蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選

1、蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選組別：第*組班級：生工*班組員：* 指導老師：*一、實驗目的學習從自然界中分離蛋白酶產(chǎn)生菌推薦精選二、實驗內(nèi)容蛋白酶產(chǎn)生菌的分離三、實驗原理許多細菌和霉菌產(chǎn)生蛋白酶，細菌中的芽孢桿菌是最常見的蛋白酶產(chǎn)生菌。本實驗將土壤樣品懸液加熱處理，殺死非芽孢細菌及其他微生物后進行劃線分離得到芽孢桿菌，將其接種到奶粉培養(yǎng)平板并進行培養(yǎng)，根據(jù)奶粉平板的水解圈做初篩。將初篩的蛋白酶產(chǎn)生菌接入產(chǎn)酶培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，測定蛋白酶的活力，最終得到產(chǎn)蛋白酶的芽孢桿菌。也可直接將細菌接種到奶粉培養(yǎng)平板進行培養(yǎng)，分離篩選其他蛋白酶產(chǎn)生菌。四、實驗材料和用具1.材料：土壤樣品2.試劑：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)及平板、奶

2、粉培養(yǎng)基平板、45mL無菌水（帶玻璃珠）、芽孢染色液、3.儀器及用具：紫外分光光度計、顯微鏡、恒溫水浴鍋、搖床、酒精燈、接種針、游標卡尺、無菌移液管、無菌試管、量筒、容量瓶、漏斗、試劑瓶、漏斗、載玻片、濾紙、擦鏡紙。五、操作步驟推薦精選（一） 配制所需培養(yǎng)基按照以下配方配制所需的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g，瓊脂 1.52.0g，水 100ml，pH 7.2 配制200mL奶粉培養(yǎng)基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，NaCl 0.5g，瓊脂 2.0g，水 100ml，pH 7.07.2脫脂奶粉 3g，配制200mL（二） 分離1.采集土壤樣品，用

3、無菌水植被1:10土壤懸液。2.取1:10土壤懸液5 mL，注入已滅過菌的試管中，將此試管放入7580水浴中熱處理10min以殺死非芽孢細菌。3.取加熱處理過的土壤懸液100200L，涂布接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)平板，后將平板倒置，于3032下培養(yǎng)2448h.4.對長出的單菌落進行編號，選擇表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少許菌苔涂片，做芽孢染色，判斷是否為芽孢桿菌。（三） 篩選1、從判定為芽孢桿菌的菌落處，分別挑取少許菌苔，先接種推薦精選奶粉斜面培養(yǎng)基，再轉(zhuǎn)接奶粉培養(yǎng)基平板上，3032下培養(yǎng)2448h。2、選擇水解圈直徑與菌落直徑比值大的菌，接入牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基30-32振蕩培養(yǎng)48小時，

4、將發(fā)酵液過濾或離心，取清夜檢測蛋白酶活力進行復篩。六、實驗結果：相關圖片：推薦精選推薦精選（2）菌株的分離根據(jù)菌落大小、形狀、表面光澤、隆起程度、透明程度、邊緣性狀和菌落顏色的差別，最終從培養(yǎng)基上篩選出23個菌落。（3）將分離到的菌株分別接種到含脫脂奶粉的培養(yǎng)基上，置于32培養(yǎng)60h，于室溫下觀察是否產(chǎn)生細胞外蛋白酶，分解培養(yǎng)基中的脫脂牛奶，進而產(chǎn)生肉眼可見的水解透明圈。結果表明，在接種的23株菌落中，共有18株產(chǎn)生胞外蛋白酶分解脫脂牛奶，形成肉眼可見的透明圈。從中篩選出9株水解圈與菌落直徑比值較大的菌株。如下表：菌株編號123456789比值+說明：“+”表示：水解圈與菌落直徑比值約為3：1，“+”表示：水解圈與菌落直徑推薦精選大于3：1.。六、結果分析在奶粉培養(yǎng)基平板上，蛋白質(zhì)被孢芽桿菌產(chǎn)生的蛋白酶水解，形成透明圈（見實驗相關圖片）。不同種類的微生物產(chǎn)生的蛋白酶的種類和活力各不相同，起對奶粉中蛋白質(zhì)的水解能力各不相同，所形成的水解圈與菌落大