實(shí)驗(yàn)報(bào)告18-光度法測鐵(綜合)

1、實(shí)驗(yàn)報(bào)告18 光度法測鐵（綜合）實(shí)驗(yàn)18：鄰二氮菲吸光光度法測定鐵（綜合實(shí)驗(yàn)）page 1 of 7no： 輕工化工學(xué)院 班級： 學(xué)號：姓名： 教師評定：實(shí)驗(yàn)題目：鄰二氮菲吸光光度法測定鐵（綜合實(shí)驗(yàn)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 學(xué)會分光光度計(jì)的使用方法。2. 通過測定鐵的條件試驗(yàn)，學(xué)習(xí)吸光光度法條件的確定方法，為研 究新的吸光光度法打下基礎(chǔ)。3. 掌握用鄰二氮菲分光光度法測定鐵的原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)原理鄰二氮菲（又稱鄰菲羅咻）是測定微量鐵的較好試劑。在ph 29的溶液中試劑與fe2生成穩(wěn)定的紅色配合物，其logk = 213,摩爾吸光系 數(shù) e 510=1.1 x104l mol-1 cm-1,+2+2

2、+fefe+3+牛成的紅色配合物的最大吸收峰在510nm處。本方法的選擇性很高,相當(dāng)于含鐵量40倍的sn2、+ + + fh +ai3、ca2、mg2、zn2、sio32, 20 倍的 cr3>mn2. po43, 5倍的cu2、co2等均不干擾測定。+fe3也能與鄰二氮菲反 應(yīng)生成淡藍(lán)色配合物，一般情況下，鐵以+3價(jià)存在，鹽酸羥胺可將其還原 為+2價(jià)，+ +因此，在顯色前，首先用鹽酸疑胺將血3離子還原為fe2離子：2fe3 + 2nh2oh hci 2fe2 + n2 t + 2h2o + 4h + 2ci- + + +在吸光光度分析中，顯色反應(yīng)的條件有溶液的酸度、顯色劑用量、有 色物

3、質(zhì)溶液的穩(wěn)定性、溫度和干擾離子等，這些條件都是通過實(shí)驗(yàn)來確定 的。本實(shí)驗(yàn)通過幾個(gè)條件試驗(yàn)的進(jìn)行，初步學(xué)會確定實(shí)驗(yàn)條件的方法。1. 溶液的酸度：固定被測組分的濃度和其它條件，使顯色反應(yīng)在不 同的ph值條件下進(jìn)行，然后測定溶液的吸光度。通過繪制 吸光度ph值 曲線，來確定顯色反應(yīng)的適宜酸度范圍。2. 顯色劑用量：固定被測組分的濃度和英它條件，改變加入顯色劑 的量進(jìn)行顯色，然后測定溶液的吸光度。由繪制 吸光度顯色劑用量曲線 來確定顯色劑最適宜的用量。3. 有色物質(zhì)溶液的穩(wěn)定性：按確定的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行顯色后開始計(jì)算 時(shí)間，每隔一定時(shí)間測定一次吸光度，根據(jù)作出的吸光度時(shí)間的曲線來 確定測定時(shí)合適的時(shí)間范圍

4、。測定時(shí)，ph值控制在5左右，酸度高時(shí)，反應(yīng)進(jìn)行較慢，酸度太低,則fe2離子水解，影響顯色。+三、實(shí)驗(yàn)用甜與試劑 分光光度計(jì)，25ml比色管，1、2、5、10ml吸量管各一支，1cm玻 璃比色皿1對。10-3 mol電1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液(含0.5mol <-lhci)：準(zhǔn)確稱取0.4822 gnh4fe (so4) 2 12h2o置于燒杯中，-1加入80 ml 6mol lhci和少量水，溶解后,移至1000 ml容量瓶中， 以水稀至刻度，搖勻。鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液(10 pg ml-l)：準(zhǔn)確稱取 0.8643g nh4fe (so4) 2 12h2o 置于燒杯中，加入20 ml 6 mol l-l

5、hci和少量水，溶解后，移至loooml 容量瓶中，以水稀至刻度，搖勻，所得溶液含鐵100ug-ml-lo然后實(shí)驗(yàn)18：鄰二氮菲吸光光度法測定鐵(綜合實(shí)驗(yàn))page 2 of 7吸取10.0ml上述溶液于100 ml容量瓶中,加入2ml6 molhci；以水稀至刻度，搖勻。此溶液含鐵量為10 p g ml-l o鹽酸耗胺：1.5%水溶液(新鮮配制)；鄰二氮菲：0.15%水溶液，1.0x10-3 mol l-1 水溶液；醋酸鈉洛液：1 mol l-l； naoh 溶液:1 mol l-lo注意：配制溶液時(shí)，移液管切勿交叉使用，以免污染試劑。使用分光光度計(jì)時(shí)，要小心開閉比色室的蓋門。比色ill!內(nèi)

6、溶液以1111高的4/5為宜，不可過滿以防液體溢出，使儀器受 損。用畢后，比色皿應(yīng)立即取出，用自來水及蒸憎水清洗，倒立晾干。四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 條件實(shí)驗(yàn)(1) 吸收曲線的測量用吸量管吸取o.oml和l.oml 10-3 mol <-1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液分別注入兩個(gè) 25ml比色管中,各加入1.0ml1.5%鹽酸羥胺溶液，搖勻。再加入1.0ml 0.15%鄰二氮菲，2.5mll mol l-l naac,搖勻，用水稀釋至刻度，搖勻。放置lomin后，用lcm 比色皿，以試劑空白為參比溶液，在440560nm z間，每隔10nm測一 次吸光度，在最大吸收峰附近，毎隔5nm測量一次吸光度。注意:每次改

7、變波長之后，都要用參比溶液調(diào)節(jié)儀器的吸光度，令其示值為0o在坐標(biāo)紙上，以波長入為橫坐標(biāo)，吸光度a為縱坐標(biāo)，繪制a與入關(guān) 系的吸收曲線，注明該圖標(biāo)題。求出最大吸收峰的波長，一般選用最大吸 收波長為分光光度法測定鐵時(shí)的適宜波長。表1鄰二氮菲鐵有色溶液吸收曲線的測量結(jié)果圖1鄰二氮菲鐵吸收曲線實(shí)驗(yàn)鄰二氮菲吸光光度法測定鐵（綜合實(shí)驗(yàn)）page 3 of 7結(jié)論：（2）有色溶液的穩(wěn)定性。在25 rnl比色管中，加入l.oml 10-3 mol <-1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液,1.0 ml 1.5% 鹽酸輕胺溶液,加入1.0 mlo. 15%鄰二氮菲溶液，2.5mllmol -l-lnaac 溶液，用水稀至刻度，搖

8、勻。立即以試劑溶液（或蒸館水）為參比，用1cm 比色皿，于波長510 nm處，在分光光度計(jì)上測定吸光度。然后依次測定放:.5 min10 min、30 min. lh> 2h、3 h溶液的吸光度（每次都取原容量瓶中的溶液測定）。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸光度時(shí)間曲線，注 明該圖標(biāo)題。從曲線觀察絡(luò)合物穩(wěn)定情況，從而判斷能否進(jìn)行實(shí)際分析, 并確定合適的時(shí)間范圍。表2鄰二氮菲鐵有色溶液穩(wěn)定性測量結(jié)果圖2鄰二氮菲鐵有色溶液的穩(wěn)定性結(jié)論：（3）溶液酸度的選擇。取8只25 ml比色管，各加入1.0 ml 10-3 mol l-1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液和1.0 ml1.5%鹽酸輕胺溶液，搖勻，再

9、加入1.0 ml 0.15%鄰二氮菲，搖勻， 然后分別加入 0.0、0.2、0.4、0.5、0.6、0.7、0.9、1.0 ml 0.5 mol l-1 naoh 溶液，以水稀至刻度，搖勻。用lcm比色皿，以蒸憾水為參比，在波長 510 nm處測定各溶液的吸光度，然后再用ph值計(jì)或精密ph值試紙測定 各溶液的ph值。以ph值為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸光度ph值曲線, 注明該圖標(biāo)題。找出適宜的ph值范圍。實(shí)驗(yàn)鄰二氮菲吸光光度法測定鐵（綜合實(shí)驗(yàn)）page 4 of 7表3酸度對鄰二氮菲鐵有色溶液的影響圖3鄰二氮菲鐵有色溶液的穩(wěn)定性結(jié)論：（4）顯色劑用量的影響。取7只25 ml比色管，各

10、加入1.0 ml10-3 mol t-1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液和1.0 ml 1.5%鹽酸疑胺溶液,搖勻，分別加入0.05、0.15、0.25、0.40、0.50、1.00及2.00ml0.15%鄰二氮菲溶液，然后加入2.5 ml 1 mol l-1 naac溶液, 用水稀至刻度，搖勻。在分光光度計(jì)上，用1cm比色皿，以試劑溶液（或 蒸館水）為參比，在波長510 nm處測定各溶液的吸光度。以顯色劑的體積為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸光度顯色 劑用量曲線，注明該圖標(biāo)題。確定測定時(shí)顯色劑最合適的用量范圍。表4顯色劑用量對鄰二氮菲鐵有色溶液的影響實(shí)驗(yàn)鄰二氮菲吸光光度法測定鐵（綜合實(shí)驗(yàn)）page 5 of

11、 7圖4顯色劑用量對鄰二氮菲鐵有色溶液的影響結(jié)論：通過以上條件試驗(yàn)，便可以擬定出用鄰二氮菲吸光光度法測定微量鐵 的分析步驟。2. 絡(luò)合物組成的測定一一摩爾比法取8只25 ml比色管，各加入1.0mll0x103mol l1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液, 1.0 ml 1.5%鹽酸疑胺溶液，依次加入1.0x10-3 mol <-1鄰二氮菲溶液0.5, 0.75, 1.0, 1.25, 1.5, 1.75, 2.0, 2.25 ml。然后各力口 2.5mllmol l-lnaac 溶液，用水稀至刻度，搖勻，在分光光度計(jì)上，于510nm處，用lcm比 色皿，以各自的試劑空白或蒸徭水為參比，測定各溶液的吸光度。以

12、吸光度對cr/cm作圖，注明該圖標(biāo)題。根據(jù)曲線上前后兩部分 延長線的交點(diǎn)位置，確定反應(yīng)的絡(luò)合比。3. 樣品的測量（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別吸取 0.00ml>1.00ml>2.00ml>3.00ml>4.00ml>5.00ml 10 ug -ml-1 的fe3+標(biāo)準(zhǔn)溶液于6只已編號的25ml比色管中，各加入1.0ml1.5%鹽酸 疑氨溶液，搖勻，加入1.0ml0.15%鄰二氮菲溶液和2.5ml-1 lmol - lnaac溶液，搖勻，用水稀釋至刻度，充分搖勻。以試劑空 白為參比溶液，用分光光度計(jì)在510nm處分別測定各溶液的吸光度，然后 用坐標(biāo)紙繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，注明該

13、圖標(biāo)題。（2）未知溶液屮鐵含量測定用吸量管吸取5.00ml未知液于25ml比色管中，其它步驟均同上，測 定其吸光度。平行做兩份。根據(jù)未知液的吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出5.00ml 未知液中的鐵含量，并以每毫升未知液中含鐵微克數(shù)表示。五、計(jì)算公式及數(shù)據(jù)處理血的含量（ug?ml）？1從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的鐵的微克數(shù)5.00實(shí)驗(yàn)18：鄰二氮菲吸光光度法測定鐵（綜合實(shí)驗(yàn)）page 6 of 7圖5鄰二氮菲鐵分光光度測定體系標(biāo)準(zhǔn)曲線六、習(xí)題顯色反應(yīng)的條件不包括：a、測定波長b、顯色劑用量c、顯色反應(yīng)的溫度d、溶液的酸度測定過程中，最好始終固定使用兩個(gè)比色1ul裝參比溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液, 但當(dāng)兩比色皿的材質(zhì)或厚度不一致時(shí)，會造成：a、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)降低b、未知樣測定結(jié)果不正確 實(shí)驗(yàn)18：鄰二氮菲吸光光度法測定鐵（綜合實(shí)驗(yàn)）page 7 of 7c、標(biāo)準(zhǔn)曲線彎曲d、標(biāo)準(zhǔn)曲線不過原點(diǎn)對于參比溶液的作用，下列說法不止確的是：a、可消除試劑對入射光的吸收帶來的誤差b、利用參比溶液，可以提高測量的靈敏度c、可消除比色皿器壁對入射光反射帶來的誤差d、參比溶液用以調(diào) 節(jié)儀器的零點(diǎn)鄰二氮菲分光光度法測定鐵時(shí)，必須準(zhǔn)確量取的試劑是：a、鄰二氮菲b、naacc、鹽酸疑胺d、鐵試液在配制鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，加hci溶液的作用是：a、顯色反應(yīng)必須在hci介質(zhì)中進(jìn)行c、