細(xì)胞培養(yǎng)常見污染(好)

1、整理總結(jié)：細(xì)胞培養(yǎng)中的第一大害 污染lwf991229（ 金幣 +3 ,VIP +0 ）:不錯(cuò) ,很詳細(xì) ,不過(guò)有的圖片打不開污染是細(xì)胞培養(yǎng)第一大害！預(yù)防和避免污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵之一。小木蟲還沒有相關(guān)帖子，故而整理和蟲子們分享，讓我們一起來(lái)繁榮小木蟲，蟲子們覺得好請(qǐng)順手回個(gè)貼！本頁(yè)圖片太多，個(gè)別打不開請(qǐng)刷新一下就好了。細(xì)胞污染的類型一、細(xì)菌污染細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染。 一開始就要十分重視，防止污染，否則會(huì)前功盡棄，不僅浪費(fèi)時(shí)間，而且浪費(fèi)人力、物力，甚至造成無(wú)法彌補(bǔ)的損失。即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素（一般為預(yù)防劑量） ，也可能因?yàn)椴僮鞑簧鞫鹞廴?。最常見的有革蘭氏陽(yáng)性菌

2、， 如枯草桿菌以及大腸桿菌、 假單胞菌等革蘭氏陰性菌， 其中又以白色葡萄球菌較常見。培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后，會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁， pH 改變而呈現(xiàn)黃色。 也有的 培養(yǎng)液肉眼觀察無(wú)多少改變， 只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染。所以，每天應(yīng)仔細(xì)觀察。 污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)顆粒增多、增粗，最后變圓脫落死亡，造成試驗(yàn)失敗和細(xì)胞株（系）丟失。一般細(xì)菌污染進(jìn)程很快，大約污染一兩天后肉眼就能顯著觀察到。二、真菌污染真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中最常見的一種，尤其在霉雨季節(jié)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)更易污染。最常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后，可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小

3、點(diǎn)，有的散在生長(zhǎng)，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁； 倒置顯微鏡下可見絲狀、 管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯(cuò)在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中， 有的呈鏈狀排列。 念珠菌和酵母菌呈卵圓形散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間 （發(fā)生卵圓形物體污染的幾率很大） 。個(gè)體細(xì)小，有增多趨勢(shì)。鏡下看時(shí)，要將培養(yǎng)瓶用酒精棉球擦干凈，以防止與瓶外尤其瓶底外面生長(zhǎng)的菌絲相混淆。真菌污染后， 細(xì)胞生長(zhǎng)變慢， 但最后由于營(yíng)養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。三、支原體污染支原體是介于細(xì)菌與病毒之間能獨(dú)立生活的最小微生物，最小直徑0.2科可一般過(guò)濾除菌無(wú)法去除它，光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu)。開始不易發(fā)現(xiàn)，能在偏堿條件（pH7.68.0）下生存， 對(duì)青霉素有抗藥性

4、。 多吸附于細(xì)胞表面或散在于細(xì)胞之間。 電鏡下可見其有三層結(jié)構(gòu)，無(wú)細(xì)胞壁，中央有電子密度大的密集顆粒或絲狀的中心囊。培養(yǎng)細(xì)胞受支原體污染后，部分敏感細(xì)胞可見細(xì)胞生長(zhǎng)增殖變慢，部分細(xì)胞變圓，從瓶壁脫落。但多數(shù)細(xì)胞污染后無(wú)明顯變化，或略有變化，若不及時(shí)處理，還會(huì)產(chǎn)生交叉污染。四、病毒污染采用組織細(xì)胞培養(yǎng)法生產(chǎn)疫苗， 如果沒有除去潛在病毒的組織培養(yǎng)物， 會(huì)產(chǎn)生病毒污染。目前，從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20 種血清性病毒。盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。若二倍體細(xì)胞系有SV40 或多發(fā)瘤病毒， B 淋巴細(xì)胞含 EB 病毒，細(xì)胞和會(huì)發(fā)生變異、轉(zhuǎn)化，形成異倍體的細(xì)胞系。因此

5、，潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。五、非同種細(xì)胞污染由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yán)格分開，操作不當(dāng)，往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染。如 “靈長(zhǎng)類 ”細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)猴和鼠類細(xì)胞的混合物， ERK/KD 細(xì)胞是從兔腎中分離出來(lái)的， 而現(xiàn)在卻認(rèn)為是HeLa 細(xì)胞。 目前， 世界上已有幾十種細(xì)胞都被 HeLa細(xì)胞所污染，致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無(wú)效。非細(xì)胞培養(yǎng)物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生，大多是由于細(xì)胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不徹底而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致。污染來(lái)源及鑒別一、污染來(lái)源細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中污染的來(lái)源主要有以下幾條途徑：1 、不潔的動(dòng)物組織標(biāo)本很多動(dòng)物組織

6、本該是無(wú)菌的 （直接與外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系統(tǒng)除外） ，但由于取材時(shí)不小心也會(huì)有污染的機(jī)會(huì)。 組織本身含有細(xì)菌， 如取材時(shí)不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡，也會(huì)帶菌，造成細(xì)胞污染。2、空氣空氣中含有大量的微生物，如果操作室與外界隔離不嚴(yán)或消毒不充分下，很容易造成污染。另外， 凈化工作臺(tái)使用過(guò)久，濾板未定期更換或長(zhǎng)久不更換， 濾氣受塵埃堵塞，工作時(shí)不帶口罩或外界氣流過(guò)強(qiáng)，污染空氣進(jìn)入操作區(qū)， 也會(huì)導(dǎo)致污染。 春夏季南方地區(qū)多雨，空氣濕度大，含菌量多，工作不注意也易造成污染。3、清洗消毒培養(yǎng)用物品、材料洗刷不凈，培養(yǎng)用液和器材滅菌不徹底也會(huì)引入微生物和有毒物質(zhì)。4、操作來(lái)自操作者的污染主要有以

7、下幾方面：1 、器材和溶液使用前未仔細(xì)檢查是否污染過(guò)，或者是否已經(jīng)消毒滅菌處理過(guò)，或者雖經(jīng)處理，時(shí)隔已久又末重新處理。2、操作者未戴口罩、帽子，呼出氣中排出細(xì)菌和支原體。3 、培養(yǎng)瓶口未用75% 酒精擦和燒灼。4、操作者不當(dāng)心，動(dòng)作不正確而將吸管或無(wú)菌器具碰到了污染的物品，如手上皮膚和瓶子外壁等。5、細(xì)胞傾液時(shí)倒出培養(yǎng)瓶或者滴落在超凈臺(tái)上，未及時(shí)擦凈或者灼燒。6、灼燒的火不夠旺。7、移液管吸取液體時(shí)將空氣中的氣流吸入培養(yǎng)瓶中。8、長(zhǎng)時(shí)間的將離心管放在離心機(jī)中，可能由于口沒有完全封閉而造成污染。9、同一根吸管或者放置吸管的離心管長(zhǎng)時(shí)間使用造成的一管污染多瓶細(xì)胞交叉污染。10 、操作者操作時(shí)大聲說(shuō)

8、話，來(lái)回走動(dòng)揚(yáng)起灰塵等。5、血清，市售血清滅菌不徹底，潛在病毒和支原體污染。二、污染的鑒別1 、細(xì)菌、真菌污染的檢測(cè)（ 1 ）肉眼觀察細(xì)菌、真菌污染常在傳代、換液、加樣等開放性操作之后發(fā)生，而且增生迅速，若有污染，在48 小時(shí)內(nèi)可明顯觀察到。如培養(yǎng)液變混濁，或略加振蕩有很多漂浮物漂起。 （ 2 ）鏡下觀察在倒置顯微鏡的高倍鏡下可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒漂浮，即為細(xì)菌污染。若細(xì)胞之間有絲狀、管狀、樹枝狀或卵形的物質(zhì)常為真菌污染。（ 3 ）接種觀察采用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養(yǎng)液接種，也可發(fā)現(xiàn)是否有污染。2、支原體污染的檢測(cè)（ 1 ） 相差顯微鏡觀察 將細(xì)胞接種于事先放置于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的支持

9、物（一般用長(zhǎng)形蓋玻片） ， 24小時(shí)后用清潔塵鑷子從培養(yǎng)瓶中取出支持物，細(xì)胞面向上放置于載物片上，再蓋上較大蓋玻片，用相差油鏡觀察；若不用支持物培養(yǎng)法，直接取少許培養(yǎng)液滴在載物片上，再蓋上蓋片觀察亦可。 支原體在鏡下呈暗色微小顆粒， 多位于細(xì)胞與細(xì)胞之間， 有時(shí)可見類似于布朗運(yùn)動(dòng)的表現(xiàn)。應(yīng)注意與細(xì)胞破碎溢出的內(nèi)容物如線粒體等相區(qū)別。（ 2 ）熒光染色法觀察用熒光染料Hoechst33258 ，此染料能與 DNA 特異地結(jié)合，可使支原體內(nèi)的 DNA 著色，然后用熒光顯微鏡觀察。染色方法為：用支持物蓋片培養(yǎng)法將細(xì)胞接種在蓋片上，在細(xì)胞匯合前（即未長(zhǎng)滿前）取出玻片，于碟皿中，用不含酚紅的 Hanks

10、 液 漂洗，1:3醋酸鉀固定10分鐘，再用生理鹽水漂洗后置于 50科g/mL的Hoechst33258（生理 鹽水配制）中染色10分鐘，置于蒸儲(chǔ)水漂洗12分鐘，向細(xì)胞面滴加數(shù)滴pH5.5磷酸緩沖液，然后置熒光顯微鏡下觀察。若用細(xì)胞培養(yǎng)液，先離心去除上清液，再加入 Hanks 液漂 洗，離心棄上清后加入 1:3 醋酸甲醇固定10 分鐘，再用生理鹽水漂洗后去上清液，再用Hoechst33258 ， DAPI 或者 PI 等核染色試劑，染色10 分鐘，加入蒸餾水漂洗，離心去上清蒸儲(chǔ)水，加35滴pH5.5磷酸緩沖液，稍吹打使沉淀細(xì)胞重懸浮，用吸管吸出，滴于載物片上， 蓋上蓋片后觀察。 熒光顯微鏡下支原

11、體呈綠色小點(diǎn)， 散在于細(xì)胞周圍或附于細(xì)胞表面。（4）電鏡檢測(cè) 可用掃描電鏡或透射電鏡觀察。一般在細(xì)胞培養(yǎng)4872小時(shí)，細(xì)胞接近匯合前，用胰酶消化細(xì)胞制成細(xì)胞懸液后進(jìn)行。需經(jīng)過(guò)固定、包埋、切片后才能進(jìn)行觀察。詳細(xì)方法同細(xì)胞形態(tài)觀察法。（5）培養(yǎng)檢測(cè)將2.5 X109/L細(xì)胞懸液5mL加入45mL支原體肉湯培養(yǎng)基（Sigma或北京生物制品所生產(chǎn)的均可） ，培養(yǎng) 14 天后觀察肉湯培養(yǎng)有無(wú)霧狀沉淀，然后取0.5ml 加入已冷卻到50的培養(yǎng)基中，再用瓊脂培養(yǎng)基做分離培養(yǎng)，37 培養(yǎng) 3 天觀察有無(wú) “荷包蛋 ”菌落出現(xiàn)。培養(yǎng)加熒光核染色是檢測(cè)支原體污染的黃金搭檔。污染的預(yù)防預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生

12、污染的最好辦法。只有預(yù)防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。 在超凈臺(tái)中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)， 特別注意在進(jìn)行移液， 傾倒液體的操作過(guò)程會(huì)產(chǎn)生飛沫并沉積在超凈工作臺(tái)內(nèi)物體的表面。 超凈工作臺(tái)的氣流并不能阻止飛沫的產(chǎn)生， 飛沫會(huì)隨著氣流的方向飄浮。 超凈工作臺(tái)不合理的放置、 不恰當(dāng)?shù)木S護(hù)以及不規(guī)范的使用會(huì)破壞超凈工作臺(tái)氣流的方向?qū)е嘛w沫更廣泛的沉積。 酒精燈的火焰、 操作者的活動(dòng)、談話、 咳嗽及打噴嚏都有可能影響氣流。 飛沫的沉積是導(dǎo)致超凈工作臺(tái)內(nèi)物品污染的主要因素造成潛在污染的進(jìn)一步傳播。 因此為減少交叉污染的發(fā)生， 應(yīng)盡可能減少超凈工作臺(tái)內(nèi)的物品。 不同細(xì)胞系以及同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室不同操作者

13、所使用的培養(yǎng)試劑一定要分開使用， 如胰酶、培養(yǎng)液等。否則，一個(gè)操作者的失誤可能引起所有細(xì)胞發(fā)生污染。一般預(yù)防可從以下幾方面著手：無(wú)菌操作基本技術(shù)1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前， 無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái) （laminar flow） 以紫外燈照射 30-60 分鐘滅菌， 以 5%新潔爾滅擦拭無(wú)菌操作抬面，并開啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株， 且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基， 以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以 5% 新潔爾滅擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。2. 無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清

14、潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以 5% 新潔爾滅擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。 實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無(wú)菌區(qū)域， 勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作。3. 小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái) （至少 Class II）

15、。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如 DMSO 及 TPA 等，并避免尖銳針頭之傷害等。5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：5.1. CO2 鋼瓶之 CO2 壓力5.2. CO2 培養(yǎng)箱之 CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染（水盤的水用無(wú)菌水，每周更換） 。5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng) （300 小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)， 3000 小時(shí) /HEPA） 。6. 水槽可添加消毒劑（Zephrin 1:750） ，定期更換水槽的水。7. 無(wú)菌室的徹底消毒1） 0.1% 新潔爾滅全面徹底擦洗無(wú)菌室；2）甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅

16、菌劑菌，其水溶液和氣休對(duì)各種細(xì)菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。常見的污染如下：1 、 細(xì)菌： 細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀， 根據(jù)感染細(xì)菌的不同， 可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況， 是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠， 壓力足夠！ 尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品， 連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染， 一定要注意！ 下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理2 、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)， 37 度孵箱培養(yǎng) 2-3 天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)， 鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物， 可看

17、到明顯的菌絲， 細(xì)胞仍可生長(zhǎng)， 但時(shí)間長(zhǎng)之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2 孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。 或者在培養(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體 , 可以防止霉菌污染。 CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時(shí)轉(zhuǎn)移，采用過(guò)氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁） 。并把過(guò)氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí)， 使其蒸汽彌漫。 待過(guò)氧乙酸的氣味消散后， 再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔（ 2 月左右） ，尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用 84 液擦洗清水擦洗 75% 酒精擦洗紫外燈照。預(yù)防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml 的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D 或雙抗；但細(xì)胞

18、一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線菌素D 或雙抗都于事無(wú)補(bǔ)，建議舍棄該污染細(xì)胞。 ，將環(huán)境徹底消毒，如果所有細(xì)胞都污染， 可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問(wèn)題，就要注意操作3、支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁，原體感染，國(guó)內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測(cè)， 而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。 而且它不能用過(guò)濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂(lè)菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細(xì)胞培養(yǎng)，無(wú)任何不良反應(yīng)。 Sigma 公司的使用時(shí)用 50ug/mlTylosin 培養(yǎng)液培養(yǎng)6 天或連續(xù)傳兩代即可清除支原

19、體污染。 如果作為常用的抗生素的話 , 建議用 8ug/ml 的濃度。4、黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過(guò)空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來(lái)游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會(huì)太影響， 細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，且觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物無(wú)明顯增多， 且培養(yǎng)液顏色、 透明度無(wú)明顯變化， 可在同一批號(hào)的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。 對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不會(huì)有明顯影響， 在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失， 除更換血清外無(wú)須特殊處理。 建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話， 可以增加細(xì)胞的種板密度，以提高細(xì)胞的生存率。5、真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片

20、，只是它很多很多的小塊很清楚， 象珊瑚狀， 不象細(xì)胞碎片分不清， 慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。 真菌生長(zhǎng)的比較慢， 不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)， 但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。6、原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多，輕微活動(dòng)，細(xì)胞雖然可以生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢， 而且細(xì)胞狀態(tài)不好， 邊緣不清楚， 細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)。 這種共生是非常普遍的， 但他們的數(shù)量小， 細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng)， 只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng)， 最終 形成惡性循環(huán)。污染的清除培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，宜棄之；在尋找原因后徹底消毒操作室，復(fù)蘇或重新購(gòu)置細(xì)胞，再培養(yǎng)。若污染細(xì)胞價(jià)值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。一、細(xì)菌和真菌的清除1 、使用抗生素，抗生素對(duì)殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥