植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)改革及創(chuàng)新

1、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)改革及創(chuàng)新摘要分別從母液配制、培養(yǎng)基配制及接種等3個(gè)植物組 織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)提出了改革和創(chuàng)新，表明在了解實(shí)驗(yàn)原理的 基礎(chǔ)上，積累經(jīng)驗(yàn)和改進(jìn)技術(shù)的重要性。關(guān)鍵詞植物組織培養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)；改革；創(chuàng)新中圖分類號q943. 1文獻(xiàn)標(biāo)識碼a文章編號1007-5739 (2012) 23-0339-01植物組織培養(yǎng)技術(shù)已有100多年的歷史，隨著不同類型的培養(yǎng)基（ms、white. n6、wpm等）以及激素（生長素、細(xì)胞分裂素、赤霉素、脫落酸等）的開發(fā)和利用，該技術(shù)得到 了空前發(fā)展。在稀有資源的組織快繁、離體脫毒等方面取得 了諸多成果，給農(nóng)業(yè)、工業(yè)、醫(yī)藥行業(yè)及園林園藝產(chǎn)業(yè)帶來 了巨大的經(jīng)濟(jì)效

2、益和社會效益，也催生了組培技術(shù)行業(yè)的出 現(xiàn)和大批組培產(chǎn)業(yè)園藝公司的誕生1。目前，生物技術(shù)得到蓬勃發(fā)展，作為其精髓的轉(zhuǎn)基因技術(shù)已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個(gè)領(lǐng)域，尤其是在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域。而 作為其中的一個(gè)基本操作環(huán)節(jié)，植物組織培養(yǎng)技術(shù)也已得到 廣泛應(yīng)用，與之相關(guān)的課程也在國內(nèi)含有農(nóng)學(xué)、生命科學(xué)等 專業(yè)的大學(xué)普遍開設(shè)。安徽科技學(xué)院植物組織培養(yǎng)室成立于20世紀(jì)80年代，現(xiàn)已有30多年歷史。在一大批教師兢兢業(yè) 業(yè)的授課、科研積累下，植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)課程得 到飛速發(fā)展，除了對諸如蝴蝶蘭、文心蘭、石斛蘭、甜葉菊、 蘆薈、矮牽牛、馬鈴薯、箭葉秋葵、油茶、麗格海棠等植物 成功地進(jìn)行離體快繁或脫毒外，在實(shí)驗(yàn)過程的諸多環(huán)

3、節(jié)也做 出了有益的改革與創(chuàng)新。1母液配制環(huán)節(jié)的革新1.1微量元素母液配制精確配制由于ms培養(yǎng)基中微量元素的用量極少，很多實(shí)驗(yàn)室所 用的微量元素母液一般都將各元素?cái)U(kuò)大1 000倍進(jìn)行配制。 但即使經(jīng)過擴(kuò)大，其中的cus045h20和coc126h20仍然 都僅需要0. 025 g/l,萬分之一天平難以準(zhǔn)確地稱量，遺傳 性實(shí)驗(yàn)室則將上述2種元素?cái)U(kuò)大10 000倍，即各稱量0. 25 g/l, 一起定容至1 l的容量瓶中，后取100 ml與其他微量 元素一起定容至1 l,則微量元素的各組成元素都為1 000 倍。1. 2新型鐵鹽試劑的引用此前，鐵鹽的配制需要將乙二胺四乙酸二鈉與硫酸亞鐵 充分加熱螯合

4、后使用，一旦螯合不充分，極易在短期內(nèi)出現(xiàn) 沉淀。而乙二胺四乙酸鐵納可看成是上述2種無極元素的合 成體，易溶于水，無需加熱螯合的過程，簡化了鐵鹽配制的 程序。1. 3激素母液的配制激素是植物組織培養(yǎng)各環(huán)節(jié)所需要的重要因子，有的激 素溶于乙醇或水，有的則溶解于酸、堿。因此，除了本身所 帶的酸、堿性外，其溶解試劑也會改變激素的酸堿度。為了 減少溶解試劑所導(dǎo)致的影響，同時(shí)也為了后續(xù)培養(yǎng)基ph值 調(diào)節(jié)的方便，一般將溶解激素的酸堿試劑（如1 mol/l hc1 或naoh）的體積設(shè)定在1 ml之內(nèi)。2培養(yǎng)基配制環(huán)節(jié)的革新2. 1 ph值調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的ph值會影響其硬度，過堿會使培養(yǎng)基變硬， 不利于組培苗吸收

5、營養(yǎng)；過酸則會使培養(yǎng)基變軟，甚至不凝 固，需要重新配制。因而，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室通常會用ph試紙或 ph計(jì)測定培養(yǎng)基的酸堿度后予以調(diào)節(jié)。但國內(nèi)生產(chǎn)的ph試 紙精準(zhǔn)度低，而ph計(jì)的使用則較繁瑣。目前，實(shí)驗(yàn)室已摸 索出一種方法，前提是保證溶解激素的酸或堿體積在1 ml 之內(nèi)。基于此，1 l培養(yǎng)基可用滴管（由橡皮乳頭和尖嘴玻 璃管組成）滴加10滴1 mol/l naoh即可，簡化了 ph值調(diào) 節(jié)的過程。2.2刪除培養(yǎng)基配制的加熱程序培養(yǎng)基的加熱主要是需要保證瓊脂粉均勻地分配到各 組培瓶內(nèi)，而一旦培養(yǎng)基組別過多，則每組都需要加熱，極 大地耗費(fèi)配制時(shí)間2-3 o目前，實(shí)驗(yàn)室采用“邊攪邊倒” 的方法，即將各母液成

6、分、瓊脂粉及糖混合，待其中的糖溶 解于冷水后，將混合液充分?jǐn)嚢瑁儆脽?00 ml的乳 濁液，在傾倒至培養(yǎng)瓶的過程中，每隔3瓶攪拌1次，即可 保證每個(gè)培養(yǎng)瓶的均勻分配。2.3使用組培瓶蓋長期以來，培養(yǎng)基分配完畢后，組培瓶需要借助線繩， 將一定大小的耐高溫塑料捆扎在蓋口進(jìn)行滅菌。滅菌完畢接 種時(shí)，需要解開線繩，接種后又需要重新捆扎瓶口，故操作 程序非常復(fù)雜且耗時(shí)。組培瓶蓋的使用會極大地減少上述 “捆扎一松開一再捆扎”的操作時(shí)間，只需“旋緊一松開一 再旋緊”即可，提高了組培效率。3接種環(huán)節(jié)的革新3. 1組培瓶、超凈臺和手的滅菌以前組培瓶和超凈臺內(nèi)部的滅菌需要用含有75%的棉球 將組培瓶外和超凈

7、臺內(nèi)部空間仔細(xì)擦拭，接種之前也需要先用棉球擦拭手，以減少手上攜帶的污染源。因而，需要準(zhǔn)備75%酒精、棉球，該過程會耗費(fèi)酒精和脫脂棉。經(jīng)過革新,只需在超凈臺內(nèi)放置組培瓶，瓶與瓶之間留少許空隙，用噴 壺將75%乙醇通過細(xì)霧的形式噴向超凈臺內(nèi)部空間，使超凈 臺和其內(nèi)部的組培瓶表面都附有75%乙醇，達(dá)到初步滅菌的 效果。在接種之前，手的滅菌也采用正反面噴酒精的方法， 稍待片刻，待酒精揮發(fā)后即可進(jìn)行無菌操作，無需使用脫脂 棉。3.2三套接種工具的循環(huán)手術(shù)刀、剪刀和鑲子是植物組織培養(yǎng)最常用的3件操作 工具，為了減少等待的時(shí)間，可安排3套上述操作工具，其 中1套用于接種操作，1套用于滅菌，1套用于冷卻，循環(huán) 使用4-5 o4參考文獻(xiàn)1 王蒂植物組織培養(yǎng)m.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社， 2004.2 趙俊萍關(guān)于高中開展開放式組培條件探究實(shí)驗(yàn)的 研究j.教學(xué)儀器與實(shí)驗(yàn),2011, 27 (5)： 35-36.3 尚宏芹.植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革探索與實(shí)踐 j.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011 (14)： 595-59