治療性乙肝疫苗的研究現(xiàn)狀

1、治療性乙肝疫苗的研究現(xiàn)狀治療性疫苗是近年發(fā)展起來的免疫治療新概念，旨在打破機體的免疫耐受，提高機體特異性 免疫應(yīng)答，清除病原體或異常細(xì)胞，使疾病得以治愈。從發(fā)展趨勢來看，乙川:病毒治療性疫 苗將成為本世紀(jì)對慢性乙肝病毒感染特別是慢性乙肝病毒攜帯者治療研究領(lǐng)域的熱點，它與 現(xiàn)有抗乙肝病毒藥物的聯(lián)合應(yīng)用，將成為一種新的治療方法。治療性疫苗是近年發(fā)展起來的免疫治療新概念，旨在打破機體的免疫耐受，提高機體特異性 免疫應(yīng)答，清除病原體或界常細(xì)胞，使疾病得以治愈。治療性疫苗主耍應(yīng)用于病毒感染、腫 瘤等疾病的治療。治療性乙肝疫苗的應(yīng)用針對慢性乙肝患者或hbv攜帶者，通過不同途徑呈 遞乙肝抗原，打破機體的免疫

2、耐受，有效誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，達(dá)到清除乙肝病毒的目的。乙肝治 療性疫苗是治療慢性乙肝的重要措施，本文就其研究進展作一綜述。治療性疫苗分為三類：蛋白類疫苗、dna疫苗、細(xì)胞疫苗，其中蛋白類疫苗包括亞單位疫苗、 免疫復(fù)合物疫苗、多肽疫苗。1治療性疫苗的研制1.1蛋口類疫苗1. 1. 1亞單位疫苗 用于慢乙肝治療的亞單位蛋白疫茁是通過基因工程方法生產(chǎn)的重 組hbsag,包含hbv包膜蛋白的不同組分(prcsl、prcs2、s),并通過哺乳動物細(xì)胞及酵母 菌系統(tǒng)表達(dá)。研究表明，應(yīng)用pre s2/s疫ft (genhevac bro, pasteur merieux)或s疫 苗(recombivaxro, m

3、erck)対chb病人進行治療，證實亞單位疫苗能夠減低hbv的復(fù)制，但 療效仍有限。klj hepacare疫苗雖然有很強的免疫原性，能夠降低免疫耐受兒童血清中病毒 dna拷貝數(shù)，但不能有效清除肝細(xì)胞內(nèi)cccdna,治療效果仍不理想。1. 1. 2免疫復(fù)合物型疫苗(immunogenic complex, 1c)疫苗 復(fù)口人學(xué)醫(yī)學(xué)院聞玉梅等 構(gòu)建了 hbsag加人抗hbs免疫球蛋白作為免疫原性復(fù)合物型治療性疫苗，這種疫苗是通過 改變對hbsag的呈遞方式以誘生冇效的免疫，消除免疫耐受性?？贵w能對抗原的免疫原性 起到增強的作用，在于增加抗原被apc細(xì)胞捕獲并加工處理，進而激活抗原特異性淋巴細(xì) 胞

4、，誘導(dǎo)發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。應(yīng)用ic對慢性乙肝患者進行治療，結(jié)果表明，該ic不僅能打 破hbsag轉(zhuǎn)基因小鼠的耐受狀態(tài)，r激發(fā)nl型應(yīng)答(ifn 7及il 一 12分泌增加)，使血 清hbsag轉(zhuǎn)陰，初步顯示了抗原一抗體復(fù)合物(ic)的免疫治療作用。此類疫苗也存在不足， 即對細(xì)胞免疫應(yīng)答的激發(fā)遠(yuǎn)高于對體液免疫應(yīng)答的激發(fā)，因此需要進一步優(yōu)化。1.1.3多肽疫苗由于蛋口質(zhì)抗原不是通過完整的分子發(fā)揮作用的，抗原分子表位的研 究是近年來新的研究趨勢有效的保護収決于一組表位的組合與搭配。通過對蛋口質(zhì)抗原 的b細(xì)胞表位、th細(xì)胞表位、ctl細(xì)胞表位、nk細(xì)胞表位及mhc限制位等冇利于免疫識別 表位的深入研究，

5、為設(shè)計新一代高效、高特異性疫苗奠定了基礎(chǔ)。針對ctl表位的脂肽疫苗: 此種疫苗的理論基礎(chǔ)是基于抗原分子表位水平的研究。山于蛋白質(zhì)抗原通過表位來體現(xiàn)英免 疫特界性，有效的保護性免疫有賴于一組表位的搭配與組合。已知hbcag中的多肽18 27 是hla a2組織相容性抗原，可被ctl識別而產(chǎn)生免疫應(yīng)答。將其和th細(xì)胞多肽表位(破傷 風(fēng)類毒索的t細(xì)胞表位肽，tt830 843)以及脂質(zhì)分了共價結(jié)合后制成了 theradign hbv 疫苗，提高了 ctl多肽的免疫原性，不僅能打破慢性乙肝患者體內(nèi)t細(xì)胞耐受，激發(fā)特界性 及ctl應(yīng)答，并使受試者血清病毒dna轉(zhuǎn)陰或拷貝數(shù)降低。1.2核酸疫苗dna疫苗是

6、20世紀(jì)90年代出現(xiàn)的新的疫苗形式，是一種含抗原基因的表達(dá) 質(zhì)粒，誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答為主的免疫應(yīng)答，尤其是tcl應(yīng)答，在治療性疫苗硏究中占重要位 置。dna疫苗的制備包括：(1)編碼某種蛋白質(zhì)抗原的基因片段的擴增，包括hbsag. hbcag 和hbeag等基因均可作為目的基因;(2)插入真核細(xì)胞表達(dá)載體以構(gòu)建重組質(zhì)粒，可供插入目 的基因的載體包括逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載休和純化的裸dna載體。機體接種疫苗后，宿 主細(xì)胞攝取質(zhì)粒并表達(dá)抗原蛋白，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答。-般認(rèn)為，dna疫苗在體內(nèi)持續(xù)表達(dá)抗原并反復(fù)刺激免疫活性細(xì)胞，是其誘導(dǎo)強烈免疫應(yīng)答 的關(guān)鍵。研究表明,dna疫苗

7、可誘發(fā)以igg2a型抗體為主的體液應(yīng)答(iggl/igg2a<0. 3)和ctl 應(yīng)答，呈thl型應(yīng)答，抗體滴度高，維持時間長。此外，dna疫苗構(gòu)建簡單、制備方便，且 可采用多種方式接種，如肌注、口服和黏膜免疫等，并均能誘導(dǎo)thl極化。有報道指出，口 服接種prc/cmv hbs也能打破hbsag轉(zhuǎn)基因小鼠耐受狀態(tài)，激發(fā)thl型應(yīng)答，誘導(dǎo)高活性 ctls和高滴度igg2抗體，降低肝組織hbsag mrna及hbsag水平，表現(xiàn)出抑制肝細(xì)胞內(nèi)病毒 復(fù)制和清除病毒cccdna作用。mancini等用編碼pres2/s蛋白的垂組質(zhì)粒接種10例慢性乙型肝炎患者，結(jié)果，冇2例患者 的外周血單個核細(xì)

8、胞發(fā)牛了抗原特異性的t淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，并且抗hbv特異性的分泌 ifn-y的t細(xì)胞數(shù)目大幅度提髙;有5例患者血清hbv dna水平出現(xiàn)了暫吋性下降。他們隨 后設(shè)計了臨床i期試驗來評價表達(dá)hbsag和prcs2/s的dna疫苗的安全性、耐受性和免疫 原性，10例hbeag陽性的慢性乙型肝炎患者接受了 dna疫苗治療。結(jié)果，經(jīng)3次疫苗注 射后，所有患者耐受性良好，全部患者產(chǎn)牛了抗hbs特界性t細(xì)胞，50%的患者產(chǎn)生了抗 -pres2特異性t細(xì)胞。細(xì)胞疫苗(dc疫苗)hbv感染易于慢性化的機制冃前認(rèn)為是機體免疫細(xì)胞的功能缺陷及相關(guān)細(xì)胞因了分泌紊亂， 造成機體免疫功能低下，無法識別清除hbv,形成對

9、hbv的免疫耐受。有研究表明，樹突細(xì) 胞功能和數(shù)量低下是導(dǎo)致機體對hbv形成免疫耐受的一個重要原因。荷載hbv相關(guān)抗原的dc町能有效打破免疫耐受，恢復(fù)細(xì)胞免疫應(yīng)答和清除hbvo akbar等將 小鼠脾臟dc在體外擴增后荷載hbsag,制備dc疫茁;用該疫苗治療hbv轉(zhuǎn)基因小鼠，結(jié)果 發(fā)現(xiàn)，注射2次dc疫苗就能清除hbv轉(zhuǎn)基因小鼠循環(huán)hbsag,并產(chǎn)?？?hbs。miller等采 用鴨坯胎成纖維細(xì)胞(primary duck embryonic fibroblasts, pdef),經(jīng)鴨乙型月十炎病毒核 心抗原(dilbcag)的dna質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，制備了一種全細(xì)胞疫苗，可持續(xù)表達(dá)dilbcag。研

10、究指出， pdef - dilbcag全細(xì)胞疫苗對diibv的感染沒有預(yù)防作用，但對d11bv感染后的持續(xù)化有預(yù)防 作用；說明接種pdef - dhbcag全細(xì)胞疫茁能激發(fā)有效的免疫丿應(yīng)答并導(dǎo)致dhbv感染的快速清 除。3結(jié)語乙型肝炎是山乙肝病壽引起的疾病，主要危害在于感染后變?yōu)槁愿窝谆虿《緮y帶者, 對此類患者目前尚缺乏有效的治療方法，故常導(dǎo)致患者病情遷延不愈，部分患者發(fā)展為肝硬 化甚至肝癌(hcc) o乙肝治療性疫苗具有費用低、安全、療效好等的特點，從發(fā)展趨勢來看, 乙肝治療性疫苗將成為木世紀(jì)對慢性hbv攜帶者治療研究領(lǐng)域的熱點。但是這些新型乙肝疫 苗大多處于研究階段，雖各有優(yōu)點，但也存在一些問題。如dn