血涂片紅細胞形態(tài)PPT課件

1、1.1.血涂片的制備血涂片的制備：手工推片法手工推片法：瑞氏染色法瑞氏染色法3.3.紅細胞的形態(tài)檢查紅細胞的形態(tài)檢查第1頁/共75頁 將血標(biāo)本均勻地涂抹在清潔干燥的載玻片上，經(jīng)染色后在顯微鏡下檢查，是血液細胞形態(tài)學(xué)檢查的基本方法，臨床應(yīng)用廣泛，特別是對于各種貧血及血液病的診斷和鑒別診斷具有重要價值。第2頁/共75頁1.1.新玻片上有新玻片上有游離堿質(zhì)游離堿質(zhì)，須清洗后使用。，須清洗后使用。3.3.使用時切勿用手觸及玻片表面。使用時切勿用手觸及玻片表面。2.2.用過的載玻片須用肥皂水或乙醇除去用過的載玻片須用肥皂水或乙醇除去 染料和油污。染料和油污。第3頁/共75頁手工推片法手工推片法灰白層涂片

2、法灰白層涂片法薄血涂片法薄血涂片法厚血涂片法厚血涂片法自動血液涂片法自動血液涂片法第4頁/共75頁手持玻片推制血膜推片用推片從血滴前方接觸血滴推片角度吸附血液成一線推完血片，迅速干燥手工薄血推片法手工薄血推片法第5頁/共75頁厚薄適宜，頭體尾分明，厚薄適宜，頭體尾分明，細胞分布均勻，邊緣整齊，細胞分布均勻，邊緣整齊，兩邊和兩端留有一定空隙。兩邊和兩端留有一定空隙。第6頁/共75頁血滴越大，推片角度越大，速度越快，血液粘度越高，則血膜越厚。血滴越小，推片角度越小，速度越慢，血液粘度越低，則血膜越薄。如果取血量較少，在推血片時應(yīng)如何才能使血膜如果取血量較少，在推血片時應(yīng)如何才能使血膜的厚薄合適？的

3、厚薄合適？對于嚴重貧血患者，應(yīng)如何推制血片？對于嚴重貧血患者，應(yīng)如何推制血片？第7頁/共75頁角度大, 速度快, 太厚, 太短推制適當(dāng)?shù)难ね破还饣拭钣昧Σ痪?，呈搓板狀血量過多，無尾玻片油膩，有空泡第8頁/共75頁1.1.灰白層涂片法灰白層涂片法抗凝血離心，取灰白層涂片?？鼓x心，取灰白層涂片。用于白細胞減少者的白細胞分類和紅斑用于白細胞減少者的白細胞分類和紅斑狼瘡細胞狼瘡細胞( (LEC)LEC)檢查。檢查。2.2.厚血涂片法厚血涂片法用于瘧原蟲用于瘧原蟲、微絲蚴的檢查微絲蚴的檢查第9頁/共75頁血涂片的染色 染色的目的是使細胞膜、細胞漿、胞漿中顆粒及細胞核等主要結(jié)構(gòu)染上特定的顏

4、色，以便于顯微鏡下觀察與識別。 第10頁/共75頁一、一、瑞氏染色法瑞氏染色法（Wrights stainWrights stain） 二、吉姆薩染色法（二、吉姆薩染色法（Giemsas stainGiemsas stain） 三、瑞氏三、瑞氏- -吉姆薩復(fù)合染色法吉姆薩復(fù)合染色法 對胞漿和中性顆粒染色較好對胞漿和中性顆粒染色較好，對胞核稍差。對胞核稍差。對胞漿和中性顆粒染色較差對胞漿和中性顆粒染色較差，對胞核和寄對胞核和寄生蟲著色較好。生蟲著色較好。取二者之長，染色效果好取二者之長，染色效果好。第11頁/共75頁瑞氏染色法染料：酸性染料伊紅和堿性染料美蘭（亞甲藍） 的復(fù)合染料。亞甲藍氧化為次

5、級染料天青。溶劑：甲醇。溶解 + 固定。磷酸鹽緩沖液（PBS）：第12頁/共75頁染色原理 1 .血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性物質(zhì)，與酸性伊紅結(jié)合染成粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)。2 .嗜堿性顆粒和淋巴細胞胞漿為酸性，與堿性美蘭結(jié)合，染成紫色或藍色，稱為嗜堿性物質(zhì)。3.中性顆粒呈等電點狀態(tài)與伊紅美蘭均可結(jié)合，染成紫紅色，稱為中性物質(zhì)。第13頁/共75頁pHpH對細胞染色的影響 在酸性環(huán)境中染色偏紅；在堿性環(huán)境中染色偏藍。因此要求用磷酸鹽緩沖液，使染色環(huán)境維持在之間，以達到滿意的染色效果。第14頁/共75頁1.1.用玻璃筆在血膜兩端劃線。用玻璃筆在血膜兩端劃線。，染染 1 1minmin。3.3.加等量

6、或稍多的緩沖液，混勻，加等量或稍多的緩沖液，混勻， 染染5 51 10min0min。4.4.流水沖去染液，干燥后鏡檢。流水沖去染液，干燥后鏡檢。第15頁/共75頁正常血膜外觀為淡紫紅色。正常血膜外觀為淡紫紅色。鏡下鏡下RBCRBC和嗜酸性顆粒染粉紅色，嗜堿和嗜酸性顆粒染粉紅色，嗜堿性顆粒染紫黑色，中性顆粒染淡紫紅性顆粒染紫黑色，中性顆粒染淡紫紅色，細胞核染紫紅色。色，細胞核染紫紅色。第16頁/共75頁5.5.若有染料殘渣，可用少量甲醇溶解，并立即若有染料殘渣，可用少量甲醇溶解，并立即 用流水沖洗。用流水沖洗。 1.1.血膜正面朝上，血膜正面朝上，干透后再染色。干透后再染色。 2.2.染色時間

7、與染液濃度、室溫和細胞多少有關(guān)。染色時間與染液濃度、室溫和細胞多少有關(guān)。 防止蒸發(fā)沉淀防止蒸發(fā)沉淀。 流水流水沖洗，沖洗時間不能太久。沖洗，沖洗時間不能太久。 6.6.復(fù)染時應(yīng)先加緩沖液再加染液，或加染液與復(fù)染時應(yīng)先加緩沖液再加染液，或加染液與 緩沖液的混合液緩沖液的混合液。 第17頁/共75頁1 1載玻片要清潔。載玻片要清潔。2 2制備良好的血涂片。制備良好的血涂片。3 3選擇抗凝劑。選擇抗凝劑。4 4處理白細胞濃度較低的標(biāo)本。處理白細胞濃度較低的標(biāo)本。5 5血細胞比容與涂片關(guān)系。血細胞比容與涂片關(guān)系。6 6新配置染液的處理。新配置染液的處理。7 7染色過深、過淺的處理。染色過深、過淺的處理

8、。第18頁/共75頁紅細胞形態(tài)檢查 在貧血或其他血液系統(tǒng)疾病時紅細胞除有數(shù)量變化外，往往伴有形態(tài)改變，表現(xiàn)在紅細胞大小、形狀、染色性質(zhì)和內(nèi)涵物的異常。因此，紅細胞形態(tài)檢查對貧血的診斷和鑒別診斷有重要的臨床價值。第19頁/共75頁 低倍鏡：低倍鏡： 油鏡：油鏡：制備血涂片制備血涂片染色染色鏡檢鏡檢檢查區(qū)域：檢查區(qū)域：體尾交界處，細胞分布均勻，體尾交界處，細胞分布均勻， 紅細胞緊密排列但不重疊。紅細胞緊密排列但不重疊。估計細胞分布和染色情況，瀏估計細胞分布和染色情況，瀏覽全片是否存在異常細胞。覽全片是否存在異常細胞。觀察紅細胞形態(tài)。觀察紅細胞形態(tài)。第20頁/共75頁正常紅細胞形態(tài) 雙凹圓盤形，淡桔

9、紅色，中央1/3為生理性淡染區(qū)，呈正常色素性。紅細胞直徑為，平均直徑左右，厚約2m。無核，胞質(zhì)內(nèi)無異常結(jié)構(gòu)。除健康人外，還見于急性失血、再生障礙性貧血和部分白血病。第21頁/共75頁正常紅細胞形態(tài)第22頁/共75頁異常紅細胞形態(tài)紅細胞大小異常紅細胞形狀異常 血紅蛋白充盈度與著色異常 紅細胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu) 紅細胞排列異常 有核紅細胞 第23頁/共75頁紅細胞大小異常1小紅細胞( microcyte )：直徑10m。最常見于缺乏葉酸和維生素B12所致的巨幼細胞性貧血（MA）。也可見于溶血性貧血（HA）、骨髓增生異常綜合癥（MDS）。3巨紅細胞(megalocyte)：直徑15m。常見于巨幼細胞性貧

10、血（MA）和骨髓增生異常綜合癥（MDS）。 第26頁/共75頁大紅細胞 巨紅細胞第27頁/共75頁紅細胞大小異常紅細胞大小異常4紅細胞大小不均(anisocytosis)：指紅細胞之間直徑相差一倍以上。見于嚴重的增生性貧血的血涂片中。巨幼細胞性貧血尤為明顯，與骨髓造血紊亂有關(guān)。 第28頁/共75頁紅細胞大小不均第29頁/共75頁紅細胞大小異常小紅細胞( microcyte )大紅細胞( macrocyte) 巨紅細胞(megalocyte)紅細胞大小不均(anisocytosis)第30頁/共75頁紅細胞形狀異常1球形紅細胞(spherocyte)：直徑小于正常，厚度增加大于2m。無中心淡染區(qū)

11、。常見于遺傳性球形紅細胞增多癥（HS）和伴有球形細胞增多的其他溶血性貧血如AIHA、HDN等。第31頁/共75頁球形紅細胞第32頁/共75頁紅細胞形狀異常2橢圓形紅細胞（elliptocyte）：細胞呈卵圓形、桿狀，長度可大于寬度34倍。這類紅細胞成熟后在高滲、等滲、低滲及正常血清內(nèi)，其橢圓形保持不變。常見于遺傳性橢圓形紅細胞增多癥（HE），可高達25%75%（正常人為1%）。也見于巨幼細胞貧血。 第33頁/共75頁橢圓形紅細胞第34頁/共75頁紅細胞形狀異常3靶形紅細胞（target cell）：紅細胞中心部位染色較深，其周圍為蒼白區(qū)域，而細胞邊緣又深染，形如射擊之靶。常見于各種低色素貧血（

12、主要是地中海貧血，珠蛋白生成障礙性貧血）。可能因HbA含量貧乏而又分布不均所致。應(yīng)注意與在血涂片制作中未及時固定而引起的改變相區(qū)別。 第35頁/共75頁靶形紅細胞第36頁/共75頁紅細胞形狀異常4口形紅細胞（stomatocyte）：紅細胞中央蒼白區(qū)呈扁平狀，頗似張開的嘴巴或魚口。血涂片中口形紅細胞增多，見于遺傳性口形紅細胞增多癥（HST），常10%。也可見于酒精中毒、小兒消化系統(tǒng)疾病引起的貧血等。第37頁/共75頁口形紅細胞第38頁/共75頁紅細胞形狀異常5鐮形紅細胞（sickle cell）：呈狹長形，形如鐮刀，兩端尖銳，正常情況下少見。主要見于HbS病，是由于紅細胞內(nèi)存在異常HbS所致。

13、在缺氧的情況下，異常HbS溶解度降低，形成狹長的結(jié)晶體，使紅細胞變形。第39頁/共75頁鐮形紅細胞第40頁/共75頁紅細胞形狀異常6棘形紅細胞（acanthocyte）：紅細胞表面有針狀或指狀突起，間距不規(guī)則，突起的長度和寬度可不一。在-脂蛋白缺乏癥病人的血涂片中出現(xiàn)較多。也可見于脾切除后、酒精中毒性肝臟疾病、尿毒癥、溶性性貧血及重金屬中毒。應(yīng)與皺縮紅細胞區(qū)別。第41頁/共75頁紅細胞形狀異常7皺縮紅細胞：也稱鈍鋸齒形紅細胞（echinocyte），主要由于高滲、制片不當(dāng)?shù)仍蛟斐桑t細胞周邊呈鈍鋸齒狀排列緊密，大小相等，長短一致。 第42頁/共75頁皺縮紅細胞第43頁/共75頁紅細胞形狀異常

14、8淚滴形紅細胞（tear drop cell）：形如淚滴或梨狀，正常人偶見。多見于骨髓纖維化。第44頁/共75頁淚滴形紅細胞第45頁/共75頁紅細胞形狀異常9裂片細胞（schistocyte）：為紅細胞碎片或不完整的紅細胞，系紅細胞通過管腔狹小的微血管受牽拉、擠壓所致。有各種形態(tài)如刺形、盔形、三角形及扭轉(zhuǎn)形等。正常人血片中裂片紅細胞2%。增多見于彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）、微血管病性溶血性貧血（MHA）。 第46頁/共75頁紅細胞形狀異常10紅細胞形態(tài)不整（poikilocyte）：指紅細胞形態(tài)發(fā)生無規(guī)律的明顯改變。如淚滴狀、梨形、棍棒形及新月形。最常見于具有巨幼細胞性貧血（MA）?？赡苁怯捎?/p>

15、貧血嚴重而造血原料不足，在骨髓內(nèi)粗制濫造所致。也可能是紅細胞脆性較大，在推片時碎裂所致 。第47頁/共75頁紅細胞形態(tài)不整第48頁/共75頁紅細胞形狀異常球形紅細胞橢圓形紅細胞靶形紅細胞口形紅細胞鐮形紅細胞棘形紅細胞皺縮紅細胞淚滴形紅細胞裂片細胞紅細胞形態(tài)不整第49頁/共75頁血紅蛋白充盈度與著色異常1.低色素性(hypochromic)：紅細胞的生理性中心淡染區(qū)擴大,染色淡薄，甚至為環(huán)形紅細胞，提示血紅蛋白含量明顯減少，常見于缺鐵性貧血（IDA）、珠蛋白合成障礙性貧血、鐵幼粒細胞性貧血（SA）和某些血紅蛋白病。 第50頁/共75頁低色素性(hypochromic)第51頁/共75頁血紅蛋白充

16、盈度與著色異常2高色素性（hyperchromic）：紅細胞的生理性中心淡染區(qū)消失，整個紅細胞著色較深，而且胞體也大，區(qū)別于球形紅細胞，MCH增高。最常見于巨幼紅細胞性貧血（MA）。 第52頁/共75頁高色素性（hyperchromic）第53頁/共75頁血紅蛋白充盈度與著色異常3嗜多色性（polychromic）：屬于尚未成熟的紅細胞，呈淡灰藍色或灰紅色，胞體大，相當(dāng)于活體染色的網(wǎng)織紅細胞。由于胞質(zhì)中含有多少不等嗜堿性物質(zhì)RNA與血紅蛋白并存，因此呈嗜多色性。嗜多色性紅細胞增多提示骨髓增生活躍，見于急性失血性貧血和溶血性貧血。 第54頁/共75頁嗜多色性（polychromic）第55頁/共

17、75頁血紅蛋白充盈度與著色異常4細胞著色不一（anisochromia）：紅細胞著色不一致，血紅蛋白充盈度偏離較大，如同時出現(xiàn)低色素性和正常色素性紅細胞，常見于鐵粒幼細胞性貧血（SA） 。第56頁/共75頁血紅蛋白充盈度與著色異常低色素性(hypochromic)高色素性（hyperchromic）細胞著色不一（anisochromia）嗜多色性（polychromic） 第57頁/共75頁紅細胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu) 1嗜堿性點彩紅細胞（basophilic stippling cell）：簡稱點彩紅細胞。在瑞氏染色條件下，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)嗜堿性灰藍色點狀物的紅細胞。屬于未完全紅細胞，其顆粒大小不一、數(shù)量

18、不等。重金屬中毒者增多，常作為鉛中毒的診斷篩選試驗。 第58頁/共75頁嗜堿性點彩紅細胞第59頁/共75頁紅細胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu) 2豪焦小體（howell-jollys body）：又稱染色質(zhì)小體。位于成熟或幼紅細胞的胞質(zhì)中，圓形，有12m大小，染成紫紅色，有1至多個，是核的殘余物。常見于巨幼細胞貧血、溶血性貧血、脾切除后和白血病。第60頁/共75頁豪焦小體第61頁/共75頁紅細胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu) 3卡波環(huán)（Cabot ring）：胞質(zhì)內(nèi)變性脂蛋白所致。位于成熟或幼稚紅細胞的胞質(zhì)中，呈圓形或8字形的細線圈狀結(jié)構(gòu)。見于脾切除后或巨幼細胞性貧血。常與豪周小體并存 。第62頁/共75頁卡波環(huán)第63頁/共75頁紅細胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu) 4寄生蟲。如瘧原蟲的環(huán)狀體。 第64頁/共75頁紅細胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu) 嗜堿性點彩紅細胞豪焦小體卡波環(huán)寄生蟲 第65頁/共75頁紅細胞排列異常 1紅細胞緡錢狀形成（rouleaux formation）：當(dāng)血漿纖維蛋白原和球蛋