HPV臨床常用檢測(cè)方法

1、精品文檔由于HPV不能在體外細(xì)胞培養(yǎng)，故不能用簡(jiǎn)便的血清血檢測(cè)進(jìn)行 HPV的診斷和分型。臨床上 用于檢測(cè) HPV的方法包括細(xì)胞學(xué)方法、免疫組化、原位雜交、斑點(diǎn)雜交、核酸印跡和PCR等，其中以PCR方法的敏感性最高，是目前應(yīng)用最多感染的HPV型別、含量、持續(xù)時(shí)間決定病變的發(fā)展與預(yù)后，是進(jìn)行HPV檢測(cè)的主要內(nèi)容。目前主要是通過應(yīng)用分子生物學(xué)方法進(jìn)行HPV DNA勺檢測(cè)。1、現(xiàn)有的HPV驗(yàn)室主要檢測(cè)手段： 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR, Polymerase Chain Reaction):擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA斷的方法。該法有較高的敏感度，可進(jìn)行HP/型，缺點(diǎn)是對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求較高，容易發(fā)生樣本

2、間的交叉污染，從而導(dǎo)致假陽性率高。核酸雜交檢測(cè)有較好的特異性和敏感度，還可以進(jìn)行HPVDNA勺分型，各種核酸雜交檢測(cè)方法有一定的 優(yōu)缺點(diǎn)。A核酸印跡原位雜交適用于HPV分型和HPV DN心子量鑒定，雖然靈敏度高，但因操作復(fù)雜，需要新鮮組織標(biāo) 本，不便在臨床上大規(guī)模使用。B斑點(diǎn)印跡其敏感度和特異性均低于核酸印跡原位雜交法，雖然經(jīng)濟(jì)實(shí)用，但實(shí)驗(yàn)過程存在有放射性污染，是環(huán)保所不能輕視的問題。C原位雜交(in situ hybridization , 一種核酸雜交技術(shù)，可用來測(cè)定基因或特定核 甘酸序列在核酸分子的所在部位，檢測(cè)重組體DNA通過非放射性探針對(duì)石蠟組織進(jìn)行檢測(cè)，能作定位檢測(cè)，假陽性率低，但

3、靈敏度不高，大大降低了臨床使用價(jià)值。D雜交捕獲法(Hybrid Capture)雜交捕獲試驗(yàn)是利用化學(xué)發(fā)光對(duì)抗體捕獲的信號(hào)加以放大。首先使DNAM鏈釋放并分解成為可以雜交的核甘酸單鏈 ，DNA單鏈與RNAa合探針結(jié)合為 RNA-DN原合體，特異性抗體將 RNA-DN媒合體捕獲，偶聯(lián)有堿性磷酸酶的第二抗體與 RNA-DN原合體結(jié)合，堿性磷酸酶使酶 底物發(fā)光，根據(jù)光的強(qiáng)弱可確定堿性磷酸酶的含量 ，從而確定RNA-DNA合體的含量。能檢測(cè) 13 種高危型 HPV,包括 HPV16 18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。各種檢測(cè)方法的比較各種檢測(cè)方法的比較方法學(xué)靈敏度

4、特異性技術(shù)特點(diǎn)細(xì)胞學(xué)(Cytology )低低操作容易，成本較低，準(zhǔn)確度較差斑點(diǎn)印跡（Dot blot ）中中有一定放射性核酸印跡原位雜交(southernblothybridization )高高標(biāo)準(zhǔn)、麻煩，不宜大規(guī)模使用原位雜交(In Situhybridization )高中蠟塊組織包埋內(nèi)檢測(cè) HPV雜交捕獲（HC HC2高中無放射性，易使用，高、低危型間有交叉反應(yīng)，且不能分型普通多聚酶鏈反應(yīng)（PCR很高中取材容易，但目前已應(yīng)用試劑的只能檢測(cè)少數(shù)單一型別，如6、11、18等，且由于技術(shù)上的問題存在假陽性2、最新推出的HPV的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)高靈敏度高危型HPV分型多色熒光實(shí)時(shí) PCR式劑：

5、為歐洲著名分子生物學(xué)研究機(jī)構(gòu)專門針對(duì)宮頸癌篩查而全新設(shè)計(jì)的高危型HP/型多色熒光實(shí)時(shí) PCR僉測(cè)試劑，可同時(shí)檢測(cè)高危型中最主要的16、18、31/33、35/45型。了解宮頸疾病人乳頭狀瘤病毒（ HPV ）感染患者中 HPV亞型分布情況及高危型 HPV的年 齡分布。方法采用專利Invader酶切信號(hào)放大法，利用Cervista HPV HR Cervisat 核酸雜交基因分型試劑檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞HPV的14個(gè)亞型DNA。HPV型組亞型J備注A5/A651, 56, 66A718, 39, 45, 59, 68A916, 31, 33, 35, 52, 58精品文檔1.3 HFV DMA *因分

6、型檢費(fèi)HybriMstx聯(lián)用棱酸分子雜交儀，口NA攝取忒 劑盒和人乳頭狀短痛毒核酸分子快速雜交易因分型 試劑需（HyhriMRK.美國(guó)專利6020187 ）均為凱普 生物科技有限公司產(chǎn)品口果田低密度基因芯片和導(dǎo) 流雜交技術(shù)（dflw-th«xii hyfcridizaiion）應(yīng)用墓核 甘酸探針雜交.口I檢出13種高危亞型（HPV 1隊(duì) 以 31, 33、35v 3g. 45、51、52、56, 58, 59、 68）. 5 種低危亞型（HPV6. LU 42、43 和 44） 及中國(guó)人特有的高危亞型（CW304, 53、66）fl具 體步膜如下：利用凱普生物化學(xué)科技公司的基 因里抽

7、提試劑盒提取樣本DNA.FTC-200 （ MJ 曲h） PCR擴(kuò)增.反應(yīng)體系25皿，條件為95 T9 min, 95 T： 20 s, 5530 ar 72 12 M .r 擴(kuò)增 40個(gè)循環(huán)，72 f延伸5 min中45七預(yù)熱后.在 HybriMaj醫(yī)用核酸分子快速雜交儀平臺(tái)上放入標(biāo) 記有21種HPV幫因型寡核昔酸探針的低密度基因 芯片，將外增產(chǎn)物置93 X：變性5 mM.冰浴2 min, 加入檢測(cè)孔內(nèi)透行10 min的界流雜交I場(chǎng)標(biāo)用 色：加入封阻液封閉為反應(yīng)的空白微扎，酶標(biāo)顯色 后觀察檢測(cè)結(jié)果，陽性點(diǎn)呈現(xiàn)盤紫色圓點(diǎn)，多個(gè)圓 點(diǎn)陽性即為多重感染.每張芯片上有PCR反應(yīng)質(zhì) 控點(diǎn)和柒交顯色質(zhì)控

8、點(diǎn)各I個(gè)。HPV基因分型檢測(cè)試劑盒（PCR-反向點(diǎn)雜交法）【產(chǎn)品用途】對(duì)人乳頭瘤病毒（HPV）的感染情況進(jìn)行定性檢測(cè)并加以分型，能夠檢測(cè)23種HPV基因型，直接提示感染HPV的基因型；包括18種高危和5種低危型，可用于臨床 HPV感染的輔助診斷?！井a(chǎn)品優(yōu)勢(shì)】1 .精確分型：能同時(shí)對(duì) 23種HPV基因型進(jìn)行精確分型，包括 18種高危型和5種地位型；2 .效率高：?jiǎn)未螜z測(cè)標(biāo)本數(shù)量可達(dá) 96份；3 .性能好：特異性強(qiáng)、重復(fù)性好，均高于 98% ;4 .設(shè)備通用：如普通 PCR儀和雜交儀，適應(yīng)于大、中、小型實(shí)驗(yàn)室；5 .內(nèi)部質(zhì)控：具有真正意義上的內(nèi)部質(zhì)控，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確；6 .可以檢測(cè)多種臨床標(biāo)本?！炯夹g(shù)方法】采用 PCR 和反向點(diǎn)雜交法相結(jié)合的基因芯片技術(shù)【檢測(cè)原理】通過檢測(cè)雜交將大量不同序列的探針分子固定于支持物的不同位置上，然后與已做標(biāo)記的樣本進(jìn)行雜交，信號(hào)的強(qiáng)度和分布來進(jìn)行分析。【檢測(cè)標(biāo)本】