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1、半數(shù)致死量的測定半數(shù)致死量的測定預(yù)防獸醫(yī)學(xué) 弓建芳1309064006半數(shù)致死量LD50是藥物、毒物及病原微生物等毒力水平的一個標(biāo)志。它表示使全部實驗對象有一半死亡所需的藥物劑量或濃度。測定LD50的方法很多,如目測機(jī)率單位法、寇氏法、直線回歸法、累計法及序貫法等。一、一、寇氏法寇氏法(Karbers method)寇氏法在實際工作中較常用,計算簡便,結(jié)果較準(zhǔn)確?!緱l件】 1.劑量必須按等比級數(shù)(劑量對數(shù)按等級數(shù))分組。 2.各組動物數(shù)應(yīng)相等。 3.“反應(yīng)”應(yīng)大致呈正態(tài)分布。最小劑量組的死亡率(Pn)應(yīng)為0%,最大劑量組的死亡率(Pm)應(yīng)為 100%;如果Pn80%用校正公式計算;如Pn20%

2、或Pm80% 用此法計算結(jié)果不太準(zhǔn)確。校正公式:lg LD50XKd)43(PnPmP計算步驟計算步驟1、計算lgLD50公式為 lgLD50= (Xi+Xi+1)(Pi+1Pi) i組號;(Xi+Xi+1)相鄰兩組對數(shù)劑量之和(Pi+1Pi)相鄰的兩組死亡率之差21簡化公式簡化公式若相鄰對數(shù)劑量是等差級數(shù)即藥物劑量是等比級數(shù)則公式為lgLD50=Xk d/2(Pi+Pi+1)Xk :最大對數(shù)劑量d:相鄰兩組對數(shù)劑量之差,即相鄰劑量比值的對數(shù)也可以直接按照前面的校正公式計算計算步驟計算步驟 2、求lgLD50的反對數(shù)LD503、求lgLD50的標(biāo)準(zhǔn)誤SlgLD50 SlgLD50=d4、求lg

3、LD50的95%的置信區(qū)間 Ig-1(lgLD50 1.96SlgLD50)niPiPi)1(例題例題 為了研究銨碘消毒劑對建鯉毒力的影響,隨機(jī)撈取210尾規(guī)格基本一致的鯉魚,放入缸內(nèi),每缸30尾,1組對照,6組處理。以等對數(shù)間距設(shè)置6個劑量水平(單位ml/m3),量取藥液并加入缸內(nèi),攪拌均勻,96小時后得如下表中結(jié)果。試求銨碘對建鯉的半數(shù)致死量。不同劑量銨碘對建鯉的致死資料不同劑量銨碘對建鯉的致死資料 組別組別劑量劑量動物數(shù)動物數(shù)死亡數(shù)死亡數(shù)死亡率死亡率140.0003000.000247.1563030.100355.59230150.500465.53830200.667577.2623

4、0270.900691.08530301.000解題步驟解題步驟1、計算lgLD50lgLD50=Xk d/2(Pi+Pi+1) =lg91.085 lg =1.76882、LD50=Ig-1(lgLD50)=58.7223、 SlgLD50=0.0714 =0.01054、LD5095%的置信區(qū)間 Ig-1(lgLD50 1.96SlgLD50)=Ig-1(1.7688 1.96x0.0105)3001.309 . 01 . 0301021000.40156.47(0+0.1+.+0.9+1)計算結(jié)果計算結(jié)果銨碘消毒劑對建鯉的半數(shù)致死量在95%的置信區(qū)間為:56.079ml/m361.572

5、ml/m3。即銨碘消毒劑使一半建鯉死亡的平均劑量最小為56.079ml/m3最大為61.572ml/m3,做出這一推斷的置信度為95%。計算結(jié)果計算結(jié)果LD5099%的置信區(qū)間 Ig-1(lgLD50 2.58SlgLD50)=Ig-1(1.7688 2.58x0.0105)銨碘消毒劑對建鯉的半數(shù)致死量在99%的置信區(qū)間為:55.171ml/m362.501ml/m3。即銨碘消毒劑使一半建鯉死亡的平均劑量最小為55.171ml/m3最大為62.501ml/m3,做出這一推斷的置信度為99%。公式推導(dǎo)公式推導(dǎo)o 由圖可知:矩形AFEDAFADlg LD501lg LD50=XK-d/2(Pi+P

6、i+1)=XK-d/2 (P1+P2+P2+P3.+Pi+1)=XK-d/2 【2P(P1+Pi+1)】=XK-d(P0.5) 二、序貫法二、序貫法最節(jié)省實驗動物的方法,又稱“上下法”,適于反應(yīng)快速的藥物實驗,但不能估計誤差,無法進(jìn)行LD50的顯著性檢驗。方法:1、根據(jù)經(jīng)驗選擇一個近50%反應(yīng)率的等比級數(shù)劑量組,通常用4-6個劑量組;2、給動物注射,當(dāng)前一只動物出現(xiàn)陰性反應(yīng)時,就選用較高一級的劑量給予下一只動物;當(dāng)出現(xiàn)陽性反應(yīng)時,就給下一只動物較低一級的劑量,直到實驗結(jié)束;3、計算各劑量動物總數(shù)n與劑量對數(shù)x的乘積之和(nx );4、計算lgLD50=(nx)/n ;5、取反對數(shù)得到LD50

7、。 特別注意特別注意o 后一動物劑量上升或下降由由前一動物的死亡或存活決定,從第一只改變算起到最后一只止,最后的終止號也作為一次實驗結(jié)果。o 若最后一只動物死亡,下降一格畫“x”,以存活計數(shù);若最后用一只動物存活,上升一格畫“x”,以死亡計數(shù)。例題例題為測定某試劑的安全性,用序貫法測定此試劑小白鼠腹腔注射的LD50(mg/kg),選用1月齡小白鼠22只,給藥的對數(shù)劑量應(yīng)從估計最可能接近LD50的劑量開始,本例從1.85開始,死亡記為“+”號,存活記為“-”號。測定結(jié)果測定結(jié)果某試劑的某試劑的LD50值測定結(jié)果對數(shù)劑量對數(shù)劑量1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 111213141516171819202122231.95+1.90+-+1.85+-+-+1.80-+-+-+1.75-x整理與計算整理與計算 對數(shù)劑量對數(shù)劑量x死亡死亡存活存活合計合計n1.951011.902131.856281.803581.75

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