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文檔簡(jiǎn)介
1、選修3易考知識(shí)點(diǎn)背誦專題1 基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品?;蚬こ淌窃贒NA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,又叫做DNA重組技術(shù)。 原理:基因重組(一)基因工程的基本工具1.“分子手術(shù)刀”限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)(1)來源:主要是從原核生物中分離純化出來的。(2)功能:能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,因此具有專一性。(3)結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式:
2、黏性末端和平末端。2.“分子縫合針”DNA連接酶(1)兩種DNA連接酶(E·coliDNA連接酶和T4-DNA連接酶)的比較:相同點(diǎn):都縫合磷酸二酯鍵。區(qū)別:E·coliDNA連接酶來源于T4噬菌體,只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來;而T4DNA連接酶能縫合兩種末端,但連接平末端的之間的效率較低。(2)與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是連接兩個(gè)DNA片段的末端,形成磷酸二酯鍵。3.“分子運(yùn)輸車”載體(1)載體具備的條件:能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn)
3、,供外源DNA片段插入。具有標(biāo)記基因,供重組DNA的鑒定和選擇。(2) 最常用的載體是質(zhì)粒,它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌擬核之外,并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。質(zhì)粒存在于許多細(xì)菌以及酵母菌(真核生物)的細(xì)胞中.(3)其它載體: 噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的獲取1.目的基因是指: 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 。2.獲取目的基因的方法:從基因文庫(kù)中獲取目的基因、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因、用dna合 成儀直接人工合成.3.PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因(1)原理:DNA雙鏈復(fù)制(2)過程:第一步:加熱至9095DNA解鏈;第二步:冷卻到5560,引物結(jié)
4、合到互補(bǔ)DNA鏈;第三步:加熱至7075,熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。第二步:基因表達(dá)載體的構(gòu)建1.目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳至下一代,使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2.組成:?jiǎn)?dòng)子目的基因終止子標(biāo)記基因(1)啟動(dòng)子:是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA,最終獲得所需的蛋白質(zhì)。(2)終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段 ,位于基因的尾端。(3)標(biāo)記基因的作用:是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。常用的標(biāo)記基因是抗生素基因。第三步:將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞_
5、1.轉(zhuǎn)化的概念:是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。2.常用的轉(zhuǎn)化方法:將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞:采用最多的方法是 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,其次還有 基因槍法和 花粉管通道法等。此方法的受體細(xì)胞多是 體細(xì)胞。將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞:最常用的方法是 顯微注射技術(shù)。此方法的受體細(xì)胞多是 受精卵。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞:原核生物作為受體細(xì)胞的原因是 繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少 ,最常用的原核細(xì)胞是 大腸桿菌 ,其轉(zhuǎn)化方法是:先用 Ca2+ 處理細(xì)胞,使其成為 感受態(tài)細(xì)胞 ,再將 重組表達(dá)載體DNA分子 溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分
6、子,完成轉(zhuǎn)化過程。3.重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后,篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。第四步:目的基因的檢測(cè)和表達(dá) 探針:在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標(biāo)記1.首先要檢測(cè) 轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因,這是目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵,方法是采用 DNA分子雜交技術(shù)。2.其次還要檢測(cè) 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,方法是采用 用分子雜交技術(shù)(標(biāo)記的目的基因作探針與 mRNA雜交)。3.最后檢測(cè) 目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取 蛋白質(zhì),用相應(yīng)的 抗體進(jìn)行抗原抗體雜交。4.有時(shí)還需進(jìn)行 個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。(如 轉(zhuǎn)基因抗
7、蟲棉是否出現(xiàn)抗蟲性狀讓害蟲吞食轉(zhuǎn)基因棉花的葉子,觀察害蟲的存活情況,以確定性狀(三)基因工程的應(yīng)用1.植物基因工程:抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物,利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。2.動(dòng)物基因工程:提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物(科學(xué)家將藥用蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)空組件重組再一起,通過顯微注射法,導(dǎo)入哺乳動(dòng)物的受精卵中,轉(zhuǎn)基因動(dòng)物通過分泌的乳汁來生產(chǎn)所需要的藥品。3.基因治療:把正常的外源基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用。注意:基因文庫(kù)的構(gòu)建包含了基因工程的前三步.(四)蛋白質(zhì)工程的概念蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過基因
8、修飾或基因合成,對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。(基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì))轉(zhuǎn)錄 翻譯蛋白質(zhì)工程是中心法則的逆過程專題2 細(xì)胞工程(一)植物細(xì)胞工程 1.理論基礎(chǔ)(原理):植物細(xì)胞全能性全能性表達(dá)的難易程度:受精卵生殖細(xì)胞干細(xì)胞體細(xì)胞;植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞植物細(xì)胞工程包括兩個(gè)技術(shù):植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交2. 植物組織培養(yǎng)技術(shù):(1) 定義:植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人工控制條件下,將離體的植物器官 組織 細(xì)胞,培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上,給予適宜的培養(yǎng)條件,誘導(dǎo)其產(chǎn)生由愈傷組織 叢芽,最終形成完整的植株。 (2)過程:離體的植物器官、
9、組織或細(xì)胞 愈傷組織 試管苗 植物體(3)脫分化需要在避光條件下培養(yǎng),再分化在有光條件以及生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等激素的調(diào)節(jié)(4)用途:微型繁殖、作物脫毒、制造人工種子、單倍體育種、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。(5)地位:是培育轉(zhuǎn)基因植物、植物體細(xì)胞雜交培育植物新品種的最后一道工序。3. 植物體細(xì)胞雜交技術(shù): 定義:這就是將不同種的植物體細(xì)胞,在一定條件下融合成雜種細(xì)胞,并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。(1)過程:(2) 誘導(dǎo)融合的方法:物理法包括離心、振動(dòng)、電刺激等。化學(xué)法一般是用聚乙二醇(PEG)作為誘導(dǎo)劑。(3) 過程:植物體細(xì)胞融合 植物組織培養(yǎng)(4) 原理:細(xì)胞膜的流動(dòng)性 植物細(xì)胞全能性(
10、3)意義:克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。(2) 動(dòng)物細(xì)胞工程 動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)手段有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體等,其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。 1. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(1)概念:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程:取動(dòng)物組織塊(動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織)剪碎用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞制成細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。(3)細(xì)胞貼壁和接觸抑制
11、:懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上,稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞數(shù)目不斷增多,當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互抑制時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。(4)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件無菌、無毒的環(huán)境:培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素,以防培養(yǎng)過程中的污染。此外,應(yīng)定期更換培養(yǎng)液,防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。營(yíng)養(yǎng):合成培養(yǎng)基成分:糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常需加入血清、血漿等天然成分。溫度:適宜溫度:哺乳動(dòng)物多是36.50.5;pH:7.27.4。氣體環(huán)境:95%空氣5%CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的p
12、H。(5)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測(cè)有毒物質(zhì)、培養(yǎng)醫(yī)學(xué)研究的各種細(xì)胞。2.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物(1)哺乳動(dòng)物核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植(比較容易)和體細(xì)胞核移植(比較難)。(2)選用去核卵(母)細(xì)胞的原因:卵(母)細(xì)胞比較大,容易操作;卵(母)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)多,營(yíng)養(yǎng)豐富。(3)體細(xì)胞核移植的大致過程是:(右圖)核移植胚胎移植(4)體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用:加速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)良畜群繁育; 保護(hù)瀕危物種,增大存活數(shù)量;生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白; 作為異種移植的供體;用于組織器官的移植等。(5)體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題:克隆動(dòng)物存在著健康問題、表現(xiàn)出遺傳和生
13、理缺陷等。3.動(dòng)物細(xì)胞融合(1)動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交,是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞,稱為雜交細(xì)胞。(2)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同,誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法類似,常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電刺激等。(3)動(dòng)物細(xì)胞融合的意義:克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性,成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。(4)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較:比較項(xiàng)目細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)手段用法植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜的流動(dòng)性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動(dòng)
14、,聚乙二醇等試劑誘導(dǎo)克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性,獲得雜種植株動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外,再加滅活的病毒誘導(dǎo)制備單克隆抗體的技術(shù)之一4.單克隆抗體(1)抗體:一個(gè)以免疫的B淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)只分泌一種特異性抗體。從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。(2)單克隆抗體的制備過程:注入小鼠細(xì)胞融合分離抗原注入小鼠體內(nèi)B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)選擇培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)從腹水提取從培養(yǎng)液提取單克隆抗體(3)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):既能大量繁殖,又能產(chǎn)生專一的抗體。(4)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):特異性強(qiáng),靈敏度高,并能大量制備。(5)單克隆
15、抗體的作用: 作為診斷試劑:準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異,并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合,具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。 用于治療疾病和運(yùn)載藥物:主要用于治療癌癥治療,可制成“生物導(dǎo)彈”,也有少量用于治療其它疾病。專題3 胚胎工程3.1 體內(nèi)受精和早期胚胎發(fā)育胚胎工程的建立場(chǎng)所:睪丸的曲細(xì)精管時(shí)間:從初情期開始,到生殖機(jī)能衰退精子的發(fā)生 1)精原細(xì)胞多個(gè)初級(jí)精母細(xì)胞(通過數(shù)次有絲分裂)過程 2)1個(gè)初級(jí)精母細(xì)胞2個(gè)次級(jí)精母細(xì)胞4個(gè)精子細(xì)胞(通過減數(shù)分裂,即MI 和MII) 3)精子細(xì)胞精子(通過變形) 場(chǎng)所:卵巢 時(shí)間:從胎兒時(shí)期開始(胎兒時(shí)期完成了卵泡的形成和在卵巢內(nèi)的儲(chǔ)備)卵子的發(fā)生 1
16、)卵原細(xì)胞初級(jí)卵母細(xì)胞過程 2)1個(gè)初級(jí)卵母細(xì)胞1個(gè)次級(jí)卵母細(xì)胞第一極體(排卵前后完成)3)1個(gè)次級(jí)卵母細(xì)胞1個(gè)卵子第二極體(精子和卵子結(jié)合過程中完成) 概念:精子和卵子結(jié)合成合子(受精卵)的過程。 受精 場(chǎng)所:雌性的輸卵管內(nèi)1)受精前的準(zhǔn)備階段1:精子獲能 過程 2)受精前的準(zhǔn)備階段2:卵子的準(zhǔn)備(減數(shù)第二次分裂中期的次級(jí)卵母細(xì)胞)a.精子穿越放射冠和透明帶:頂體反應(yīng),透明帶反應(yīng)3)受精階段 b.進(jìn)入卵細(xì)胞膜:卵細(xì)胞膜封閉作用c.原核形成和配子結(jié)合 卵裂期:細(xì)胞在透明帶中進(jìn)行有絲分裂早期胚胎發(fā)育 桑椹胚:胚胎細(xì)胞達(dá)32個(gè)左右,每一個(gè)細(xì)胞都是細(xì)胞囊胚:有囊胚腔,出現(xiàn)了囊胚從透明帶中伸展出來的孵
17、化過程原腸胚:內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞形成外胚層和內(nèi)胚層,滋養(yǎng)層發(fā)育成胎膜和胎盤,內(nèi)胚層包圍 著原腸腔3.2 體外受精和早期胚胎培養(yǎng)試管動(dòng)物技術(shù):通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精,并通過培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后,再經(jīng)移植產(chǎn)生后代的技術(shù)。 方法一:用促性腺激素處理,使其超數(shù)排卵,從中輸卵管沖取精子(針對(duì)卵母細(xì)胞的采集 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,家畜豬、羊等) 方法二:從屠宰母畜卵巢中采集方法三:借助超聲波探測(cè)儀、內(nèi)窺鏡、腹腔鏡等工具直接從活體母畜 卵巢中吸?。ㄡ槍?duì)大家畜或大型動(dòng)物,如牛) 體外受精 卵母細(xì)胞的培養(yǎng):在體外人工培養(yǎng)成熟 精子的采集:方法有假陰道法、手握法和電刺激法等精子的獲能:方法有培養(yǎng)法(通過獲能
18、培養(yǎng)液)、化學(xué)誘導(dǎo)法 (通過肝素或鈣離子載體 A23187)獲能溶液或?qū)S玫氖芫芤菏芫韩@能的精子 培養(yǎng)成熟的卵子 完成受精 胚胎早期培養(yǎng) 條件:受精卵在發(fā)育培養(yǎng)液中培養(yǎng) 培養(yǎng)液成分:無機(jī)鹽、有機(jī)鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等3.3 胚胎工程的應(yīng)用及前景概念:是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎,或者通過體外受精及其他方式得到的胚胎,移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動(dòng)物的體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。其中提供胚胎的個(gè)體叫供體,接受胚胎的個(gè)體叫受體。應(yīng)用:胚胎移植是轉(zhuǎn)基因、核移植、或體外受精等技術(shù)的最后一道“工序”現(xiàn)狀:在牛的胚胎移植中,技術(shù)方法更為簡(jiǎn)便、實(shí)用。意義:可充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)
19、體繁殖潛力。供體主要職能只是產(chǎn)生優(yōu)良特性的胚胎,縮短 繁殖周期胚胎移植成功與否關(guān)系到:供體和受體的生理狀況胚胎移植 1)供、受體生殖器官的生理變化相同,為胚胎提供相同的生理環(huán)境生理學(xué)基礎(chǔ) 2)早期胚胎沒有與母體子宮建立組織聯(lián)系,為胚胎收集提供可能3)受體對(duì)外來胚胎基本不發(fā)生免疫排斥反應(yīng),為胚胎的存活提供可能4)胚胎能與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系,但其遺傳物質(zhì)不受影響1)供、受體的選擇和處理(使用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理、超數(shù)排卵處理)2)配種或人工受精基本程序 3)胚胎收集(沖卵)、檢查(胚胎發(fā)育到桑椹胚或囊胚)、培養(yǎng)或保存(196 的液氮)4) 胚胎移植:手術(shù)法(引出子宮和卵巢將其注入);
20、非手術(shù)法(用移植管將其 送入子宮)5)移植后的檢查(是否妊娠)等 概念:指采用機(jī)械方法將早期胚胎切割成2、4或8等份等,經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的 技術(shù)。 儀器設(shè)備:實(shí)體顯微鏡和顯微操作儀操作程序 1)選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚,移入盛有操作液的培養(yǎng)皿胚胎分割 2)用分割針或分割刀切開胚胎,吸出半個(gè),注入空透明帶或直接將裸半胚移植給受體。分割囊胚時(shí)要將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割。此時(shí)還可用分割針分割滋養(yǎng)層,做胚胎DNA分析性別鑒定。局限:剛出生的動(dòng)物體重偏低,毛色和斑紋上存在差異,同卵多胎的可能性有限。概念:由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞。簡(jiǎn)稱ES或EK細(xì)胞。特點(diǎn) 形態(tài)上:體積小、細(xì)
21、胞核大、核仁明顯 功能上:具有發(fā)育的全能性,即可分化為成年動(dòng)物體任何一種組織細(xì)胞;在體外胚胎干細(xì)胞 增殖而不發(fā)生分化;可冷凍保存;可進(jìn)行遺傳改造 1)移植ES細(xì)胞修復(fù)壞死或退化部位,治愈糖尿病、肝(心)衰竭、成骨不良等病癥 意義 2)ES細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化,可培育人造組織器官 3)ES細(xì)胞在牛黃酸、丁酰環(huán)腺苷酸等誘導(dǎo)因子作用下可向不同類型組織細(xì)胞分化(一)動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過程1、胚胎工程是指對(duì)動(dòng)物早期胚胎或配子所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù),如胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)。經(jīng)過處理后獲得的胚胎,還需移植到雌性動(dòng)物體內(nèi)生產(chǎn)后代,以滿足人類的各種需求。2、動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過
22、程(1)受精場(chǎng)所是母體的輸卵管上段。(2)卵裂期:特點(diǎn):細(xì)胞有絲分裂,細(xì)胞數(shù)量不斷增加,但胚胎的總體體積并不增加,或略有減小。 (3)桑椹胚:特點(diǎn):胚胎細(xì)胞數(shù)目達(dá)到32個(gè)左右時(shí),胚胎形成致密的細(xì)胞團(tuán),形似桑椹。是全能細(xì)胞。(4)囊 胚:特點(diǎn):細(xì)胞開始出現(xiàn)分化(該時(shí)期細(xì)胞的全能性仍比較高)。聚集在胚胎一端個(gè)體較大的細(xì)胞稱為內(nèi)細(xì)胞團(tuán),將來發(fā)育成胎兒的各種組織。中間的空腔稱為囊胚腔。(5)原腸胚:特點(diǎn):有了三胚層的分化,具有囊胚腔和原腸腔。(二)胚胎干細(xì)胞1、哺乳動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱ES或EK細(xì)胞,來源于早期胚胎或從原始性腺中分離出來。2、具有胚胎細(xì)胞的特性,在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小,細(xì)胞核大,核仁明顯
23、;在功能上,具有發(fā)育的全能性,可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。另外,在體外培養(yǎng)的條件下,可以增殖而不發(fā)生分化,可進(jìn)行冷凍保存,也可進(jìn)行遺傳改造。3、胚胎干細(xì)胞的主要用途是:可用于研究哺乳動(dòng)物個(gè)體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律;是在體外條件下研究細(xì)胞分化的理想材料,在培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子,如牛黃酸等化學(xué)物質(zhì)時(shí),就可以誘導(dǎo)ES細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化,這為揭示細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡的機(jī)理提供了有效的手段;可以用于治療人類的某些頑疾,如帕金森綜合癥、少年糖尿病等;利用可以被誘導(dǎo)分化形成新的組織細(xì)胞的特性,移植ES細(xì)胞可使壞死或退化的部位得以修復(fù)并恢復(fù)正常功能;隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展,通過ES細(xì)胞體外誘導(dǎo)分
24、化,定向培育出人造組織器官,用于器官移植,解決供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題。(三)胚胎工程的應(yīng)用1.體外受精和胚胎的早期培養(yǎng)(1)卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng):主要方法:用促性腺激素處理,使其排出更多的卵子,然后,從輸卵管中沖取卵子,直接與獲能的精子在體外受精。第二種方法:從剛屠宰母畜的卵巢中采集卵母細(xì)胞;第三種方法是借助超聲波探測(cè)儀、腹腔鏡等直接從活體動(dòng)物的卵巢中吸取卵母細(xì)胞。采集的卵母細(xì)胞,都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成熟后,才能與獲能的精子受精。(2) 精子的采集和獲能:在體外受精前,要對(duì)精子進(jìn)行獲能處理。(3) 受精:獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵細(xì)胞在獲能溶液或?qū)S玫氖芫芤褐型瓿墒芫^程。(4
25、)胚胎的早期培養(yǎng):精子與卵子在體外受精后,應(yīng)將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng),以檢查受精狀況和受精卵的發(fā)育能力。培養(yǎng)液成分較復(fù)雜,除一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽外,還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營(yíng)養(yǎng)成分,以及血清等物質(zhì)。當(dāng)胚胎發(fā)育到適宜的階段時(shí),可將其取出向受體移植或冷凍保存。不同動(dòng)物胚胎移植的時(shí)間不同。(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚階段才能進(jìn)行移植,小鼠、家兔等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可在更早的階段移植,人的體外受精胚胎可在4個(gè)細(xì)胞階段移植。)2.胚胎移植(1)胚胎移植是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎,或者通過體外受精及其它方式得到的胚胎,移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其它雌性動(dòng)物的體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。
26、其中提供胚胎的個(gè)體稱為“供體”,接受胚胎的個(gè)體稱為“受體”。(供體為優(yōu)良品種,作為受體的雌性動(dòng)物應(yīng)為常見或存量大的品種。)地位:如轉(zhuǎn)基因、核移植,或體外受精等任何一項(xiàng)胚胎工程技術(shù)所生產(chǎn)的胚胎,都必須經(jīng)過胚胎移植技術(shù)才能獲得后代,是胚胎工程的最后一道“工序”。 (2) 胚胎移植的意義:大大縮短了供體本身的繁殖周期,充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖能力。(3) 生理學(xué)基礎(chǔ):動(dòng)物發(fā)情排卵后,同種動(dòng)物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的。這就為供體的胚胎移入受體提供了相同的生理環(huán)境。早期胚胎在一定時(shí)間內(nèi)處于游離狀態(tài)。這就為胚胎的收集提供了可能。受體對(duì)移入子宮的外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。這為胚胎在受體的存活
27、提供了可能。供體胚胎可與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系,但供體胚胎的遺傳特性在孕育過程中不受影響。(4) 基本程序主要包括:對(duì)供、受體的選擇和處理。選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體,有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體,供體和受體是同一物種。并用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理,用促性腺激素對(duì)供體母牛做超數(shù)排卵處理。配種或人工授精。對(duì)胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存。配種或輸精后第7天,用特制的沖卵裝置,把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來(也叫沖卵)。對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查,此時(shí)的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑椹或胚囊胚階段。直接向受體移植或放入196的液氮中保存。對(duì)胚胎進(jìn)行移植。移植后的檢查。對(duì)受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查。3.胚胎分
28、割(1)概念:是指采用機(jī)械方法將早期胚胎切割2等份、4等份等,經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。(2)意義:來自同一胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì),屬于無性繁殖。(3)材料:發(fā)育良好,形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚。(桑椹胚至囊胚的發(fā)育過程中,細(xì)胞開始分化,但其全能性仍很高,也可用于胚胎分割。)(4)操作過程:對(duì)囊胚階段的胚胎分割時(shí),要將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割,否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。專題4 生物技術(shù)的安全性和倫理問題(一)轉(zhuǎn)基因生物的安全性爭(zhēng)論 :(1)基因生物與食物安全:反方觀點(diǎn):反對(duì)“實(shí)質(zhì)性等同”、出現(xiàn)滯后效應(yīng)、出現(xiàn)新的過敏原、營(yíng)養(yǎng)成分改變正方觀點(diǎn):有安全性評(píng)價(jià)、科學(xué)家負(fù)責(zé)的態(tài)度、無實(shí)例無
29、證據(jù)(2)轉(zhuǎn)基因生物與生物安全:對(duì)生物多樣性的影響反方觀點(diǎn):擴(kuò)散到種植區(qū)之外變成野生種類、成為入侵外來物種、重組出有害的病原體、成為超級(jí)雜草、有可能造成“基因污染”正方觀點(diǎn):生命力有限、存在生殖隔離、花粉傳播距離有限、花粉存活時(shí)間有限(3)轉(zhuǎn)基因生物與環(huán)境安全:對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響反方觀點(diǎn):打破物種界限、二次污染、重組出有害的病原微生物、毒蛋白等可能通過食物鏈進(jìn)入人體正方觀點(diǎn):不改變生物原有的分類地位、減少農(nóng)藥使用、保護(hù)農(nóng)田土壤環(huán)境(二)生物技術(shù)的倫理問題(1)克隆人:兩種不同觀點(diǎn),多數(shù)人持否定態(tài)度。否定的理由:克隆人嚴(yán)重違反了人類倫理道德,是克隆技術(shù)的濫用;克隆人沖擊了現(xiàn)有的婚姻、家庭和兩
30、性關(guān)系等傳統(tǒng)的倫理道德觀念;克隆人是在人為的制造在心理上和社會(huì)地位上都不健全的人??隙ǖ睦碛桑杭夹g(shù)性問題可以通過胚胎分級(jí)、基因診斷和染色體檢查等方法解決。不成熟的技術(shù)也只有通過實(shí)踐才能使之成熟。中國(guó)政府的態(tài)度:禁止生殖性克隆,不反對(duì)治療性克隆。四不原則:不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人的實(shí)驗(yàn)。(2)試管嬰兒:兩種目的試管嬰兒的區(qū)別兩種。不同觀點(diǎn),多數(shù)人持認(rèn)可態(tài)度。否定的理由:把試管嬰兒當(dāng)作人體零配件工廠,是對(duì)生命的不尊重;早期生命也有活下去的權(quán)利,拋棄或殺死多余胚胎,無異于“謀殺”??隙ǖ睦碛桑航鉀Q了不育問題,提供骨髓中造血干細(xì)胞救治患者最好、最快捷的方法,提供骨髓造血干細(xì)胞并不
31、會(huì)對(duì)試管嬰兒造成損傷。(3)基因身份證:否定的理由:個(gè)人基因資訊的泄漏造成基因歧視,勢(shì)必造成遺傳學(xué)失業(yè)大軍、造成個(gè)人婚姻困難、人際關(guān)系疏遠(yuǎn)等嚴(yán)重后果??隙ǖ睦碛桑和ㄟ^基因檢測(cè)可以及早采取預(yù)防措施,適時(shí)進(jìn)行治療,達(dá)到挽救患者生命的目的。(三)生物武器 (1)種類:致病菌、病毒、生化毒劑,以及經(jīng)過基因重組的致病菌。(2)散布方式:吸入、誤食、接觸帶菌物品、被帶菌昆蟲叮咬等。(3)特點(diǎn):致病力強(qiáng)、多數(shù)具傳染性、傳染途徑多、污染面廣、有潛伏期、不易被發(fā)現(xiàn)、危害時(shí)間長(zhǎng)等。(4)禁止生物武器公約及中國(guó)政府的態(tài)度專題四 生態(tài)工程一、生態(tài)工程的概念 生態(tài)工程是指應(yīng)用生態(tài)系統(tǒng)中物種共生與物質(zhì)循環(huán)再生原理、結(jié)構(gòu)與
32、功能相協(xié)調(diào)原則,結(jié)合系統(tǒng)分析的最優(yōu)化方法而設(shè)計(jì)的促進(jìn)物質(zhì)被分層多級(jí)利用的生產(chǎn)工藝系統(tǒng)。二、生態(tài)工程的基本原理生態(tài)工程的設(shè)計(jì)所依據(jù)的是生態(tài)學(xué)和工程學(xué)原理1、生態(tài)學(xué)原理(1)物種共生原理:自然界任何一種生物都不能離開其他生物而單獨(dú)生存和繁衍,存在著共生、競(jìng)爭(zhēng)等關(guān)系,這構(gòu)成了生態(tài)系統(tǒng)的自我調(diào)節(jié)和反饋機(jī)制。(2)生態(tài)位原理:生態(tài)系統(tǒng)中各種生物都占有一定的生態(tài)位,依據(jù)此原理,可構(gòu)建一個(gè)具有多層次、多種群的穩(wěn)定而高效的生態(tài)系統(tǒng)。(3)食物鏈原理:食物鏈/食物網(wǎng)是實(shí)現(xiàn)生態(tài)系統(tǒng)中物質(zhì)循環(huán)、能量流動(dòng)和信息傳遞的基礎(chǔ),物種間的食物關(guān)系是生態(tài)工程設(shè)計(jì)的重要因素。(4)物種多樣性原理:生態(tài)系統(tǒng)中生物多樣性越高,抵抗力穩(wěn)定性越陷越高 ,生態(tài)系統(tǒng)就越穩(wěn)定 。(如“三北防護(hù)林”蟲害、珊瑚礁區(qū)的生機(jī))2、工程學(xué)原理(1)物質(zhì)循環(huán)再生原理:物質(zhì)能在生態(tài)系統(tǒng)中循環(huán)往復(fù),分層分級(jí)利用。我國(guó)古代的“無廢棄物農(nóng)業(yè)”利用收集到的一切可能的有機(jī)物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)肥料,改善了土壤結(jié)構(gòu),培育了土壤微生物,實(shí)現(xiàn)了N、P、K等元素的循環(huán)利用。(2)協(xié)調(diào)與平衡原理:要處理好生物與環(huán)境的協(xié)調(diào)與平衡,生態(tài)系統(tǒng)中的生物數(shù)量不能超過環(huán)境承載力(環(huán)境容納量)的限度。太湖等水體富營(yíng)養(yǎng)化,導(dǎo)致水葫蘆和藻類瘋長(zhǎng)現(xiàn)象;西北衰敗的楊樹和繁茂的當(dāng)?shù)貥浞N間的大反差。(3)
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