位差變成振幅差（明暗差），同時它還吸收部分直射光線，以增大其明暗的反差。因此可用以觀察活細胞或未染色標本。第7頁/共14頁2.2.結(jié)構(gòu)特點 相差顯微鏡與普通顯微鏡的主要不同之處是：用環(huán)狀光闌代替可變光闌，用帶相位板的物鏡( (通常標有PHPH的標記) )代替普通物鏡，并帶有一個合軸調(diào)節(jié)用的望遠鏡。 環(huán)狀光闌是由大小不同的環(huán)狀孔形成的光闌，它們的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的。 相位

5、板安裝在物鏡的后焦面處，相板裝有吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線或衍射光的相位以外，還有吸收光使亮度發(fā)生變化的作用。第8頁/共14頁2.1環(huán)狀光闌 具有環(huán)形開孔的光闌。位于聚光器的前焦點平面上，光闌的直徑大小是與物鏡的放大倍數(shù)相匹配的，并有一個明視場光闌，與聚焦器一起組成轉(zhuǎn)盤聚光器。在使用時只要把相應(yīng)的光闌轉(zhuǎn)到光路即可。2.2相板 位于物鏡內(nèi)部的后焦平面上。相板上有兩個區(qū)域，直射光通過的部分叫“共軛面”，衍射光通過的部分叫“補償面”。帶有相板的物鏡叫相差物鏡，常以“Ph”字樣標在物鏡外殼上。第9頁/共14頁 二、實驗步驟 1.樣品制備：在一張清潔無痕的載玻片上滴一滴生理鹽

6、水，用牙簽刮自己的口腔粘膜少許或用鑷子撕洋蔥內(nèi)表皮細胞與載玻片上的生理鹽水混合均勻，蓋上清潔的蓋玻片，用濾紙條吸取蓋片周圍多余的水分，用指甲油封片（或不封片）。 2.將10 x相差物鏡旋入光路。 3.將相應(yīng)于10 x相差物鏡的相差聚光器的環(huán)狀光闌移入光路中，完全打開聚光器的孔徑光闌。 4.將樣品置于載物臺上，用聚焦螺旋聚焦樣品。第10頁/共14頁 5.用柯勒照明法調(diào)節(jié)聚光器：將視場光闌關(guān)到最?。挥镁酃馄魃嫡{(diào)節(jié)螺旋，調(diào)節(jié)聚光器的上下位置，直至在目鏡中觀察到視場光闌像的邊緣清楚；調(diào)節(jié)聚光器的調(diào)中螺旋，使視場光闌的像移至視場中央（調(diào)中聚光器）；打開視場光闌，使其邊緣與目鏡中的視場同樣大小。柯勒照明

7、是調(diào)好相差像的關(guān)鍵之一。第11頁/共14頁 6.觀察物鏡后焦面，調(diào)節(jié)儀器使聚光器中環(huán)狀光闌的像和相差物鏡中相板的圓環(huán)互相吻合，這一步是調(diào)好相差最重要的步驟。具體方法是：取下一個目鏡，插入一個聚焦望遠鏡，轉(zhuǎn)動望遠鏡的接目鏡，直到在望遠鏡中觀察到清晰的環(huán)狀光闌（在聚光器中）和相板（在相差物鏡中）的像。如果環(huán)狀光闌的明亮光圈與圓形相板不吻合，可以通過調(diào)節(jié)聚光器上的調(diào)中螺旋使之吻合。調(diào)節(jié)吻合后，取出聚焦望遠鏡，插入目鏡，就可在目鏡中觀察到一個清晰的口腔上皮細胞的相差像。 7.如果換用高倍相差物鏡觀察，需要移入相應(yīng)的高倍相差物鏡的聚光器環(huán)狀光闌進行觀察。第12頁/共14頁(A) bright-field microscopy.(B) phase-contrast mi