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1、.內(nèi)蒙古民族大學(xué)本科畢業(yè)論文編號(hào):119070241015本 科 畢 業(yè) 論 文 題 目:高粱葉枯病的室內(nèi)毒力測(cè)定 學(xué) 院: 農(nóng)學(xué)院 專 業(yè): 植物保護(hù) 年級(jí): 2011 級(jí) 姓 名: 趙海龍 指導(dǎo)教師: 趙艷琴 完成日期: 2015年5月 ;內(nèi)蒙古民族大學(xué)本科畢業(yè)論文目 錄 摘要1ABSTRACT2引言31 材料和方法31.1 供試材料31.2 室內(nèi)藥劑篩選及配制41.3 試驗(yàn)方法52 結(jié)果與分析62.1 單劑抑制率的測(cè)定62.2 孢子抑制率及其顯著性分析82.3 毒力回歸方程的計(jì)算113 結(jié)論與討論12參考文獻(xiàn)13致謝14摘 要高粱葉枯病是高粱上一種真菌病害,本文主要是以高粱葉枯病為材料,
2、采用生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)抑制法對(duì)常用的五種殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定,結(jié)果表明:對(duì)于高粱葉枯2號(hào)菌株,50%異菌脲500倍液0.01和0.05顯著水平下,該病菌的生長(zhǎng)速率均為最低,孢子抑制率最高,菌落生長(zhǎng)抑制率最高,是該病菌的有效防治藥劑,而在50%嘧菌酯400倍液和3%中生菌素在0.01顯著水平下下生長(zhǎng)速率最高,菌落生長(zhǎng)抑制率最低,孢子抑制率最低,對(duì)于防治該病并無(wú)明顯效果;對(duì)于高粱葉枯4號(hào)菌株,50%異菌脲500倍液0.01和0.05顯著水平下該病菌的生長(zhǎng)速率最低,孢子抑制率最高,菌落生長(zhǎng)抑制率最高,是防治該病菌的有效藥劑,而在50%嘧菌酯400倍液和800倍液下該菌株表現(xiàn)出生長(zhǎng)促進(jìn)作用。關(guān)鍵詞
3、:高粱葉枯?。粴⒕鷦?;毒力測(cè)定;萌發(fā)抑制率AbstractSorghum leaf blight is a new kind of fungi diseases on sorghum。This paper is based on sorghum leaf blight materials using the growth rate and spore germination inhibition method to measurement the five common fungicides indoor toxicity。The results show that:For the sorgh
4、um leaf blight No.2 strain,the Iprodione 50% w.p. 500 times liquid under the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the lowest growth rate and the best inhibitory effect which is an effective control of the germs。But under the Azoxystrobin 50% w.p. 400 times liquid and the Zhongshengmycin 3% w
5、.p. liquid of the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the highest growth rate and the lowest colony growth inhibition rate。For the sorghum leaf blight No.4 strain, the Iprodione 50% w.p. 500 times liquid of the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the lowest growth rate and the best
6、 inhibitory effect which is an effective control of the germs。But under the Azoxystrobin 50% w.p. 400 times and 800 times liquid of the significant level of 0.01 and 0.05,the strain showed growth promoting effect。Key Words:sorghum leaf blight;fungicide;toxicity measurement;germination inhibition rat
7、e引 言高粱屬禾本科一年生草本植物,又名蜀黍、秫秫、蘆粟、茭子、木稷等,高粱是釀酒的重要原料,瀘州特曲、茅臺(tái)、竹葉青等名酒都是以高粱為主要原料釀造的【1】。高粱在中國(guó)的栽培面積很廣,其中山西地區(qū)是高粱的主產(chǎn)量區(qū),在內(nèi)蒙地區(qū),高粱的的產(chǎn)量也占有很大的比重。隨著高粱大面積的種植,一方面,高粱病害的蔓延也逐漸增長(zhǎng)。據(jù)統(tǒng)計(jì),目前高粱病害種類高達(dá)30多種,其主要為害以黑穗病,葉斑病,炭疽病和大斑病為主【2】,高粱散黑穗病在我國(guó)各高粱產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)病,在華北、東北發(fā)病較重,近幾年來(lái)嚴(yán)重影響高粱產(chǎn)量【3】。另一方面,高粱上的新病害也逐步增多,高粱葉枯病在一些地區(qū)也被發(fā)現(xiàn)。高粱葉枯病是由細(xì)極鏈格孢(Alterna
8、ria tenuissima)引起的真菌性病害,屬于半知菌亞門半知菌綱鏈孢霉目黑霉科鏈格孢屬,鏈格孢屬是全球分布最廣,經(jīng)濟(jì)上重要的半知菌類真菌之一,其有性態(tài)在自然條件下難以見(jiàn)到,僅有十余種鏈格孢的有性態(tài)在實(shí)驗(yàn)室條件下被發(fā)現(xiàn);其菌絲黑色,大量存在于土壤、空氣和作為培養(yǎng)料的各種有機(jī)質(zhì)上,其孢子通過(guò)空氣傳播【4】。由鏈格孢引起的病害一般都屬于流行性較強(qiáng)的病害。高粱葉枯病主要危害的是高粱的葉片,影響其光合作用,從而使高粱產(chǎn)量降低。在發(fā)病初期,高粱葉片上形成梭形斑,上面長(zhǎng)有白色柱狀霉層,由于濕度的增大,在后發(fā)病期病斑的邊緣出現(xiàn)黃褐色輪紋。高粱葉枯病是高粱上一種新的病害,目前還沒(méi)有特效的防治藥劑,對(duì)此,本
9、文采用菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子抑制率法對(duì)五種殺菌劑對(duì)于高粱葉枯病菌的室內(nèi)毒力進(jìn)行研究,篩選出防治該病害有效藥劑,用來(lái)指導(dǎo)田間生產(chǎn),從而提高產(chǎn)量,增加經(jīng)濟(jì)效益。1 材料和方法 1.1 供試材料1.1.1 供試菌種采集于內(nèi)蒙古通遼市內(nèi)蒙古民族大學(xué)農(nóng)學(xué)院試驗(yàn)田,進(jìn)行分離純化【5】獲得兩個(gè)菌種:高粱葉枯2號(hào)菌種和高粱葉枯4號(hào)菌種,并保存于冷藏箱備用。1.1.2 供試藥劑及有效成分編 號(hào)藥劑名稱有效成分劑型防治對(duì)象生產(chǎn)廠家1異菌脲50%可濕性粉劑小麥赤霉病海南正業(yè)中農(nóng)高科技股份有限公司2多菌靈50%可濕性粉劑水果蔬菜等多種病害利民化工3烯酰·福美雙55%水分散粒劑霜霉病青島瀚生科技4中生菌素3%可
10、濕性粉劑辣椒疫病利民化工5嘧菌酯50%可濕性粉劑黃瓜枯萎病陜西美邦農(nóng)藥1.1.3 培養(yǎng)基制備原料 本試驗(yàn)均采用PDA培養(yǎng)基進(jìn)行接種培養(yǎng),培養(yǎng)基配制原料包括馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂20g和蒸餾水1000ml。1.1.4 試驗(yàn)主要儀器設(shè)備超凈工作臺(tái),LRHS-250B恒溫恒濕培養(yǎng)箱(上海賀德實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司),立鶴牌電熱恒溫培養(yǎng)箱(山東濰坊醫(yī)療器械廠),101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(江蘇省通州市通用科技儀器廠),萬(wàn)分之一電子天平(上海精密科學(xué)儀器公司),電子顯微鏡( 日本尼康公司),高壓滅菌鍋(上海三申),酒精燈,培養(yǎng)皿,移液管,接種環(huán),打孔器,直尺,錐形瓶,燒杯,攪拌棒,電磁爐,鑷子等。1.
11、2 試驗(yàn)室內(nèi)藥劑梯度調(diào)節(jié)及培養(yǎng)基的配制1.2.1 PDA培養(yǎng)基的制備按照PDA培養(yǎng)基的制備配方,配制1000ml培養(yǎng)基五組,每組分裝至3個(gè)三角瓶中,封裝完畢后,用高壓滅菌鍋121滅菌30min后取出冷卻備用。1.2.2 藥劑梯度調(diào)節(jié)及配制方案本試驗(yàn)的每個(gè)藥劑均設(shè)定五個(gè)梯度,一個(gè)對(duì)照,每個(gè)梯度三次重復(fù)。具體配制為:50%異菌脲可濕性粉劑配制500倍母液,配制成500、1000、1500、2000、2500倍液;50%多菌靈可濕性粉劑配制400倍母液,配制成400、600、800、1000、1200倍液;55%烯酰·福美雙水分散粒劑配制400倍母液,配成400、800、1000、1200
12、、1600倍液;3%中生菌素可濕性粉劑配制成400倍母液,配制成400、600、800、1000、1200倍液;50%嘧菌酯可濕性粉劑配制400倍母液,配成400、800、1000、1200、1600倍液。1.3 試驗(yàn)方法1.3.1 生長(zhǎng)速率法本試驗(yàn)需在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行,因此在實(shí)驗(yàn)前需要對(duì)無(wú)菌工作室和超凈工作臺(tái)進(jìn)行30min左右的紫光燈滅菌,確保將空氣中的雜菌降到最低。并且試驗(yàn)所用的培養(yǎng)皿和其他儀器都要放進(jìn)干熱滅菌箱165滅菌1h,冷卻后取出備用。首先將之前配制的培養(yǎng)基水浴加熱溶解,加入少許的抗生素后冷卻備用。在無(wú)菌條件下,將上述配置好的藥劑取1ml放入9ml冷卻至約50的PDA培養(yǎng)基中混合均
13、勻,倒入消毒滅菌的培養(yǎng)皿中制成帶藥的培養(yǎng)基平板,每個(gè)藥劑濃度重復(fù)3次。然后用直徑為5mm的打孔器,在試驗(yàn)前將已經(jīng)培養(yǎng)好的高粱葉枯病2號(hào)菌種的菌落中打取直徑為5mm的菌餅(打取菌落邊緣生長(zhǎng)旺盛的菌絲),將菌餅分別接種在含不同濃度藥劑的PDA平板的中心(使帶菌絲的一面接觸培養(yǎng)基),加蓋,翻轉(zhuǎn),25下放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。另外,每個(gè)藥劑做一個(gè)對(duì)照處理,對(duì)照組取1ml無(wú)菌水放入9ml PDA培養(yǎng)基中混合,再倒入平板中,同樣用消毒后的打孔器打取菌餅接到培養(yǎng)基上,重復(fù)三次。(高粱葉枯病4號(hào)菌種采取同樣的方法)最后在培養(yǎng)的第2、4、6天分別調(diào)查病原菌菌絲生長(zhǎng)情況,并用十字交叉法測(cè)量其菌落直徑,記錄數(shù)據(jù)。1.
14、3.2 孢子數(shù)目法將培養(yǎng)5至6天的病原菌取出,在培養(yǎng)皿中滴加50ul的土溫試劑和500ul的蒸餾水,用玻璃棒攪拌,配制成均勻的孢子懸浮液,用球計(jì)數(shù)板記錄孢子數(shù)目。2 結(jié)果與分析2.1 單劑抑制率的測(cè)定根據(jù)實(shí)驗(yàn)記錄的菌落直徑數(shù)據(jù)繪制表格,運(yùn)用數(shù)據(jù)分析軟件計(jì)分析,對(duì)于高粱葉枯2號(hào)菌株,50%異菌脲抑制率范圍為82.3%-48.3%,其次為55%烯酰·福美雙,抑制率范圍為71.3%-42.2%,接下來(lái)是50%多菌靈,3%中生菌素,而抑制率最低的是50%嘧菌酯;其中,50%異菌脲500倍液的抑制率最高達(dá)82.3%,其抑制效果最好,50%異菌脲1000倍液和55%烯酰·福美雙1600
15、倍液的抑制效果僅次之,50%嘧菌酯400倍液的抑制效果最差,僅達(dá)17%左右。表1 五種藥劑各梯度對(duì)高粱葉枯2號(hào)菌株菌落生長(zhǎng)平均速率及抑制藥劑及有效成分稀釋倍數(shù)GLYK2菌落生長(zhǎng)平均速率抑制率CK6.3333 50%異菌脲500倍液1.1222 0.822850%異菌脲1000倍液1.6278 0.742950%異菌脲1500倍液2.1944 0.653550%異菌脲2000倍液2.6278 0.585150%異菌脲2500倍液3.2722 0.4833CK9.1389 50%多菌靈400倍液4.4537 0.512750%多菌靈600倍液6.2944 0.311250%多菌靈800倍液6.91
16、85 0.242950%多菌靈1000倍液5.7426 0.371650%多菌靈1200倍液7.4278 0.1872CK12.0556 55%烯酰·福美雙400倍液6.9685 0.421955%烯酰·福美雙800倍液5.2852 0.561655%烯酰·福美雙1000倍液5.5796 0.537155%烯酰·福美雙1200倍液4.9407 0.590155%烯酰·福美雙1600倍液3.4611 0.7129CK12.2778 3%中生菌素400倍液7.2111 0.41263%中生菌素600倍液8.3981 0.31593%中生菌素800倍
17、液9.5481 0.22233%中生菌素1000倍液9.3907 0.23513%中生菌素1200倍液9.5667 0.2208CK10.2778 50%嘧菌酯400倍液8.4926 0.173650%嘧菌酯800倍液5.9639 0.419750%嘧菌酯1000倍液6.4102 0.376350%嘧菌酯1200倍液5.5454 0.460450%嘧菌酯1600倍液7.5694 0.2635對(duì)于高粱葉枯4號(hào)菌株,50%異菌脲抑制率范圍為68.1%-45.6%,其次為55%烯酰·福美雙,抑制率范圍為67.5%-42.1%,接下來(lái)是50%多菌靈,3%中生菌素,其中,50%異菌脲500倍液
18、的抑制率最高,其抑制效果最好,55%烯酰·福美雙1000倍液和1200倍液的抑制效果僅次之;而50%嘧菌酯低倍液下對(duì)于該菌種的生長(zhǎng)具有增效作用,高倍液下僅具有微弱的抑制作用,效果不太明顯。表1 五種藥劑各梯度對(duì)高粱葉枯4號(hào)菌株菌落生長(zhǎng)平均速率及抑制率比較藥劑及有效成分稀釋倍數(shù)GLYK4菌落生長(zhǎng)平均速率抑制率CK7.1667 50%異菌脲500倍液2.2889 0.680650%異菌脲1000倍液2.9611 0.586850%異菌脲1500倍液3.4778 0.514750%異菌脲2000倍液2.9278 0.591450%異菌脲2500倍液3.9000 0.4558CK8.6667
19、 50%多菌靈400倍液4.6019 0.469050%多菌靈600倍液6.0204 0.305350%多菌靈800倍液6.3352 0.269050%多菌靈1000倍液5.3981 0.377150%多菌靈1200倍液6.7519 0.2209CK10.3056 55%烯酰·福美雙400倍液5.9722 0.420455%烯酰·福美雙800倍液6.2685 0.391755%烯酰·福美雙1000倍液3.3500 0.674955%烯酰·福美雙1200倍液3.6407 0.646755%烯酰·福美雙1600倍液3.7611 0.6350CK12
20、.2222 3%中生菌素400倍液6.2204 0.49113%中生菌素600倍液8.6296 0.29393%中生菌素800倍液9.6556 0.20993%中生菌素1000倍液9.6759 0.20833%中生菌素1200倍液9.8722 0.1922CK5.8333 50%嘧菌酯400倍液8.0648 -0.382550%嘧菌酯800倍液8.7148 -0.493950%嘧菌酯1000倍液5.2954 0.092250%嘧菌酯1200倍液3.1417 0.461450%嘧菌酯1600倍液1.8472 0.68332.2 孢子抑制率及其顯著性分析根據(jù)試驗(yàn)記錄的孢子數(shù)量進(jìn)行相對(duì)抑制率的分析和
21、顯著水平分析,對(duì)于2號(hào)菌種,處于0.05的顯著水平下,50%異菌脲顯著水平較其他殺菌劑高,最高的是50%異菌脲500倍液,孢子抑制效果應(yīng)是最好的;其次為50%異菌脲1500倍液,50%異菌脲2000倍液;顯著水平最低的為3%中生菌1200倍液,55%福美雙和50%多菌靈差異顯著性均處于中間同一水平。處于0.01的顯著水平下,最高的仍是50%異菌脲500倍液,孢子抑制效果是最好的;其次為50%異菌脲1000倍液,50%異菌脲1500倍液,50%異菌脲2000倍液;55%福美雙和50%多菌靈差異顯著性均處于中間同一水平。表3 五種藥劑各梯度對(duì)高粱葉枯2號(hào)菌株孢子抑制率顯著性差異比較藥劑及有效成分稀
22、釋倍數(shù)孢子相對(duì)抑制率顯著水平0.010.053%中生菌素1200倍液0.8321gK50%嘧菌酯800倍液0.8754fgHK3%中生菌素400倍液0.8016efgGHK3%中生菌素600倍液0.8495defgFGHK3%中生菌素800倍液0.8567cdefgEFGH50%嘧菌酯1600倍液0.8431cdefgdefgh3%中生菌素1000倍液0.8852cdefgEFGH50%嘧菌酯400倍液0.8946bcdefDEFGH50%嘧菌酯1200倍液0.8846abcdefCDEFG50%多菌靈1000倍液0.9089abcdefBCDEF50%嘧菌酯1000倍液0.8992abcde
23、ABCDE50%多菌靈1200倍液0.9115abcdeABCDE50%多菌靈800倍液0.9123abcdeABCDE50%多菌靈400倍液0.9216abcdABCDE55%烯酰·福美雙1600倍液0.9253abcdABCDE50%多菌靈600倍液0.9311abcdABCDE55%烯酰·福美雙400倍液0.9564abcdABCDE55%烯酰·福美雙1000倍液0.9434abcABCD55%烯酰·福美雙1200倍液0.9658abcABCD55%烯酰·福美雙800倍液0.9684abcABC50%異菌脲2500倍液0.9838abAB
24、50%異菌脲2000倍液0.9844aA50%異菌脲1500倍液0.9857aA50%異菌脲1000倍液0.9864aAB50%異菌脲500倍液0.9875aA對(duì)于4號(hào)菌種,處于0.01和0.05顯著水平下的顯著性差異基本相同,50%異菌脲顯著水平較其他殺菌劑高,最高的是50%異菌脲500倍液,其孢子抑制效果為最佳;顯著水平最低的為50%嘧菌酯,其抑制效果不僅小,反而低倍液下右微弱的促進(jìn)效果;而3%中生菌素,55%福美雙和50%多菌靈差異顯著性之間沒(méi)有大的差別。表4 五種藥劑各梯度對(duì)高粱葉枯4號(hào)菌株孢子抑制率顯著性差異比較藥劑及有效成分稀釋倍數(shù)孢子相對(duì)抑制率顯著水平0.010.0550%嘧菌酯
25、400倍液-0.3529hK50%嘧菌酯800倍液-0.4165gH50%嘧菌酯1000倍液0.1521fG3%中生菌素1200倍液0.8105hK50%嘧菌酯1600倍液0.8452efEF50%多菌靈1200倍液0.7986eF50%嘧菌酯1200倍液0.5498deF50%多菌靈600倍液0.8213cdeEF50%多菌靈800倍液0.8252cdeEF50%多菌靈1000倍液0.8123cdeEF50%多菌靈400倍液0.8547bcdeEF3%中生菌素1000倍液0.8426bcdeEF3%中生菌素800倍液0.8245bcdeCDEF3%中生菌素600倍液0.8459abcdeBC
26、DEF55%烯酰·福美雙1200倍液0.8947abcdeBCDEF55%烯酰·福美雙1600倍液0.8959abcdeBCDEF3%中生菌素400倍液0.8989abcdeABCDEF55%烯酰·福美雙1000倍液0.9018abcdeABCDE55%烯酰·福美雙800倍液0.9125abcdeABCDE50%異菌脲2500倍液0.9431abcdABCD55%烯酰·福美雙400倍液0.9541abcABC50%異菌脲2000倍液0.9689abcABC50%異菌脲1500倍液0.9657abABC50%異菌脲1000倍液0.9798abAB
27、50%異菌脲500倍液0.9875aA2.3 毒力回歸方程的計(jì)算最后對(duì)5種殺菌劑進(jìn)行毒力回歸方程的計(jì)算,對(duì)于高粱葉枯2號(hào)菌株,五種殺菌劑的EC50高低排列為:50%異菌脲可濕性粉劑<50%多菌靈可濕性粉劑<55%烯酰·福美雙水分散粒劑<50%嘧菌酯可濕性粉劑<3%中生菌素可濕性粉劑,50%異菌脲最靈敏,因此抑菌效果最好,而3%中生菌素EC50很大,且r值是負(fù)值,濃度與抑制率表現(xiàn)負(fù)相關(guān),其抑菌效果最差。表5 五種殺菌劑對(duì)高粱葉枯2號(hào)菌株的毒力回歸方程藥劑r毒力回歸方程EC50(mg/L)50%異菌脲可濕性粉劑0.92y=6.97+0.08x4.98E-26 50
28、%多菌靈可濕性粉劑0.69y=5.68+0.23x1.09E-0355%烯酰·福美雙水分散粒劑0.51y=5.65+0.34x1.23E-023%中生菌素可濕性粉劑-0.59y=7.30-0.41x4.27E+05 50%嘧菌酯可濕性粉劑0.70y=5.29+0.29x9.88E-02對(duì)于高粱葉枯4號(hào)菌株,50%異菌脲可濕性粉劑的EC50為7.47E-02,表現(xiàn)為最靈敏,抑菌效果最好,而50%嘧菌酯可濕性粉劑的EC50非常,抑菌效果表現(xiàn)為最差。表6 五種殺菌劑對(duì)高粱葉枯4號(hào)菌株的毒力回歸方程藥劑r毒力回歸方程EC50(mg/L)50%異菌脲可濕性粉劑0.96y=5.55+0.49x7
29、.47E-02 50%多菌靈可濕性粉劑0.94y=4.65+0.41x7.21E+0055%烯酰·福美雙水分散粒劑0.90y=4.44+0.64x7.60E+003%中生菌素可濕性粉劑0.89y=3.76-0.72x5.15E+01 50%嘧菌酯可濕性粉劑-0.62y=10.39-1.82x9.35E+023 結(jié)論與討論本文選用農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中用來(lái)防治真菌病害常用的5種殺菌劑對(duì)高粱葉枯病進(jìn)行室內(nèi)的藥劑篩選和毒力測(cè)定,這5種殺菌劑對(duì)于鏈格孢的病害都具有很好的防治作用,并且具有不同程度的抑制作用,通過(guò)選取不同梯度的藥劑用于試驗(yàn),計(jì)算菌絲的生長(zhǎng)抑制率和孢子抑制率,最終結(jié)合毒力回歸方程,結(jié)果初步顯
30、示50%異菌脲可濕性粉劑對(duì)于該病菌的防治效果表現(xiàn)最好,尤其是在400-100倍液之間,其防治效果最高。另外,55%烯酰·福美雙水分散粒劑和50%多菌靈對(duì)于高粱葉枯病的防治也有一定的效果;3%中生菌素的防治效果微乎其微,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中起不到什么大的防治作用;而50%嘧菌酯在這幾個(gè)方法中得出的結(jié)果均是對(duì)病害的發(fā)生有促進(jìn)作用,因此在大田防治高粱葉枯病害時(shí),盡量不要用此藥劑。目前高粱上的病害主要以高粱大斑病和黑穗病為害最為嚴(yán)重,在農(nóng)業(yè)防治中目前還沒(méi)有特效的藥劑,一般使用的化學(xué)藥劑多為光譜性殺菌劑或是一些新型生物源藥劑。本文最終篩選出的藥劑異菌脲屬于低毒類內(nèi)吸性殺菌劑,對(duì)于蔬菜水果上的霜霉病,葉斑病都有很好的防治效果,另外,異菌脲對(duì)于玉米交鏈格孢葉枯病的防治效果也比較好,與高粱細(xì)極鏈格孢葉枯病很相似,張希福教授曾對(duì)玉米葉枯病做過(guò)相關(guān)的試驗(yàn),其結(jié)果表示退菌特、撲
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