培養(yǎng)基適用性驗證

1、 培養(yǎng)基適用性驗證方案起草人： 方案審核人：方案批準人：XXXXX藥業(yè)股份有限公司目 錄1. 驗證目的22. 參照標準23. 驗證項目24. 驗證小組人員及職責(zé)35. 驗證可接受的標準36. 驗證步驟37. 菌液制備68. 適用性檢查69. 控制菌檢查 .710. 操作方法.8 11.結(jié)論.111. 驗證目的：需氧菌、霉菌及酵母菌計數(shù)用的培養(yǎng)基及控制菌培養(yǎng)基應(yīng)進行培養(yǎng)基的適用性檢查。本次驗證的目的是確認胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基適合需氧菌、霉菌及酵母菌總數(shù)及測定和控制菌適用性檢查。2. 參照標準：2015版中國藥典微生物限度檢查法。3. 驗證項目：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培

2、養(yǎng)基的適用性檢查和控制菌適用性檢查。4.驗證小組人員及職責(zé)：4.1驗證小組人員:小組人員職務(wù)姓 名所在部門職 務(wù)組 長陳麗玲質(zhì)量部經(jīng) 理組 員林功璣質(zhì)量部QC主任組 員王水龍質(zhì)量部檢驗員組 員吳小燕質(zhì)量部檢驗員4.2驗證人員職責(zé)及要求4.2.1按驗證方案及相關(guān)文件實施驗證。4.2.2認真觀察并做好驗證原始記錄。4.2.3對實施驗證的結(jié)果負責(zé)。4.3驗證中各部門的職責(zé)4.3.1驗證領(lǐng)導(dǎo)組職責(zé)4.3.1.1制訂驗證總計劃，負責(zé)全公司驗證工作的管理。4.3.1.2確定驗證項目及驗證項目負責(zé)人。4.3.1.3負責(zé)驗證方案的批準工作。4.3.1.4負責(zé)驗證資料及結(jié)果的審核工作。4.3.1.5負責(zé)驗證報告

3、的批準工作。4.3.2驗證工作小組職責(zé)4.3.2.1負責(zé)驗證方案的起草工作。4.3.2.2參與驗證方案的討論、確認工作。4.3.2.3負責(zé)驗證方案的實施。4.3.2.4負責(zé)驗證結(jié)果的分析、統(tǒng)計、報告工作。4.3.2.5參與驗證結(jié)果的評價工作。4.3.3質(zhì)量部職責(zé)4.3.3.1負責(zé)驗證方案的審核工作。4.3.3.2負責(zé)驗證過程中儀器、儀表、計量器具的校驗工作。4.3.3.3負責(zé)驗證中各項檢測工作，提供驗證的檢驗記錄、檢驗報告，對驗證過程中的各項檢驗工作負責(zé)。4.3.3.4負責(zé)驗證資料和報告的審核工作。4.3.3.5負責(zé)驗證文件回收、歸檔管理工作。5. 合格標準：被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照

4、培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。6. 試驗材料：6.1. 被驗證產(chǎn)品：溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、腸道菌增菌液培養(yǎng)基、RV沙門菌增菌液培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基、甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱液體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基6.2. 儀器設(shè)備：6.2.1. LXD型壓力蒸汽滅菌器6.2.4. JMP-250霉菌培養(yǎng)箱 (2025)6.2.5. SHP-250生化培養(yǎng)箱 (3035)6.2.7 101-1電熱鼓風(fēng)干燥箱6.3. 驗證用培養(yǎng)基 名稱生產(chǎn)廠家批號胰酪

5、大豆胨瓊脂培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司3104855沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司3104805胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司3104807溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司3102493三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司3104624腸道菌增菌液培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司3104849RV沙門菌增菌液培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司3104847麥康凱瓊脂培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司3104829木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司3104852甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司310

6、4674麥康凱液體培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司3104763紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基廣東環(huán)凱微生物科技有限公司3104750胰酪大豆胨瓊脂對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院135025-201402沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院溴化十六烷基三甲銨瓊脂對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院135019-201001三糖鐵瓊脂對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院135028-201501腸道菌增菌液對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院135032-201501RV沙門菌增菌液對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院135029-201501麥康凱瓊脂對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院1350092015

7、03木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院135033-201501甘露醇氯化鈉瓊脂對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院麥康凱液體對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院135031-2015016.4. 驗證用菌株：(第 代)驗證菌株培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間（小時）大腸埃希菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基30351824金黃色葡萄球菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基30351824枯草芽孢桿菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基30351824白色念珠菌沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基202523（天）黑曲霉菌沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基202557（天）銅綠假單胞菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基3035

8、1824沙門菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基303518247. 菌液制備 7.1. 取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、沙門菌的新鮮培養(yǎng)物胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，于3035培養(yǎng)1824小時。取經(jīng)3035培養(yǎng)1824小時的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、沙門菌的新鮮培養(yǎng)物胰酪大豆胨液體新鮮培養(yǎng)物1ml加入到9mlPH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，10倍稀釋至10-610-7不大于100cfuml的菌懸液備用。7.2.取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，于2025培養(yǎng)4872小時。取經(jīng)2025培養(yǎng)4872小時的白色念珠菌用PH7.0無菌氯化鈉

9、-蛋白胨緩沖液中，10倍稀釋至10-5不大于100cfuml的菌懸液備用。7.3.取黑曲霉菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，于2025培養(yǎng)57天，加入35ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫。然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成每1ml含孢子數(shù)不大于100cfuml的菌懸液備用。8.適用性檢查： 8.1.取銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分別注入無菌平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌

10、平行制備2個平皿，混勻，凝固，置3035培養(yǎng)72小時，計數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置2025培養(yǎng)120小時，計數(shù)。8.2取銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分別注入無菌平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂對照培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置3035培養(yǎng)70小時，計數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分別注入無菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基，每株試驗菌平行

11、制備2個平皿，混勻，凝固，置2025培養(yǎng)120小時，計數(shù)。 試驗時間 年 月 日 完成時間 年 月 日驗證菌株平皿號供試品組cfuml對照培養(yǎng)基組cfuml回收率%應(yīng)70%銅綠假單胞菌(培養(yǎng)3天計數(shù))1-2-平均值金黃色葡萄球菌(培養(yǎng)3天計數(shù))1-2-平均值枯草芽孢桿菌(培養(yǎng)3天計數(shù))1-2-平均值白色念珠菌(培養(yǎng)5天開始計數(shù))1-2-平均值黑曲霉菌(培養(yǎng)5天開始計數(shù))1-2-平均值結(jié)論復(fù)核人 試驗人 9.控制菌檢查控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查項目包括促生長能力、抑制能力及指示能力的檢查。常用培養(yǎng)基適用性檢測項目及所用菌株見下表?？刂凭鷻z查培養(yǎng)基檢測項目試驗菌株沙門菌RV沙門菌增菌液培養(yǎng)基促

12、生長能力乙型副傷寒沙門菌抑制能力金黃色葡萄球菌木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力乙型副傷寒沙門菌三塘鐵瓊脂培養(yǎng)基指示能力乙型副傷寒沙門菌耐膽鹽革蘭陰性菌腸道菌增菌液培養(yǎng)基促生長能力大腸埃希菌、銅綠假單胞菌抑制能力金黃色葡萄球菌紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力大腸埃希菌、銅綠假單胞菌大腸埃希菌麥康凱液體培養(yǎng)基促生長能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力大腸埃希菌銅綠假單胞菌溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基促生長能力銅綠假單胞菌抑制能力大腸埃希菌金黃色葡萄球菌甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基促生長能力金黃色葡萄球菌抑制能力大腸埃希菌10、操作方法10

13、.1 RV沙門菌增菌液培養(yǎng)基適用性檢查分別接種不大于100cfu的乙型副傷寒沙門菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗菌的生長情況。促生長能力檢查標準：被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管和對照培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好。檢驗結(jié)果： 分別接種不少于100cfu的金黃色葡萄球菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗菌的生長情況。抑制能力檢查標準：被檢培養(yǎng)基管和對照培養(yǎng)基管試驗菌均不得生長檢驗結(jié)果： 10.2木糖賴氨酸脫氧膽酸

14、鹽瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查分別用涂布法接種不大于100cfu的乙型副傷寒沙門菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗菌的生長情況。促生長能力+指示能力檢查標準：被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基平板比較，被檢培養(yǎng)基平板和對照培養(yǎng)基平板試驗菌的菌落大小、生長情況、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。檢驗結(jié)果： 10.3三塘鐵瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查分別用涂布法接種不大于100cfu的乙型副傷寒沙門菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗菌的生長情況

15、。指示能力檢驗標準：被檢培養(yǎng)基平板和對照培養(yǎng)基平板試驗菌的菌落大小、形態(tài)特征及指示劑反應(yīng)均一致。檢驗結(jié)果： 10.4腸道菌增菌液培養(yǎng)基適用性檢查分別接種不大于100cfu的大腸埃希菌于銅綠假單胞菌被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗菌的生長情況。促生長能力檢查標準：被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管和對照培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好。檢驗結(jié)果： 分別接種不少于100cfu的金黃色葡萄球菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗

16、菌的生長情況。抑制能力檢查標準：被檢培養(yǎng)基管和對照培養(yǎng)基管試驗菌均不得生長檢驗結(jié)果： 10.5紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查分別用涂布法接種不大于100cfu的大腸埃希菌于銅綠假單胞菌被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗菌的生長情況。 促生長能力+指示能力檢查標準：被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基平板比較，被檢培養(yǎng)基平板和對照培養(yǎng)基平板試驗菌的菌落大小、生長情況、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。檢驗結(jié)果： 10.6麥康凱液體培養(yǎng)基適用性檢查分別接種不大于100cfu的大腸埃希菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條

17、件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗菌的生長情況。促生長能力檢查標準：被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管和對照培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好。檢驗結(jié)果： 分別接種不少于100cfu的大腸埃希菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗菌的生長情況。抑制能力檢查標準：被檢培養(yǎng)基管和對照培養(yǎng)基管試驗菌均不得生長檢驗結(jié)果： 10.7麥康凱瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查分別用涂布法接種不大于100cfu的大腸埃希菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與

18、對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗菌的生長情況。促生長能力+指示能力檢查標準：被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基平板比較，被檢培養(yǎng)基平板和對照培養(yǎng)基平板試驗菌的菌落大小、生長情況、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。檢驗結(jié)果： 10.8溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查分別用涂布法接種不大于100cfu的銅綠假單胞菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗菌的生長情況。促生長能力檢查標準：被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管和對照培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好。檢驗結(jié)果： 分別接種不少于100cfu的大腸埃希菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，并將被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基管比較，觀察被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基的變化及實驗菌的生長情況。抑制能力檢查標準：被檢培養(yǎng)基管和對照培養(yǎng)基管試驗菌均不得生長檢驗結(jié)果： 10.9甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查別用涂布法接種不大于100cfu的金黃色葡萄球菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，35條件下培養(yǎng)24h，