薄層色譜法實(shí)踐技巧

1、薄層層析硅膠板薄層層析硅膠板是用高純度薄層層析硅膠（粉狀）調(diào)入一定量的粘結(jié)劑噴制成，板面純白、平整均勻、細(xì)密。主要成分為 SiO2 nH20，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，除強(qiáng)堿和氫氟酸外，不與其他酸堿反應(yīng)。薄層層析 硅膠板可直接用于多種類型有機(jī)物質(zhì)的定性或定量分析，在醫(yī)藥、農(nóng)藥、中草藥、有機(jī)化工產(chǎn)品及糧食、食品的 微量雜質(zhì)及主要成份的鑒定中已得到普遍應(yīng)用。硅膠板的規(guī)格分為：G，H，GF254，HF254。那這些型號(hào)到底代表什么意思？他們的依據(jù)是什么呢？"硅膠H"-不含粘合劑；"硅膠G"-含煅石膏粘合劑；"硅膠HF254"-含熒光物質(zhì)，可用于波長為

2、254nm紫外光下觀察熒光；"硅膠GF254"-既含煅石膏又含熒光劑。還有一個(gè)非常簡單的判別分類的辦法就是，不同型號(hào)的硅膠在于其中石膏含量的不同，這一點(diǎn)體現(xiàn)在硅膠的粘稠度不同，石膏含量越高越粘稠。這個(gè)在賣硅膠的瓶子上都有標(biāo)識(shí)，比如硅膠（H就很稀松，硅膠G一般粘稠度 還是比較適中的。化工行業(yè)上的名詞 硅膠板”只是一個(gè)簡稱，其全稱應(yīng)該叫薄層層析硅膠板，它用高純 度薄層層析硅膠（粉狀）調(diào)入一定量的粘結(jié)劑噴制成，其板面一般為玻璃，今年來，國外 比較流行使用鋁箔來做附著板面。要求板面純白、平整均勻、細(xì)密。主要成分為SiO2 nH2O，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，除強(qiáng)堿和氫氟酸外，不與其他酸堿反應(yīng)。

3、薄層層析硅膠板可直接用于多種類型有機(jī)物質(zhì)的定性或定 量分析，在醫(yī)藥、農(nóng)藥、中草藥、有機(jī)化工產(chǎn)品及糧食、食品的微量雜質(zhì)及主要成份的鑒 定中已得到普遍應(yīng)用。硅膠板的規(guī)格分為：G，H，GF254，HF254。H是Hard的簡稱G是Glut in ous 的簡稱F是Fluoresce nt的簡稱硅膠h 不含粘合劑，不含熒光劑；硅膠G 不含熒光劑，含煅石膏粘合劑；硅膠HF254 含熒光物質(zhì)，可用于波長為 254nm紫外光下觀察熒光；硅膠GF254 既含煅石膏又含熒光劑，可用于波長為254nm紫外光下觀察熒還有一個(gè)非常簡單的判別分類的辦法就是，不同型號(hào)的硅膠在于其中石膏含量的不同，這一點(diǎn)體現(xiàn)在硅膠的粘稠度

4、不同，石膏含量越高越粘稠。這個(gè)在賣硅膠的瓶子上都有標(biāo)識(shí)，比如硅膠 H就很稀松，硅膠 G 一般粘稠度還是比較適中的。硅膠板的使用尺寸一般是：30X100 MM，50X100 MM，50X200 MM，100X 200 MM，200 X 200MM,也可以根據(jù)客戶的特殊需求制作。前面說的鋁箔板面的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)就是使用過 程中可以根據(jù)使用面積的大小來裁剪。薄層色譜法實(shí)踐技巧目的：1. 藥典：薄層色譜法系將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得 色譜圖與事宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖對(duì)比，并可用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，用于鑒別、檢查或含量測(cè)定。2. 如果你是做鑒別的話，薄

5、層的系統(tǒng)適用性主要是做檢測(cè)限和分離度；3. 如果你是做含量測(cè)定，比如說用薄層掃描法，薄層的系統(tǒng)適用性應(yīng)該做線性范圍、同板精密度、異板精密度、回收率；4. 手工鋪制的板子，只適宜于定性分析，不宜于分離定量；5. 化學(xué)藥一般是作有關(guān)物質(zhì)，需要一定的載藥量，所以要適當(dāng)增加厚度；6. 中藥一般較難分離，需要薄板，以增加分離度；7. 手工鋪制的板子常用的有： 硅膠G板和硅膠CMC-Na板。前者是煅石膏（石膏經(jīng)140C烘烤3 4小時(shí)）與硅膠按1 1.3: 10混合均勻。每份硅膠 G加水2 3份調(diào)成糊狀，即可使用。后者的操作各位大蝦已有論述。8. 如果你鋪板目的是做分析用的話，肯定得很仔細(xì)用心；如果僅是天然

6、藥化那種粗略檢查過柱子得到的餾分純度，那就沒有必要這么復(fù)雜了，也就是說速度可以快點(diǎn)，板的要求也沒有必要這么高；9. 單純的手鋪板，技巧要求很高的，如果有鋪板器（也是完全手動(dòng)的那種），鋪岀的板子基本上可以保證均一的。10. 要噴硫酸乙醇并定量的最好鋪水板；鋪水板是最考技術(shù)的，主要是碾磨技術(shù)，大家可以探討一下；11. 硫酸乙醇顯色作定量分析的品種，但凡加了CMC-Na的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時(shí)，后改用不加CMC輔的水板來作，就不會(huì)有烘糊現(xiàn)象，故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應(yīng)。感覺輔水板關(guān)鍵是硅膠G與水的比例要達(dá)1 : 3.5左右，而且研磨后要盡快涂布，不能易于凝固而難于涂布。展開：

7、12. 藥典：展開容器 應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，并有嚴(yán)密的蓋子，底部應(yīng)平整光滑，或有 雙槽。上行展開一般可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸，展開時(shí)須能密閉。水平展開用專用的水平展 開缸。13. 藥典：將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)5mm為宜（切勿將樣點(diǎn)侵入展開劑中），密封頂蓋，待展開至規(guī)定距離，除另有規(guī)定外，一般為815 cm，溶劑前沿達(dá)到規(guī)定的展距，取岀薄層板，晾干，按正文項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)。14. 展開劑的選擇（分離單體）：（1）粗分，也就是當(dāng)你的樣品極性范圍比較大的時(shí)候，可以直接采用極性較小的流動(dòng)相。然后將前沿、原點(diǎn)以及前沿及原點(diǎn)間

8、的硅膠分別刮下，提取。這樣，樣品就被分為幾個(gè)部分，而各個(gè)部分的極性相差也比較小了。然后 再將這幾部分分別進(jìn)行下面的細(xì)分TLC。（2）細(xì)分。經(jīng)過粗分之后，我們一般對(duì)各個(gè)部分的極性都能夠做到心中有數(shù)了。比如，被沖到前沿的樣品，要采 用更小極性強(qiáng)度的流動(dòng)相，而死吸附部分，則需要較大強(qiáng)度的流動(dòng)相。我們?cè)诔醪酱_定了流動(dòng)相的極性強(qiáng)度之后，可以自己設(shè)計(jì)幾個(gè)溶劑系統(tǒng)。在選擇流動(dòng)相的組成的時(shí)候，可以參考 snyder的溶劑分類，從質(zhì)子受體，質(zhì)子給體和偶極作用的溶劑中各選擇一種，然后再選擇一個(gè)強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑。當(dāng)然， 也可以參考文獻(xiàn)中采用的流動(dòng)相。選好了要用的流動(dòng)相，就可以根據(jù)我們初步確定的極性強(qiáng)度得到流動(dòng)相的配比 了

9、（如果是二元流動(dòng)相的話）。如果是三元及以上的流動(dòng)相，可以采用Glajch和Youngstrom的七種溶劑系統(tǒng)的方案進(jìn)行選擇流動(dòng)相的配比。然后從中選擇分離效果比較好的組合。最開始可以采用微量圓環(huán)法（將樣品點(diǎn)在中間，然后將流動(dòng)相用毛細(xì)管從原點(diǎn)向圓周擴(kuò)散）和小板實(shí)驗(yàn)法來摸索，然后再應(yīng)用于大的制備 TLC。我也曾直接采用圓環(huán)法，也稱為環(huán)形展開，來進(jìn)行制備的。本來是應(yīng)該有專門的U形展開室來展開，但是因?yàn)槲覀冞@里沒有這個(gè)設(shè)備，所以我一般采用簡易的方法：即將樣品點(diǎn)在中央，然后用尖頭的滴管源源不斷的向圓心滴 加流動(dòng)相的。樣品會(huì)分出不同的同心圓而得到分離。這樣的好處有三：（1）只要操作小心，各個(gè)同心圓真的就非常

10、圓，即不會(huì)岀現(xiàn)線性層析中的邊緣效應(yīng)等。（2）分離效果更好，拖尾現(xiàn)象小于線性層析。（3）由于圓心式展開的Rfc是線性展開的Rf的平方根，要大于線性展開的 Rf,所以分的更開。弊端在于將各個(gè)組分從板上刮下的 時(shí)候需更小心才不會(huì)使之混雜。15. 當(dāng)展開劑極性差別很大時(shí)，特別是極性大的成分所占比例很小時(shí)，往往會(huì)岀現(xiàn)溶劑脫混現(xiàn)象。在這種情況下， 展開槽 飽和與不飽和差別沒有顯著性差異， 薄層板上往往會(huì)出現(xiàn)類似分層的現(xiàn)象， 所以只有換展開系統(tǒng)來調(diào)整。16. 甲醇用量較小，而甲醇又易揮發(fā)，容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。17. 如果經(jīng)過一次展開后 ,展開槽內(nèi)仍剩下足夠的展開劑 ,可以

11、展開第二塊板子嗎？ 個(gè)人認(rèn)為最好不要。一般來說為得到較好的分離效果，應(yīng)先飽和一下，第二次使用如果還要飽和就會(huì)造成另一側(cè) 殘留的展開劑附著在板子上，造成影響。而且有機(jī)溶劑一般較易揮發(fā)。18. 自己手鋪的薄層板怎么都沒有買來的高效板好用， 用過之后也可以用極性大些的展開劑將展開的點(diǎn)， 二次展開 跑過，這樣就可以重復(fù)利用了。顯色：19. 藥典：顯色裝置 噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出；浸漬顯色可用專用的玻璃器皿或用適 宜的玻璃缸代替；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的干燥器代替。20. 說關(guān)于薄層板加熱變黑的問題， 其實(shí)很容易解決：當(dāng)噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了，可以用電吹風(fēng)在

12、板子 背面吹吹就能顯色了。我們實(shí)驗(yàn)室里一般都采用此法，簡便、快潔如果一非想使用烘箱烘的話，一定要用帶玻 璃窗的，當(dāng)看到顯色了就取出，不然不好控制顯色時(shí)間，時(shí)間過長， CMC 容易碳化變黑。21. 根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，薄層版變黑與 CMC Na 的濃度過大有關(guān)，如果你留意的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)顯色劑中有濃硫酸 時(shí)，加熱時(shí)間稍長就會(huì)變黑（其他顯色劑是沒事的），我老師說這是因?yàn)闈饬蛩岚?CMC Na 炭化了，其實(shí) color=blue= 這種情況你只要適當(dāng)降低 CMC-Na 的濃度就可以了，當(dāng)然如果不加CMC-Na 的話容易把板弄破。22. 顯色劑R6:稱取lOOmgDC紅色19號(hào)（染料索引號(hào) No 4517

13、0）溶于150ml二乙醚、70ml 95 %乙醇和15ml水。 此溶液可保存一周。薄層板噴布顯色劑 R6 后，立即在 366nm 下觀察和記錄。問題與應(yīng)用:23. 板子會(huì)裂口，一則可能是因?yàn)楣枘z的比例太大，二則可能是，板子要在常溫下晾干后，再在烘箱中活化。如果 鋪完不久就在較高溫度下，裂口的幾率就比較高的。24. 板鋪好后，自然涼干最好，一定是要從玻板后看也是干的，注意一定要放平，最好控制空氣流動(dòng)；然后再放到 烘箱中活化，這樣就不會(huì)有裂開的現(xiàn)象了； 如果直接鋪好后或者只是硅膠表面是干的，放進(jìn)烘箱都會(huì)有裂開的。25. “晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以避免板子炸裂?！蹦愕陌鍥]有完

14、全干透，表面看是干了，但是最中間的沒有干，所以你直接放入1 05度的烘箱烘，當(dāng)然會(huì)炸裂了，所以應(yīng)該先用低溫大約 40 度左右烘 30 分鐘左右，再用 105 度活化，就可以解決這個(gè)問題了。26. 板子炸裂也可能是 CMC-Na 中有絮狀沉淀所致。27. 但凡加了 CMC 的板都易烘糊，尤其是溫度高于 1 00度時(shí)，若改用不加 CMC 輔的水板來作，就不會(huì)有烘糊現(xiàn) 象，但不加 CMC 輔的板又太軟，點(diǎn)樣時(shí)容易點(diǎn)出洞，有個(gè)好辦法是將 CMC 的濃度調(diào)至 0.1%，這樣就不易烘黑 的。28. 系統(tǒng)適用性:如果你是做鑒別的話，薄層的系統(tǒng)適用性主要是做檢測(cè)限和分離度。 如果你是做含量測(cè)定，比如說用薄層掃

15、瞄法，應(yīng)該做線性范圍，同板精密度，異板精密度，回收率。CMC-Na 溶液的配制:29. 藥典規(guī)定CMC-Na濃度為0.2%0.5%，實(shí)際操作中0.4%0.5%最為實(shí)用；CMC-Na溶液的溶劑應(yīng)用蒸餾水， 以盡量減少污染。30. 配制 CMC-Na 溶液， 根據(jù)實(shí)際經(jīng)驗(yàn)一般將溶液濃度配成0.3%，需要鋪厚板可配成 0.5%左右，薄板可配成 0.2%即可。 CMC-Na 溶解最好是自然溶解（濃度不是太高），也可在水浴中加熱促溶（用時(shí)還是過濾一下好，避免鋪出的板子有麻坑）。31. 配制 CMC-Na 溶液時(shí)，可以先量取好蒸餾水，再將稱量好的 CMC-Na 均勻撒在水中，用玻璃棒攪拌，如果操 作的好的

16、話可以不用加熱都能溶解的很好； 當(dāng)溶解完全后，應(yīng)該抽濾一下，這樣鋪的板子很均勻，不過濾會(huì)因?yàn)?一些肉眼看不到的不溶物混入，這樣鋪的板子會(huì)出現(xiàn)許多小顆粒；32. 第一個(gè)關(guān)鍵的地方， 你的 CMC-Na 溶液必須配制的好，放置的也要很好，完全分層之后只能取上清液。上清 液要澄清透明，時(shí)間太長的 CMC-Na 可能會(huì)發(fā)黃，如果有霉菌出現(xiàn)的話，絕對(duì)不能使用；33. 如果有抽濾裝置你可以直接把 CMC-Na 溶液濾過，就可以不必等它沉淀再取上清液了（嘿嘿，我是急性子）， 還有兩個(gè)好處一是節(jié)省 CMC-Na 溶液，二是倒濾過的 CMC-Na 溶液的時(shí)候不必?fù)?dān)心會(huì)把下層的不溶物倒出來了。34. 在 CMC-

17、Na 的溶解過程中，可以使用可進(jìn)行加熱操作的磁力攪拌器，大概攪拌5 小時(shí)，應(yīng)該可得到滿意的效果。而且這樣就可以使 CMC-Na 溶解，并且溶液更澄清 ; CMC-Na 后處理，很多人說是過濾，或者抽濾，我覺得 可能速度很慢，而且又容易浪費(fèi)。我的做法是離心， 5000rpm 離心 20min 。倒出上清液，（非常清，也同時(shí)消除 了過濾過程中可能發(fā)生的污染）。更難能可貴的是，我可以收集下面沒有充分溶解的 CMC-Na 。繼續(xù)加到水中， 還可以配制。35. 配制4%5%的羧甲基纖維素（CMC ）:稱取CMC，溶于冷水中，邊加熱邊攪拌，直至成為清澈、透明的溶 液。36. 有個(gè)辦法過濾 CMC-Na 溶

18、液，在布氏漏斗上平鋪薄薄一層脫脂棉，千萬保證每個(gè)小孔都沒漏掉哦！用蒸餾水 潤濕脫脂棉，啟動(dòng)真空泵，抽緊后就可以放心大膽的倒 CMC-Na 溶液了，保證濾過的溶液澄清透明，而且長時(shí)間 放置不沉淀。37. CMC 溶液的濃度 0.3-0.7% 比較合適， 濃度高了將來顯色時(shí)如果有加熱過程稍不小心板子容易發(fā)黑，濃度低了 鋪出來的板子不結(jié)實(shí)，輕輕一碰就掉渣，不好保存，而且點(diǎn)樣時(shí)會(huì)很緊張，容易出洞；38. 先將 CMC-Na 溶解完全 ,可將溶解成所需濃度加熱后超聲處理,再抽濾 ,可很快得到上清液39. CMC-Na 煮沸大概 30 分鐘或更久的，其實(shí)這個(gè)過程很慢。千分之3。過濾一下，抽濾最好。要放冷。

19、40. 制備CMC-Na時(shí)，我的方法是將CMC-Na加入沸騰的水中，慢加快攪，防止成團(tuán)，完全溶解之后，自然沉降 或者是抽濾 （建議不用濾紙，太慢了，脫脂棉是個(gè)不錯(cuò)的選擇）。41. 對(duì)于 CMC-Na 溶液的配置，我認(rèn)為最好提前幾日配好，放置再用。配置時(shí)可用超聲分散，對(duì)少量沒有立即溶 解的，放置后會(huì)逐漸消失。42. CMC-Na 要用蒸餾水為溶劑，加熱溶解后，放冷，最好濾過使用； 消泡劑可直接與 CMC-Na 溶液混合使用；43. 如是鋪 CMC-Na 的薄層板，先將 CMC-Na 溶解完全，可 將溶解成所需濃度加熱后超聲處理，再抽濾，可很快 得到上清液。44. 關(guān)于 CMC-Na 的配制我覺得

20、還要說一點(diǎn)就是: 這個(gè)東西也算是一種高分子材料，而高分子材料的溶解必然都會(huì)有一個(gè)溶脹，溶解的過程，所以配制的時(shí)候，應(yīng) 該將稱好的 CMC-Na 少量的撒在水的表面，讓其自然沉降，注意要散開平鋪，這樣能夠充分浸潤，使其溶脹，之 后可以置于水浴鍋內(nèi)加熱溶解；當(dāng)然如果你不是很急著用的話也完全可以，直接用水泡著放那，估計(jì)十天半月的 也可以用了。45. CMC-Na的溶解需要煮？ ？藥檢所的老師用一個(gè)大缸子裝水，按比例加入CMC-Na，讓他自然溶漲、溶解,臨用前用漏斗，加脫脂棉，濾過即可；46. 根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，薄層版變黑與 CMC - Na的濃度過大有關(guān)，如果你留意的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)顯色劑中有濃硫酸時(shí)，

21、加熱時(shí)間稍長就會(huì)變黑（其他顯色劑是沒事的），我老師說這是因?yàn)闈饬蛩岚袰MC - Na炭化了，其實(shí)color=blue= 這種情況 你只要適當(dāng)降低 CMC-Na 的濃度就可以了，當(dāng)然如果不加 CMC-Na 的話容易把板弄破；47. CMC-Na 溶液煮了以后不能再用冷水兌，否則，幾天以后就會(huì)變綠，起霉。48. CMC-Na 完全溶解后，用布氏漏斗過濾。玻板:49. 選擇合適的薄層板（如：20X10 cm），清潔干凈（先用洗手液或洗衣粉清洗，再用自來水沖洗干凈，接著用蘸 有乙醇的棉花擦拭干凈，最后把板吹干或烘干），放置于清潔處，備用。50. 玻璃板應(yīng)該很干凈，沒有劃痕，沒有缺口，4個(gè)角要 健全”5

22、1. 載板要求平滑清潔。在使用前一定要處理干凈，用洗滌液或肥皂水洗滌，再用水沖洗干凈，烘干。52. 清洗玻璃板相當(dāng)重要，切記要清洗得相當(dāng)干凈，不然會(huì)在鋪板中產(chǎn)生小氣孔。53. 薄層板最好用洗潔精浸泡 12小時(shí)，這樣比較容易清洗，清洗后薄層板依柱豎起，半小時(shí)即可晾干。54. 板子一定要洗干凈，用適中濃度的鹽酸浸泡是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。55. 板要絕對(duì)干凈?？偨Y(jié)：完整、平滑、清潔！研磨：56. 硅膠和粘合劑的比例不用固定，稀點(diǎn)鋪薄板，稠點(diǎn)鋪厚板，以目的決定比例。57. 硅膠的研磨，當(dāng)然是一個(gè)方向了，可以適量的加入一定量的無水乙醇或丙酮來消泡，也可以適當(dāng)攪拌后放在干凈容器內(nèi)超聲，效果都是不錯(cuò)的。手工鋪硅

23、膠的用量一般10X20 cm的約34克，硅膠和CMC-Na的用量一般是1 : 2.83，具體根據(jù)要鋪板子的厚度和 CMC-Na的濃度決定。58. 40%硅膠：按CMC溶液的量、按40%的比例稱取薄板層析硅膠，倒入大研缽中，與CMC溶液混合，充分研磨成均勻糊狀。59. 先在研缽中加CMC溶液，再加硅膠，按同一方向研磨，這樣更容易調(diào)勻不易包埋硅膠顆粒；稠度以用研棒粘 取，成連珠狀不成線狀下滴為好 ；配制時(shí)遵循現(xiàn)配現(xiàn)用、少量多次的原則，因其易干影響鋪制效果。60. 硅膠和CMC-Na溶液的比例可以適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)，根據(jù)你所需要薄層板的軟硬來微調(diào)。可以一個(gè)人研磨，一個(gè)人 緩慢的倒CMC-Na溶液。研磨時(shí)最能

24、考驗(yàn)?zāi)愕亩Γ矣X得你該找女生來磨，但是那種太文弱的不行。研磨時(shí)要 順著一個(gè)方向，速度不宜快，要順著研缽的邊緣，觀察仔細(xì)，一定要把氣泡趕盡殺絕。研磨好的因改是均勻的，沒有氣泡，沒有固體的粉末類異物，溶液有一定的粘性。61. 硅膠的濃度要適中。太稀鋪板時(shí)易淌岀，同時(shí)延長板的干燥時(shí)間；太稠，流動(dòng)性不好，鋪板是靠其流動(dòng)性的， 同時(shí)也很可能在沒鋪好前凝固。62. 建議硅膠應(yīng)配制成偏稀的狀態(tài) ，這樣鋪制更容易，不必辛苦地顛好久，而且可多可少，可薄可厚。63. 我的經(jīng)驗(yàn)是CMC-Na與硅膠配成3 : 1比較合適，CMC-Na用千分之三到千分之五，硅膠濃度稍大一些或小一 些也行，但不能太低，否則板子邊緣會(huì)凹

25、凸不平。64. CMC-Na :硅膠為2.5: 1較好，樓上師兄說的3: 1應(yīng)該也可以，但是硅膠配的過稀時(shí)后果很嚴(yán)重，板子在晾 干時(shí)會(huì)岀現(xiàn)許多裂縫，象萬壽菊樣的開花狀，完全不能用。65. 充分磨好硅膠，后，再邊磨邊加CMC-Na溶液；鋪的時(shí)候，如果慢且多，那么有時(shí)會(huì)干了，你還要邊磨邊放點(diǎn)CMC-Na溶液。66. 研磨時(shí)防止氣泡可以加少量的乙醇或者丙酮；加入幾滴乙醇或丁醇，可起到消泡的作用。67. 加長研磨的時(shí)間，勿太厚，避免板子炸裂。68. 超聲的排氣效果很好。69. 0.4% CMC-Na溶液（1 : 3）置研缽中，朝一個(gè)方向慢慢研細(xì)約1015分鐘，10g吸附劑加入3滴95%乙醇以驅(qū)趕氣泡；

26、70. 硅膠的研磨時(shí)間：如果嚴(yán)格規(guī)定的話，需在一分鐘內(nèi)完成，從加入CMC溶液到吸附劑中至涂布結(jié)束，應(yīng)在四分鐘內(nèi) 完成71. 硅膠與CMC-Na溶液的比例根據(jù)硅膠型號(hào)的不同而不同：硅膠G或硅膠GF254比例一般為1: 21: 3,硅膠H或硅膠HF254比例一般為1: 31 : 4。72. 研磨的時(shí)候確實(shí)需要沿一個(gè)方向研，不要敷衍73. 硅膠研磨要充分，防止氣泡。74. 實(shí)在怕有氣泡，可以超聲一下。鋪板：75. 藥典：薄層板制備 除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水（或加有黏合劑的水溶液）在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.20.3

27、mm），取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，后在110 C烘30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。表面應(yīng)均勻，平整，無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染。76. 薄層板的厚度：如果定性分析，一般厚度以0.25 mm為好；如果要分離制備少量的純物質(zhì)時(shí)，厚度應(yīng)稍大一些，常用的為 0.5 mm 0.75 mm，甚至有1 mm 2 mm的。77. 鋪板，我覺得是各人各喜歡，可以順著板中間倒，也可以順著某個(gè)邊緣倒，倒時(shí)也要注意不能引入小氣泡。可以用玻璃棒引著溶液平鋪在玻璃板上，如有需要，可以雙手10個(gè)指頭拖住玻璃板，有節(jié)奏的顛，使得硅膠分?jǐn)倓蚍Q。尤其是4個(gè)

28、角，容易高岀玻璃板其他部位， 所以要格外注意。顛好的板，表面看上去要光滑平整，沒有氣孔。78. 將薄層用硅膠粉稱定加入 3倍量的CMC-Na溶液，研磨均勻（勻速一個(gè)方向）成糊狀（我用1分鐘左右），不要靜置迅速將涂料倒于備好的玻璃板（事先清洗干凈，不可有污漬、水滴。）自上而下自然流注鋪于玻璃板，倒量為距離邊緣3厘米左右即可（鋪厚板用量適當(dāng)多些，薄板量少些），然后用研缽棒涂布玻璃板上。顛板（上 下左右或傾斜根據(jù)板的涂布情況而定）。鋪好的板要選擇一個(gè)水平、通風(fēng)的平臺(tái)放置，不可落上灰塵。79. 依據(jù)薄層板使用需要，將適量研好的吸附劑倒到薄層板上，先用小錘將吸附劑蕩勻，傾斜層析板，使吸附劑流至層析板一側(cè)

29、，待吸附劑蓄積一定量后，再反向傾斜層析板，使吸附劑回流；然后是另外兩個(gè)方向，重復(fù)上述操作，后輕顛幾下薄層板即可。80. 將吸附劑制備好后，直接將適量傾倒于玻板的中央處，接著用研棒輕輕將吸附劑溶液向四周攤勻，然后開始顛 玻板；顛的時(shí)候可要注意啦：一定要輕輕的顛，從玻板的一頭顛到另一頭，然后反過來進(jìn)行。重復(fù)幾次即可。81. 將研好的糊糊倒在干凈的板上，我一般是從中間一次性倒下去，然后用左手托板，輕輕傾斜，使糊糊向板邊緣 流動(dòng)，右手拿研棒將沒鋪到的地方涂均勻，但要注意研棒在接觸糊糊一直到最后涂抹均勻才能離開板，一旦提起 就不能再去涂抹，否則會(huì)留下痕跡。涂抹結(jié)束后，就顛板啦，我的經(jīng)驗(yàn)是顛的幅度不易大，

30、但頻率可以快些。82. 顛板。此過程要與前面步驟連續(xù)進(jìn)行，且不宜久顛，以保證顛好后硅膠還有一定的流動(dòng)性，放置到平臺(tái)時(shí)仍可以靠自身流動(dòng)修正顛板及移動(dòng)所產(chǎn)生的不均。83. 將載玻片置于平臺(tái)上，用藥匙舀取糊狀硅膠，均勻地鋪在載玻片表面。84. 鋪板時(shí)，用的硅膠量要掌握好。85. 將硅膠倒入在盛有 CMC-Na溶液的研缽中，CMC-Na溶液的濃度不宜過高，研磨均勻，大約5-10分鐘，用研棒粘取，成珠滴為好，鋪板，兩面顛簸至平放置平臺(tái)上。86. 載玻片的涂布：將干燥后的載玻片兩片夾在一起，沉浸入糊狀物中，使在載玻片上形成固體層.為了浸蕉一對(duì)載玻片，用你的指間夾住載玻片的一端，并盡可能地向下進(jìn)入所提供的糊

31、狀物中當(dāng)載波片一浸入糊狀物中后， 立即以快而平穩(wěn)的速度將其拉岀，并讓過量的糊狀物滴回小心的分開載玻片，放到水平臺(tái)上，干燥.（注意： 糊狀物一定要均勻；要迅速拉岀載玻片，大多數(shù)人拉得太慢）87. 研磨硅膠時(shí)，我一般取 30 g硅膠H，加入5%的CMC-Na 100 ml，研磨，當(dāng)將研棒提起時(shí)，硅膠象成溜似的 滴下為正好。88. 鋪完板后，最好將兩邊的邊緣修理一下，并且各個(gè)邊緣都要擦干凈，這樣可以避免跑歪。89. 邊緣壞一點(diǎn)可以用刀子刮去整齊的一條。晾干：90. 對(duì)鋪好的板要選擇平整的地方，自然干燥，不易人為強(qiáng)制干燥。干燥后再活化，否則板會(huì)開裂。91. 鋪好的板，要找個(gè)干凈的地方放置晾干，這個(gè)過程

32、也是耐心的等著它，請(qǐng)勿打擾。92. 板鋪好后，自然涼干最好，一定是要從玻板后看也是干的，注意一定要放平，最好控制空氣流動(dòng)。93. 板子鋪好之后一定要放在平面上陰干（一定是陰干，不然你會(huì)后悔的），如果看熒光最好是找一個(gè)比較干凈的 房間，不然熒光下板子上會(huì)有很多點(diǎn)點(diǎn)。94. 要等陰干且透后才能放入烘箱干燥活化時(shí)。還有一點(diǎn)，鋪板和涼板時(shí)周圍的環(huán)境要好，桌面要干凈，最怕是有 粉塵，如有粉塵落在未干的板上可就慘了，定量不行，可以定性，但不好看。95. 自然干燥后，放入烘干箱烘 12小時(shí)以上。96. 薄層板鋪好后一定要放置在平的臺(tái)面上，否則難保證板面硅膠的厚度均勻。97. 鋪制好的薄層板先讓其稍干后， 即

33、看不出有明顯的水印，放入烘箱內(nèi)用50度以下的溫度并開鼓風(fēng)干燥 30分鐘， 再升溫干燥至干，注意升溫過快在使用的過程中有可能發(fā)生起層的現(xiàn)象，不利于分離，以上方法經(jīng)本人兩年多的實(shí)踐，效果較好且耗時(shí)又不太長。98. 置平整處過夜自然晾干；如使用較急亦可60 °C烘干。活化：99. 活化的目的是除去水分。100. 自然晾干后，活化一下（105攝氏度40分鐘左右），置于密封的干燥器保存。101. 再在105110 C活化，活化時(shí)間為 0.51小時(shí)，冷卻后即可使用。102. 厚板在活化時(shí)容易裂，考慮到化學(xué)藥相對(duì)容易分離，所以降低活化溫度，自然晾干后，40或60攝氏度的烘箱中23小時(shí)即可，干燥器中保存。103. 用于分離中藥的薄板需要活化，活化后要立即使用，可以稱熱點(diǎn)樣飽和，不然空氣中的水分 會(huì)導(dǎo)致你作無用功，使得吸附色譜轉(zhuǎn)為分配色譜。104. 薄層烘干的時(shí)候最好不要在帶鼓風(fēng)的烘箱中烘，容易起皺，或者破裂。點(diǎn)樣：105. 藥典：點(diǎn)樣器 一般采用微升毛細(xì)管或手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)點(diǎn)樣器材。106. 藥典：除另有規(guī)定外，在潔凈干燥的環(huán)境中，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀，點(diǎn)樣基線距的底邊 1520 mm，高效板一般基線距底邊 810 mm，圓點(diǎn)狀直徑一般 不大于3 mm，高效板一般不大于 2 mm；條帶狀寬度一般為 510 mm