薄層色譜基礎(chǔ)知識(shí)及斑點(diǎn)異常

1、guewellnLIZ薄層色譜薄層色譜操作的流程ri薄層板的制備:什么是固定相?M9inO薄層板的制備?常用固定相1、聚酰胺2、硅膠3、硅澡土4、氧化鋁5、纖維素 6、其他薄層板的制備薄層板的制備:聚酰胺什么是聚酰胺?薄層板的制備薄層板的制備2、聚酰胺適合那些化合物的分離?適用于多元酚類化合物分離，如黃酮，醍 類，酚酸，含撥基的化合物等薄層板的制備*硅膠7Z"1T什么是硅膠2、硅膠適合酸性和堿性等化合物的分離#薄層板的制備薄層板的制備3、實(shí)驗(yàn)室硅膠有哪些型號(hào)硅膠S硅膠G硅膠H/硅膠N硅膠GF245硅膠,薄層板的制備薄層板的制備:硅膠G和硅膠S1. 硅膠G是指硅膠粉+15%鍛石膏。2.

2、 硅膠S是指硅膠粉+15%淀粉。薄層板的制備:硅膠H或硅膠N/是指純硅膠粉，沒有添加任何粘合劑 9薄層板的制備薄層板的制備:硅膠H和硅膠G的應(yīng)用1物質(zhì)是有色的，在日光看2物質(zhì)沒有顏色但可以利用顯色劑顯色3.可以熒光顯色10薄層板的制備:硅膠HF254和硅膠GF2541. 是指添加了熒光劑，如硫化鎘等。2. 應(yīng)用范圍：物質(zhì)有熒光，在254波長紫外 下看其熒光；物質(zhì)沒熒光，在254波長紫外下看暗斑（熒光淬滅）11薄層板的制備#薄層板的制備自制寺X無黏合劑#*含黏合劑、k/kr *譏,f r, ,.Vp .上 I薄層板的制備黏合劑1 cmc-na溶液的配制先將稱好的CMC-Na加入所需水量的 8/1

3、0,讓其充分溶漲后，再加熱煮沸, 然后將剩余水慢慢加入.這樣在煮 沸過程中不易形成顆粒，煮沸時(shí)間 短.薄層板的制備黏合劑1 cmc-na溶液的濃度溶液的濃度0.3-0.7%比較合適，實(shí) 際操作中0.4%0.5%最為實(shí)用， 濃度高了將來顯色時(shí)如果有加熱過 程稍不小心板子容易發(fā)黑，濃度低 了鋪出來的板子不結(jié)實(shí)，不好保存15薄層板的制備黏合劑1 cmc-na溶液的存放注意放置時(shí)間太長的CMC-Na溶液可 能會(huì)發(fā)黃，而且可能直霉菌出現(xiàn)，最好不要使用。17薄層板的制備7#薄層板的制備制板傑作：除另有規(guī)定外，是指 將1份固定相和3份水溶液 ,研磨混合，置玻璃板上 使涂布均勻，平臺(tái)上于室 溫下晾干，活化后，

4、置有 干燥器中備用。1沿同一方向研磨混合，避免產(chǎn)生氣泡2.厚度為0.2-0. 3mm,涂層薄，點(diǎn)樣容易過載；涂層厚，顯色不那么明顯3.室溫下在水平位置放置，待薄層發(fā)白近干719薄層板的制備注意點(diǎn)6.鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠，板容 易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋；過稀，水蒸 發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠 G:水二1： 23,硅膠G:竣甲基纖維素鈉水溶 液二1:2。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也 影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量。1 薄層板為何要進(jìn)行“活化” ？2. 在105-110度活化30分鐘。一般檢識(shí)水溶性成分或一些極性大的成分時(shí) ,所用薄層板只在空氣中自然干燥，不經(jīng)活 化即

5、可貯存?zhèn)溆?1- g' y I, '薄層色譜的點(diǎn)樣21薄層色譜的點(diǎn)樣:點(diǎn)樣的形狀1、圓點(diǎn)2、條帶狀23薄層色譜的點(diǎn)樣9Q薄層色譜的點(diǎn)樣1-不要弄破薄層板2. 點(diǎn)樣量大時(shí)，少量多次，點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)吹干或 放入干燥器里晾干#薄層色譜的展開將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)5mm為宜，密封25進(jìn)色譜的展開:展開劑配制1把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混 合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大 的一層作為展開劑。最好不要把各組成溶液倒 入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑。2. 混合展開劑要求新鮮配制，不要多次反復(fù) 使用，如需分層，則按要求放置分

6、層后取需 要的一相（上層或下層），備用薄層色譜的展開:預(yù)飽和、預(yù)平衡展開缸如需預(yù)先用展開劑預(yù)平衡，可在缸中加入適量的展開劑，密閉,一般保持1530分鐘27薄層色譜的展開:展開距離展開至規(guī)定距離（一般為815cin）薄屋旦譜的顯色:顯色與檢視1. 供試品含有可見光下有顏色的成分可直接在日 光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色 劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。2.有熒光 的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在 356nin紫外光燈下觀察熒光色譜。3.對于可見光 下無色，但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒 光劑的硅膠板（如GF254板），在254nin紫外光燈 下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)

7、形成的色譜薄層色譜中斑點(diǎn)的異常1、拖尾現(xiàn)象2、邊緣效應(yīng)3、S形及波形斑點(diǎn)4、念珠狀斑點(diǎn)5、斑點(diǎn)與對照品對不上6、其它29噠異常拖尾原因1. 點(diǎn)樣量過載2. 點(diǎn)樣圓點(diǎn)未重合3. 展開劑4. 薄層析5其他.;斑點(diǎn)異常與克服拖尾 1 點(diǎn)樣量過載任何吸附劑，它們的負(fù)載化合物的能力是 有一定限度的，因此點(diǎn)樣過量而超載后， 過剩的化合物被拋在后面，形成拖尾現(xiàn)象克服方法：A.點(diǎn)樣時(shí)可以點(diǎn)成條帶狀B.選用稍厚一點(diǎn)的板拖尾2.點(diǎn)樣圓心未重合樣點(diǎn)雖然在同一垂直線上但樣點(diǎn)上下圓心沒有重合，致使樣點(diǎn)呈近橢圓形，也是形成拖現(xiàn)象的原因之一克服方法：點(diǎn)樣位置要準(zhǔn)確，預(yù)先設(shè)計(jì)好點(diǎn)樣的位置，然后用鉛筆作好標(biāo)記，每次點(diǎn)樣對準(zhǔn)圓點(diǎn)

8、33斑點(diǎn)異常與克服35斑點(diǎn)異常與克服拖尾3展開劑的配制#斑點(diǎn)異常與克服拖尾 _ 4.薄層板為了提高樣品的分離度和減少斑點(diǎn)的拖尾，鋪板時(shí)在硅膠中加入某些酸（如硼酸，草酸），堿（如氫氧化鈉），鹽（如磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉）等將硅膠板改性克服方法：硅膠預(yù)制板可用浸板的辦法改性37斑點(diǎn)異常/1、點(diǎn)樣邊距2、薄層板3、展開劑未預(yù)飽和4、其他39z斑點(diǎn)異常與克服37#邊緣效應(yīng)1 點(diǎn)樣邊距#邊緣效應(yīng)斑點(diǎn)異常與克服2薄層板薄層板厚薄不均勻，兩邊厚或者兩邊薄都是形成邊邊緣效應(yīng)的原因之一克服方法：選用符合要求的薄層板。（符合要求 的薄層板應(yīng)該在反射光下板面平滑均勻，無氣泡, 灰塵或顆粒，透射光下薄層紋理均勻細(xì)膩）

9、39斑點(diǎn)異常與克服曲工M在薄層板上一般是邊緣上的展開劑較容易揮發(fā)，如果這幾個(gè)有機(jī)溶劑的揮發(fā)性能差異比較大，那么就會(huì)造成薄層板上邊緣和中間展開劑比例的差異而產(chǎn)生展開速度不一致的現(xiàn)象克服方法：展開前要充分飽和#斑點(diǎn)異常斑點(diǎn)異常S形及波形斑點(diǎn)S形斑點(diǎn)40斑點(diǎn)異常S形斑點(diǎn)是指含多咱成分的樣品層析時(shí)， 其斑點(diǎn)不是順次分布于原點(diǎn)至展開前沿的 垂直線上，而是呈S形分布于垂直線兩側(cè)。41斑點(diǎn)異常波形斑點(diǎn)：是指某些含多種成分的樣品液, 順次點(diǎn)于同一起始線上，展開后，這些成 分相同的斑點(diǎn)不吃不開直線狀平行于起始 線，而是呈波浪形。S形及( 呻生原因：多數(shù)是因?yàn)楸影搴癖〔粍颉?為避免上述現(xiàn)象的出現(xiàn)，應(yīng)選用厚薄均勻

10、 的薄層板< 丿念珠狀斑點(diǎn)是指化合物斑點(diǎn)之間距離小，相互連接呈念珠狀45斑點(diǎn)異常與克服念珠狀L產(chǎn)生原因及克服方法1. 樣品中成分過多，在下定長度的薄層板上，排布 不開，彼此重疊?？蛇m當(dāng)增加層析板長度，使斑點(diǎn) 距離加大或采用雙向?qū)游觯顾煞窒騼蓚€(gè)方向展開可以避免念珠狀斑點(diǎn)的岀現(xiàn)。2. 多次點(diǎn)樣時(shí)，點(diǎn)樣中心不重合，形成復(fù)斑。應(yīng)以 適當(dāng)濃度供試液一次點(diǎn)樣，若多次點(diǎn)樣，點(diǎn)樣中心、必須重合。.47斑點(diǎn)異常與克服斑點(diǎn)異常*Rf值不穩(wěn)定1溫度2濕度3. 手工制板溶劑質(zhì)量#斑點(diǎn)異常與克服 Rf值不穩(wěn)定）n溫濕度對薄層影響都 很大。不凍結(jié)的前提 下，通常溫度越低分 離越好，較難的分離 需在低溫下分離，

11、例 如人參皂昔。49斑點(diǎn)異常與克服:Rf值不穩(wěn)定n2.濕度此樣品適宜在較高相對濕度壞境卜展開氐嚴(yán)箱*即融片五二48斑點(diǎn)異常與克服49斑點(diǎn)異常與克服2.濕度#斑點(diǎn)異常與克服#斑點(diǎn)異常與克服滙度的影響，主要是影響薄層板的吸附 能力，導(dǎo)致選擇性（容量因子）的變化,濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸#斑點(diǎn)異常與克服#斑點(diǎn)異常與克服濕度的控制#斑點(diǎn)異常與克服#斑點(diǎn)異常與克服相對濕度(%)18所需硫酸濃度(V/V)硫酸（nnl）100+水（ml）95.5326&D1004257.01004750.01005839.51006534.01007227.51008S10.8100#斑點(diǎn)異常與克服51斑點(diǎn)異常與克服手工制板#斑點(diǎn)異常與克服#斑點(diǎn)異常與克服由于手工制的板的技巧不同，所制備的薄層板的質(zhì)量不同