放線菌形態(tài)的觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、.山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2017年 11月 13日_目：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)題 目： 放線菌的形態(tài)觀察姓 名：丁志康一、 目的要求? 1. 學(xué)習(xí)并初步掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法。? 2. 初步了解放線菌的形態(tài)特征。二、 基本原理放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類 革蘭氏陽性菌 。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長的 基內(nèi)菌絲（簡稱“基絲”），基絲生長到一定階段還能像空氣中生長出 氣生菌絲 （簡稱 “氣絲”），并進(jìn)一步分化產(chǎn)生 孢子絲及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基絲而無氣絲。在顯微鏡下直接觀察時(shí)，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺

2、旋形或輪生。在油鏡下觀察，放線菌的孢子有球形、橢圓、桿狀或柱狀。能否產(chǎn)生菌絲體及由菌絲體分化產(chǎn)生的各種形態(tài)特征是放線菌分類鑒定的重要依據(jù)。為了觀察放線菌的形態(tài)特征， 人們?cè)O(shè)計(jì)了各種培養(yǎng)和觀察方法， 這些方法的主要目的是為了盡可能保持住放線菌自然生長狀態(tài)下的形態(tài)特征。本試驗(yàn)介紹其中幾種常用方法。1. 插片法： 將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻片上。觀察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長期的形態(tài)。2. 玻璃紙法： 玻璃紙是一種透明的半透膜，將滅菌的玻璃紙

3、覆蓋在瓊脂平板表面，然后將放線菌接種于玻璃紙上，經(jīng)培養(yǎng)，放線菌在玻璃紙上生長形成菌苔。觀察時(shí)，揭下玻璃紙，固定在載玻片上直接鏡檢。這種方法既能保持放線菌的自然生長狀態(tài)，也便于觀察不同生長期的形態(tài)特征。3. 印片法： 將要觀察的放線菌的菌落或菌苔， 先印在載玻片上，經(jīng)染色后觀察。這種方法主要用于觀察孢子絲的形態(tài)、孢子的排列及其形狀等。方法簡便、但形態(tài)特征可能有所改變。（ * 本次試驗(yàn)采用插片法）三、器材1、菌種： 青色鏈霉菌，弗氏鏈霉菌。2、培養(yǎng)基：高氏 I 號(hào)培養(yǎng)基。3、儀器及其他用具： 經(jīng)滅菌的平皿、 玻璃紙、蓋玻片、玻璃涂棒，以及載玻片， 接種環(huán)，接種鏟，石碳酸復(fù)紅染液，顯微鏡等。四、操作

4、步驟a) 倒平板：取融化并冷卻至大約 50的高氏號(hào)瓊脂約 20mL 倒平板，凝固待用b) 接種：用接種環(huán)挑取菌種斜面培養(yǎng)物（孢子）在瓊脂平板上劃線接種c) 插片：以無菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以大約 45°角插入瓊脂內(nèi)（插在接種線上） ，插片數(shù)量可根據(jù)需要而定。d) 培養(yǎng)：將插片平板倒置， 28培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)觀察的目的而定，通常 35d。1 / 2.e) 鏡檢：用鑷子小心拔出蓋玻片，擦去背面培養(yǎng)物，然后將有菌的一面朝上放在載玻片上，直接鏡檢。（ * 觀察時(shí)，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當(dāng)視野，再換高倍鏡觀察；若要用油鏡觀察，需將有菌的一面朝下，并用膠紙將蓋玻片固定在載玻片上再觀

5、察 ）五、 觀察結(jié)果1、實(shí)驗(yàn)照片1、試比較三種培養(yǎng)和觀察放線菌方法的優(yōu)缺點(diǎn)。答：插片法的操作最為簡便，且可以看到菌體在不同的時(shí)期菌絲的形態(tài)特產(chǎn)，一次性插入的玻片數(shù)可多至六七片，可供觀察的次數(shù)較多；玻璃紙法也可以看到菌體不同生長時(shí)期的形態(tài)特征，但不方便分次取出觀察，通常只能整張紙取出觀察，次數(shù)較少；印片法可用于觀察放線菌的孢子和孢子絲，且方便染色，染色之后觀察也更加清晰，但是看到的孢子絲常常為斷裂狀態(tài)，并不是原生狀態(tài)，也很難觀察到氣絲和基絲。2、玻璃紙培養(yǎng)和觀察法是否還可用于其他類群微生物的培養(yǎng)和觀察？為什么？答：可以。因?yàn)椴ＡЪ埵且环N對(duì)于生物沒有毒害作用的半透膜，將它貼在培養(yǎng)基上后營養(yǎng)物質(zhì)可以通過玻璃紙讓生長在其上的微生物吸收成長，所以玻璃紙法廣泛應(yīng)用于多種放線菌和霉菌的培養(yǎng)與觀察。3、鏡檢時(shí)，你如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲？答：看顏色，氣絲的顏色較暗，而基絲比較透明；看位置，基絲通常分布在蓋玻片插入端的下部，而氣絲則在插入端的上部；看形態(tài)，基絲通常分支更多，往往不斷分支并與其他基絲纏繞呈網(wǎng)狀，而氣絲分支數(shù)更少，兩個(gè)分支間的菌絲長度更長，看上去也比基絲更稀疏。七、 培養(yǎng)基的配制可溶性淀粉20g硝酸鉀晶體1g氯化鈉晶體0.5g磷酸氫二鉀粉末0.5g硫酸鎂晶體0.5g硫酸亞鐵晶體0.01g瓊脂粉末20g水1