豬肉中瘦肉精的檢測——GC-MS法

1、豬肉中瘦肉精豬肉中瘦肉精克倫特羅的檢測克倫特羅的檢測制作人：制作人：班級：食品班級：食品10011001班班學(xué)號：學(xué)號：201035090114201035090114目錄目錄一、一、背景背景事件事件二、概述二、概述 1 1、瘦肉精、瘦肉精 2 2、克倫特羅、克倫特羅三、氣相色譜三、氣相色譜- -質(zhì)譜聯(lián)用法質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-GC-）檢測克倫特羅檢測克倫特羅 1 1、檢測方法選擇、檢測方法選擇 2 2、實驗具體方案、實驗具體方案 3 3、實驗結(jié)果及分析、實驗結(jié)果及分析四、四、杜絕杜絕措施措施五、參考文獻(xiàn)五、參考文獻(xiàn) 20112011年年3 31515特別行動中，央視曝光了雙匯特別行動中，央視曝光

2、了雙匯“瘦肉精瘦肉精”養(yǎng)豬養(yǎng)豬一事一事 。河南省孟州市等地養(yǎng)豬場采用違禁動物藥品。河南省孟州市等地養(yǎng)豬場采用違禁動物藥品“瘦肉精瘦肉精”飼養(yǎng)生豬，有毒豬肉流入雙匯食品中飼養(yǎng)生豬，有毒豬肉流入雙匯食品中。一、一、“雙匯雙匯”瘦肉精事件瘦肉精事件 瘦肉精是一類動物用藥，有數(shù)種藥物被稱為瘦肉精，例如瘦肉精是一類動物用藥，有數(shù)種藥物被稱為瘦肉精，例如萊克多巴胺（萊克多巴胺（RactopamineRactopamine）及克倫特羅（）及克倫特羅（ClenbuterolClenbuterol）等。）等。將瘦肉精添加于飼料中，可以增加動物的瘦肉量、減少飼料使將瘦肉精添加于飼料中，可以增加動物的瘦肉量、減少飼

3、料使用、使肉品提早上市、降低成本。但因為考慮對人體會產(chǎn)生副用、使肉品提早上市、降低成本。但因為考慮對人體會產(chǎn)生副作用，各國開放使用的標(biāo)準(zhǔn)不一。作用，各國開放使用的標(biāo)準(zhǔn)不一。 二、概述二、概述 1 1、瘦、瘦肉肉精精肉質(zhì)對比肉質(zhì)對比2.1 2.1 在中國，通常所說的瘦肉精是指克倫特羅。其學(xué)名是鹽酸在中國，通常所說的瘦肉精是指克倫特羅。其學(xué)名是鹽酸克倫特羅，是一種平喘藥克倫特羅，是一種平喘藥。 結(jié)構(gòu)簡式：結(jié)構(gòu)簡式： CASCAS號：號：37148-27-9 37148-27-9 分子式：分子式：C12-H18-Cl2-N2-O C12-H18-Cl2-N2-O 理化特性：白色或類白色的結(jié)晶粉末，無

4、臭、味苦，熔點理化特性：白色或類白色的結(jié)晶粉末，無臭、味苦，熔點161161，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。2 2、克倫特羅、克倫特羅2.2 2.2 人在食用超過鹽酸克倫特羅殘留限量的肉后會出現(xiàn)心人在食用超過鹽酸克倫特羅殘留限量的肉后會出現(xiàn)心率失常、酮癥酸中毒或乳酸中毒、急性中毒癥狀如率失常、酮癥酸中毒或乳酸中毒、急性中毒癥狀如面色潮面色潮紅、頭痛、頭暈、乏力、胸悶、心悸、骨骼肌震顫、紅、頭痛、頭暈、乏力、胸悶、心悸、骨骼肌震顫、四肢四肢麻木等。麻木等。 國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，每克肉中瘦肉精含量不能超過國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，每克肉中瘦肉精含量不能超過1 1納克納

5、克 。 2.2 2.2 人在食用超過鹽酸克倫特羅殘留限量的肉后會出現(xiàn)心人在食用超過鹽酸克倫特羅殘留限量的肉后會出現(xiàn)心率失常、酮癥酸中毒或乳酸中毒、急性中毒癥狀如率失常、酮癥酸中毒或乳酸中毒、急性中毒癥狀如面色潮面色潮紅、頭痛、頭暈、乏力、胸悶、心悸、骨骼肌震顫、紅、頭痛、頭暈、乏力、胸悶、心悸、骨骼肌震顫、四肢四肢麻木等。麻木等。 國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，每克肉中瘦肉精含量不能超過國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，每克肉中瘦肉精含量不能超過1 1納克納克 。 三、氣相色譜三、氣相色譜- -質(zhì)譜聯(lián)用法質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-GC-）檢測克倫特羅檢測克倫特羅1 1、檢測方法選擇、檢測方法選擇 GC-MSGC-MS法優(yōu)點：把色譜高效快

6、速的分離效果和質(zhì)譜高法優(yōu)點：把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機合起來靈敏度的定性分析有機合起來，能在多種殘留物同時存在，能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進(jìn)行定性、定量分析，而且的情況下對某種特定的殘留物進(jìn)行定性、定量分析，而且具更高的檢測極限。具更高的檢測極限。 GC-MS GC-MS法與法與HPLCHPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低，常用作篩選后陽性樣品的確證。低，常用作篩選后陽性樣品的確證。2.1 2.1 分析方法分析方法 用用C18C18小柱和聚（甲基丙烯小柱和聚（甲基丙烯酸乙二醇二甲基丙烯酸酯）酸乙二醇二甲基

7、丙烯酸酯）整體柱進(jìn)一步富集凈化，經(jīng)整體柱進(jìn)一步富集凈化，經(jīng)N N ,O-,O-雙三甲基硅烷三氟乙酰胺雙三甲基硅烷三氟乙酰胺 (BSTFA) (BSTFA) 衍生，選擇離子監(jiān)測衍生，選擇離子監(jiān)測方式進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜測定。方式進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜測定。該方法以克倫特羅同位素該方法以克倫特羅同位素(Clenbuterol-D9) (Clenbuterol-D9) 為內(nèi)標(biāo)，內(nèi)為內(nèi)標(biāo)，內(nèi)標(biāo)法定量。標(biāo)法定量。 C18C18小柱小柱2 2、實驗具體方案、實驗具體方案2.2 2.2 儀器與試劑儀器與試劑 儀器：島津儀器：島津GCMS-QP2010 PlusGCMS-QP2010 Plus 高速離心機（轉(zhuǎn)速可達(dá)到高

8、速離心機（轉(zhuǎn)速可達(dá)到1 12 2000r/min000r/min以上）以上） 漩渦混合器漩渦混合器 超聲波清洗器超聲波清洗器 氮吹儀氮吹儀 固相萃取裝置固相萃取裝置 C18 C18固相萃取小柱（固相萃取小柱（100 mg, 3 mL100 mg, 3 mL） 混合型陽離子交換固相萃取柱混合型陽離子交換固相萃取柱試劑：試劑： 鹽酸克倫特羅（鹽酸克倫特羅（ClenbuterolClenbuterol，CLBCLB）標(biāo)準(zhǔn)溶液）標(biāo)準(zhǔn)溶液1g/mL1g/mL 內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)溶液（溶液（Clenbuterol-D9Clenbuterol-D9， CLB-D9CLB-D9）1g/mL1g/mL N , O-N ,

9、 O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺（雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFABSTFA） 甲醇甲醇( (分析純）分析純） 20 mmol/L 20 mmol/L 磷酸溶液磷酸溶液 甲苯（分析純）甲苯（分析純）2.3 2.3 分析條件分析條件 色譜柱：色譜柱：Rtx-5MS (30 mRtx-5MS (30 m0.25 mm0.25 mm0.25 m)0.25 m) 進(jìn)樣口溫度：進(jìn)樣口溫度：220220 柱溫程序：柱溫程序：70(0.6 min)-25/min-220(6 min)-70(0.6 min)-25/min-220(6 min)-25/min-280(5 min)25/min-280(5 min

10、) 恒線速度方式恒線速度方式, , 柱流量柱流量0.9 mL/min0.9 mL/min 不分流進(jìn)樣不分流進(jìn)樣 檢測波長：檢測波長：244nm244nm 檢測離子：檢測離子： CLB CLB：檢測：檢測 m/z 86, 187, 243, 262m/z 86, 187, 243, 262， CLB-D9 CLB-D9：檢測：檢測 m/z 95, 187, 262m/z 95, 187, 262 以克倫特羅以克倫特羅 (m/z86) (m/z86) 與內(nèi)標(biāo)峰與內(nèi)標(biāo)峰 (m/z 95) (m/z 95) 的峰面積比校的峰面積比校準(zhǔn)定量。準(zhǔn)定量。2.4 實驗流程稱取稱取(2 0.01) g 己絞碎的

11、豬肉己絞碎的豬肉4 mL 0.1 mol/L 4 mL 0.1 mol/L 鹽酸鹽酸旋渦振蕩旋渦振蕩5 min5 min超聲超聲10 min10 min離心離心5 min5 min上清液上清液C18C18小柱小柱0.8 mL 0.8 mL 甲醇：甲醇：20 mmol/L 20 mmol/L 磷酸磷酸=1=1：1(v/v1(v/v）解析，調(diào)）解析，調(diào)ph=7ph=7，定容定容2mL2mL毛細(xì)管毛細(xì)管整體柱整體柱0.2 mL 0.2 mL 的甲醇解析的甲醇解析+ +50 L 50 L 的內(nèi)標(biāo)使用液的內(nèi)標(biāo)使用液100 L 100 L 甲苯甲苯100 LBSTFA100 LBSTFA渦旋渦旋30s30

12、s衍生衍生5 min5 min300L300L甲苯甲苯混勻混勻按操作規(guī)程使按操作規(guī)程使GC-MSGC-MS儀到工作狀態(tài)，儀到工作狀態(tài)，基線平直時進(jìn)樣基線平直時進(jìn)樣質(zhì)譜圖質(zhì)譜圖3.1 3.1 鹽酸克倫特羅的鹽酸克倫特羅的GC-MS GC-MS 測定測定 圖圖1 1 為衍生化克倫特羅和內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜圖，以克倫特羅碎片離為衍生化克倫特羅和內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜圖，以克倫特羅碎片離子子 (m/z 86) (m/z 86) 與內(nèi)標(biāo)碎片離子與內(nèi)標(biāo)碎片離子 (m/z 95) (m/z 95) 的濃度比值為橫坐的濃度比值為橫坐標(biāo)，峰面積比值為縱坐標(biāo)進(jìn)行定量標(biāo)，峰面積比值為縱坐標(biāo)進(jìn)行定量。 3 3、實驗結(jié)果及分析、實驗結(jié)果及分

13、析3.2 3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線 圖圖2 2 為空白豬肉和添加為空白豬肉和添加2.5g/kg 2.5g/kg 克倫特羅的豬肉樣品克倫特羅的豬肉樣品提取液的離子流圖，內(nèi)標(biāo)提取液的離子流圖，內(nèi)標(biāo) (Peak 1) (Peak 1) 和克倫特羅和克倫特羅 (Peak (Peak 2) 2) 的保留時間分別為的保留時間分別為9.83 min 9.83 min 和和9.92 min, 9.92 min, 空白豬肉樣空白豬肉樣品在被測物及內(nèi)標(biāo)處均無干擾品在被測物及內(nèi)標(biāo)處均無干擾相關(guān)性分析相關(guān)性分析 分別添加不同體積的克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液分別添加不同體積的克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 g/mL) (1 g/mL) 和

14、和50L 50L 內(nèi)標(biāo)溶液于內(nèi)標(biāo)溶液于2 g 2 g 豬肉樣品中豬肉樣品中 ( (其中克倫特羅的質(zhì)量其中克倫特羅的質(zhì)量分別為分別為1 1、5 5、1010、2020、40 40 和和100 ng)100 ng)，樣品的處理方法如，樣品的處理方法如上所述。上所述。 以克倫特羅與內(nèi)標(biāo)的峰面積的比值對濃度比值進(jìn)行線性回以克倫特羅與內(nèi)標(biāo)的峰面積的比值對濃度比值進(jìn)行線性回歸歸，發(fā)現(xiàn)克倫特羅在，發(fā)現(xiàn)克倫特羅在0.5-50g/kg 0.5-50g/kg 的濃度范圍內(nèi)，線性的濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.9990.999。3.3 3.3 檢測限及精密度檢測限及精密度 以信噪比

15、的以信噪比的3 3倍和倍和1010倍分別計算檢測限和定量限，方法檢測限倍分別計算檢測限和定量限，方法檢測限為為0.13 g/kg, 0.13 g/kg, 定量限為定量限為0.43g/kg0.43g/kg。該方法有較好的日。該方法有較好的日內(nèi)及日間精密度內(nèi)及日間精密度，在定量限附近，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于，在定量限附近，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于20%20%（見（見表表1 1），可滿足分析要求。），可滿足分析要求。 表表1. 1. 克倫特羅的方法學(xué)數(shù)據(jù)克倫特羅的方法學(xué)數(shù)據(jù) 相關(guān)部門要對瘦肉精的流通進(jìn)行嚴(yán)加監(jiān)管相關(guān)部門要對瘦肉精的流通進(jìn)行嚴(yán)加監(jiān)管，實行購買登記，實行購買登記制度。制度。 養(yǎng)牲畜者自律，監(jiān)管人嚴(yán)格監(jiān)

16、督。養(yǎng)牲畜者自律，監(jiān)管人嚴(yán)格監(jiān)督。 對責(zé)任人加大處罰力度，完善法律法規(guī)實。對責(zé)任人加大處罰力度，完善法律法規(guī)實。 四、杜絕措施四、杜絕措施11氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)(GC-MS)測定豬肉中的瘦肉精的含量測定豬肉中的瘦肉精的含量. .食品食品與發(fā)酵工業(yè)與發(fā)酵工業(yè)20112011年年0303期期 2Deng Ruiguang2Deng Ruiguang，Zhang HaitangZhang Haitang，Wang ZiliangWang Ziliang， Zhong HuaZhong Hua， Zhang GaipingZhang GaipingDevelopment of GC-MS Method for Development of GC-MS Method for Detecting Clenbuterol Residues and Confirmation of Detecting Clenbuterol Residues and Confirmation of Self-made Strip Performance Self-made S