谷氨酸轉(zhuǎn)運體在高熱驚厥大鼠腦內(nèi)表達(dá)和意義

1、谷氨酸轉(zhuǎn)運體在高熱驚厥大鼠腦內(nèi)表達(dá)和意義【摘要】目的探討大鼠反復(fù)高熱驚厥后腦內(nèi)谷氨 酸及谷氨酸轉(zhuǎn)運體的表達(dá)情況，進(jìn)行定性及定量分析。方法 熱水浴法建立fs模型。15日齡雄性wistar大鼠60只，隨 機分為正常對照組（n=10）和高熱處理組（ri=50）,其中高 熱處理組按大鼠是否有驚厥又分為高熱未驚厥組和高熱驚 厥組。免疫組織化學(xué)法檢測谷氨酸及谷氨酸轉(zhuǎn)運體在大鼠腦 組織各區(qū)的表達(dá)。結(jié)果驚厥對照組大鼠皮層及海馬ca3 區(qū)glu的表達(dá)較正常對照組明顯增加。驚厥對照組大鼠皮 層及海馬ca3區(qū)glt-1的表達(dá)均低于正常對照組。討論高 熱驚厥時腦細(xì)胞谷氨酸表達(dá)上升，而腦細(xì)胞膜和細(xì)胞間質(zhì)中 的谷氨酸轉(zhuǎn)運

2、體glt-1表達(dá)下降?！娟P(guān)鍵詞】高熱驚厥；谷氨酸；谷氨酸轉(zhuǎn)運體高熱驚厥（febrile convulsion, fc）是一種特殊類型 的癲癇綜合征，是小兒時期最常見的驚厥性疾病，但反復(fù)發(fā) 作或長時間發(fā)作的fc可造成腦損傷，目前對本病的研究仍 集中于對其行為及腦電圖變化的觀察，而對其神經(jīng)病理改變 的研究較少。本研究用熱水浴驚厥模型誘導(dǎo)生后15dwester 大鼠發(fā)生熱性驚厥，利用免疫組織化學(xué)方法對正常對照組、 高熱及高熱驚厥組大鼠腦內(nèi)谷氨酸及谷氨酸轉(zhuǎn)運體的表達(dá) 情況進(jìn)行定性及定量分析，為熱性驚厥時的神經(jīng)病理學(xué)研究 提供新思路1材料與方法1. 1實驗動物與分組15日齡雄性wistar大鼠60只，

3、體重30-45g,（購自內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物中心）。自由喂養(yǎng) id后進(jìn)行實驗。將大鼠稱重后編號，隨機分為正常對照組 （37. 0°c水浴，n=10）和高熱處理組（45.2°c水浴，n=50）, 其中高熱處理組按大鼠是否有驚厥又分為高熱未驚厥組和 高熱驚厥組。從正常對照、高熱未驚厥和高熱驚厥組中，分 別隨機取10只用于進(jìn)行腦組織免疫組織化學(xué)染色觀察。1. 2化學(xué)試劑 本實驗中所采用的化學(xué)試劑及免疫組化 試劑盒分別購自北京化學(xué)試劑公司及福州邁新生物科技公 司。1.3熱性驚厥動物模型的建立參照文獻(xiàn)報道1建立 熱性驚厥動物模型，高熱驚厥組熱水?。核∠錅囟仍O(shè)定為 45.21。從大鼠生

4、后15d開始，隔日誘導(dǎo)驚厥1次，共10 次。正常對照組水浴溫度為37°c,處置方法同高熱驚厥組。 記錄大鼠的驚厥潛伏期、驚厥時體溫、驚厥持續(xù)時間及驚厥 級別評2（驚厥分級：0級0分：無驚厥；1級1分：面部 抽動；2級2分：點頭；3級3分：前肢陣攣抽搐；4級4分: 全身強直；5級5分：全身強直陣攣）。1.4腦組織谷氨酸和谷氨酸轉(zhuǎn)運體表達(dá)檢測1. 4. 1腦標(biāo)本取材和切片制備并進(jìn)行免疫組化染色各 組在fc組末次驚厥24h予100g/l水合氯醛（3. 5ml/kg）腹 腔注射麻醉后，4%多聚甲醛pb左心室灌注固定，取腦，后 固定6-8ho腦標(biāo)本入30%蔗糖磷酸緩沖液（ph=7.4）過夜自 頭端向尾端連續(xù)凍切腦片，厚30um切片，連續(xù)取片，三張 為一套，分別進(jìn)行尼氏染色組織定位和glu及glt-1免疫組 化染色。1.4.2圖像結(jié)果處理每張切片分別在海馬ca3區(qū)、穎 葉皮層（ctl）隨機觀察5個不連續(xù)視野（x400）,使用olympus 自動圖像采集系統(tǒng)進(jìn)行圖像采集，腦片呈現(xiàn)棕黃色區(qū)域為陽 性反應(yīng)，用ipp軟件分析系統(tǒng)進(jìn)行計數(shù)和平均光密度分析， 取其0d值。1.5統(tǒng)