實(shí)驗(yàn)七：血清鐵及總鐵結(jié)合 - 副本

1、血清鐵及總鐵結(jié)合力測(cè)定血清鐵及總鐵結(jié)合力測(cè)定【目的與要求】l掌握血清鐵及總鐵結(jié)合力測(cè)定的原理和方法及注意事項(xiàng)；l了解血清鐵及總鐵結(jié)合力各種測(cè)定方法的優(yōu)缺點(diǎn)。【原理】 血清鐵:血清中的鐵與運(yùn)鐵蛋白結(jié)合成復(fù)合物，在酸性介質(zhì)中鐵從復(fù)合物中解離出來(lái)，再被還原劑還原成二價(jià)鐵，并與雙吡啶結(jié)合成粉紅色的絡(luò)合物，在一定范圍內(nèi)，鐵離子的多少與色澤成正比。 絡(luò)合物在520nm處有吸收峰，與同樣處理的鐵標(biāo)準(zhǔn)液比較，即可求得血清鐵含量。【原理】l總鐵結(jié)合力 (TIBC) :是指血清中的運(yùn)鐵蛋白全部被鐵飽和所能結(jié)合的鐵量。l總鐵結(jié)合力測(cè)定方法:將過(guò)量鐵標(biāo)準(zhǔn)液加到血清中，使之與未帶鐵的運(yùn)鐵蛋白結(jié)合，多余的鐵被輕質(zhì)碳酸鎂粉

2、吸附除去，然后測(cè)定血清中總鐵含量，即為總鐵結(jié)合力。 .血清鐵測(cè)定的試劑組成與配制1、100mg/L（1791mol/L）鐵標(biāo)準(zhǔn)貯備液：1ml溶液一瓶，4保存。 2mg/L（35.8mol/L）鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：取鐵標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.2ml加蒸餾水定溶至10ml，4保存。2、鐵顯色劑：2號(hào)甲粉劑一支，2號(hào)乙粉劑一支，2號(hào)丙液100ml1瓶。用時(shí)將甲、乙二粉劑倒入丙液中，充分混勻，溶解，即為鐵顯色劑，48避光保存。2. 血清鐵測(cè)定操作步驟 加入物名稱(ml )空白管標(biāo)準(zhǔn)管 測(cè)定管蒸餾水（ml） 0.535.8mol/L鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml） 0.5血清（ml） 0.5鐵顯色劑（ml） 1.51.51.

3、5混勻后，沸水浴5分鐘（空白及標(biāo)準(zhǔn)管可以不煮），冷卻后離心，3500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液1.0ml，0.5cm光徑，波長(zhǎng)520nm，雙蒸水調(diào)零，測(cè)各管吸光度OD值。 3.總鐵結(jié)合率測(cè)定的試劑組成與配制l 1、100mg/L（1791mol/L）鐵標(biāo)準(zhǔn)貯備液 6ml ， 4保存。 10mg/L(179.1mol/L)的鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：取貯備液10倍稀釋，即取5ml鐵貯備液加蒸餾水稀釋至50ml。 1mg/L(17.91mol/L)的鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：取10mg/L鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液10倍稀釋，即取1ml 10mg/L(179.1mol/L)鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液加蒸餾水稀釋至10ml。 l 2、

4、鐵吸附劑50mg/支，4保存。 l 3、鐵顯色劑：3號(hào)甲粉劑一支，3號(hào)乙粉劑一支，3號(hào)丙液100ml1瓶，4保存。 用時(shí)將甲、乙二粉劑倒入丙液中，充分混勻、溶解，即為鐵顯色劑，48避光保存。 4.總鐵結(jié)合率測(cè)定操作步驟 （1）樣本前處理：取血清（漿）1ml加入179.1mol/L鐵標(biāo)準(zhǔn)液1ml混勻，放置10分鐘后，加入鐵吸附劑50mg，混勻，室溫放置5分鐘，再混勻一次，共混勻四次，30003500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘（臺(tái)式離心機(jī)），取上清1ml，按操作表操作。 加入物名稱(ml )空白管標(biāo)準(zhǔn)管 測(cè)定管蒸餾水（ml） 117.91mol/L鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml） 1上清液（ml） 1鐵顯色劑（ml

5、） 222混勻后，沸水浴5分鐘（空白及標(biāo)準(zhǔn)管可以不煮），冷卻后離心，3500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清液1.5ml，0.5cm光徑，波長(zhǎng)520nm，雙蒸水調(diào)零，測(cè)各管吸光度OD值。 （2）操作表結(jié)果計(jì)算注意事項(xiàng) 1實(shí)驗(yàn)用水必須經(jīng)過(guò)去離子處理。玻璃器材必須用10(VV)鹽酸浸泡24h，取出后再用去離子水沖洗后方可應(yīng)用。應(yīng)避免與鐵器接觸，以防止污染。2溶血標(biāo)本對(duì)測(cè)定有影響，因此血清應(yīng)避免溶血。3血清鐵還存在著日內(nèi)生理性變異，早上的值最高，晚上的值最低。5所用試劑要求純度高，含鐵量極微。方法學(xué)評(píng)價(jià) 1目前測(cè)定血清鐵的方法主要有：分光光度法，原子吸收分光光度法，溶出伏安法等。2分光光度法根據(jù)顯色劑的不同