金標(biāo)試劑假陽或假陰的原因

1、金標(biāo)試劑假陽和假陰的原因分析1、 假陽：大多數(shù)假陽性信號出現(xiàn)的原因都是由于相似的問題， 即在常規(guī)的結(jié)合步驟進(jìn)行時(shí)蛋 白與膠體金顆粒特異性結(jié)合。 在此過程進(jìn)行期間， 蛋白質(zhì)被三種主要的力吸收在膠體金 的表面上。（1）電荷引力： 膠體金顆粒帶有負(fù)電荷，這是由于在將氯金化鈉轉(zhuǎn)化為膠體金時(shí)，使 用的還原劑 （經(jīng)常是檸檬酸鹽） 帶有的一層負(fù)電荷被吸附在膠體金顆粒的表面。 負(fù)電荷 將吸引帶有正電荷的蛋白并且足以使其靠近結(jié)合區(qū)的表面，這樣就有可能發(fā)生假陽性。 低于等電點(diǎn)的蛋白帶有正電荷， 因此可能會與膠體金顆粒表面發(fā)生強(qiáng)烈的吸引作用。 尤 其是帶有富含賴氨酸和精氨酸的蛋白區(qū)域在低于賴氨酸的等電點(diǎn)（ pH ）

2、和精氨酸的等 電點(diǎn)（ pH ）時(shí)會帶有大量的正電荷。（2）疏水作用力： 一旦蛋白質(zhì)彼此十分接近（之間的距離大約小于 1nm）,蛋白質(zhì)的任何疏水區(qū)很有可能與膠體金表面的疏水區(qū)接觸并且與之結(jié)合。因此富含 非極性氨基酸（例如色氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸或苯丙氨酸）的蛋白質(zhì) 會與膠體金表面發(fā)生強(qiáng)結(jié)合作用。（3）配位鍵結(jié)合力： 配位鍵結(jié)合力是所有吸引力中最強(qiáng)的結(jié)合力。 含有大量富含硫的 氨基酸（由于存在半胱氨酸和甲硫氨酸）的蛋白質(zhì)強(qiáng)結(jié)合膠體金顆粒表面。 這是由于在金原子（具有傳導(dǎo)帶電子的能力）和硫原子（帶有價(jià)電子）之間的吸 引力造成的。（ 4）伴隨捕捉抗體而產(chǎn)生的假陽性信號：有許多因素可能會影響捕捉

3、抗體發(fā)生非特異性結(jié)合反應(yīng)。產(chǎn)生假陽性信號可以歸結(jié)于疏水作用力、非特異性免疫反應(yīng)、 抗體中的添加物、帶有大量的正電荷、在與膠體金顆粒吸附的捕捉抗體中富有高 濃度的含硫氨基酸。在標(biāo)記過程中這些因素都會引起抗體與膠體金顆粒表面吸附 并與其結(jié)合。有些樣品可能非常具有粘性的（例如血清），這種因素也會使流速減慢。 當(dāng)檢測體系中沒有足夠的樣品或活性物質(zhì)來使金標(biāo)沿著檢測帶移動時(shí)， 膠體金顆粒也會 粘附在捕捉抗體帶上。（5）樣品的問題：許多樣品中含有可能與金標(biāo)粒子或捕捉抗體發(fā)生非特異性結(jié) 合的物質(zhì)，并且產(chǎn)生非特異性結(jié)果。舉例來說，一些含有細(xì)菌的樣品，而樣品中 的細(xì)菌可能被部分破壞成細(xì)胞碎片，并且這些細(xì)菌是非常疏

4、水的。這些疏水的細(xì) 菌碎片也可能與捕捉抗體和金標(biāo)粒子發(fā)生交叉反應(yīng)。 其它的一些樣品可能含有高水平的 硫或 SH 基團(tuán)，或者具有高正電荷。此外，一些樣品可能含有大量的分子或細(xì)胞分子， 這有可能阻塞膜并且對檢測帶上的金標(biāo)液的流動產(chǎn)生干擾。樣品可能在酸性條件下變化非常大。例如，尿液樣品最初的 pH 值是在 47 之間，然而隨著細(xì)菌含量的增加，樣品的 pH 值也隨之降低。酸性樣品在流動過 程中在捕捉抗體表面產(chǎn)生正電荷，反過來這將引起與帶有負(fù)電荷的金標(biāo)粒子發(fā)生 非特異性反應(yīng)。如果樣品含有大量的酸性物質(zhì)或者帶有大量的正電荷蛋白質(zhì)，它們在到達(dá)捕 捉抗體區(qū)之前可能與金標(biāo)粒子非特異性結(jié)合。這不僅能掩蓋待測物與金

5、標(biāo)的結(jié)合 信號（因此產(chǎn)生降低特異性信號效果），也能增加與在膜上和捕捉抗體帶上成簇 物質(zhì)的結(jié)合物。2、 假陰： 假陰性產(chǎn)生的原因大多是捕捉抗體和金標(biāo)液，但是也可能是由于檢測體 系中膜的流動性不好（流速太快或太慢）、金顆粒的釋放不充分、鹽量不足引起的，或 者是由于體系中酸度不適宜造成的。 另外，需要對樣品進(jìn)行處理才能讓抗體與抗原結(jié)合， 或者需要對樣品進(jìn)行稀釋以避免 hook 效應(yīng)，或者通過改變樣品成分掩蓋一些特殊的抗 原。捕捉抗體在儲存的過程中時(shí)常變得不穩(wěn)定并且會失去特異性活性， 可能是由于水解 作用（潮濕環(huán)境和干燥不充分），也可能是由于的疏水作用力的破壞。后者可能是抗體 自身的特性， 通過更換抗體或撕掉捕捉抗體層后用活性劑處理膜可以解決這個(gè)問題。 抗 體或金標(biāo)液潛在的不穩(wěn)定性要說明了檢測應(yīng)當(dāng)在可控的干燥環(huán)境的條件下進(jìn)行。假陰性結(jié)果的產(chǎn)生常常是由樣品與金標(biāo)的原因， 或者是膜帶的流動性的原因。 很多 的因素能夠?qū)е骂愃频默F(xiàn)象。這其中包括樣品的量不足、金標(biāo)液或樣品墊上糖量不足、 標(biāo)記墊和膜的結(jié)