清喉咽合劑中連翹苷不同定量方法對比研究

1、清喉咽合劑中連翹昔不同定量方法對比研摘要：目的對比不同分析方法對清喉咽合劑中連翹 昔含量的影響。方法采用高效液相色譜法(hplc)和三波 長-分光光度計(jì)對清喉咽合劑中連翹昔進(jìn)行含量測定。結(jié)果 連翹昔在0. 025 10. 125 6 mg/ml范圍內(nèi)，分別在波長 278.5、248.0、272. 4 nm處測定吸收度時,aa與濃度c之 間呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系，回歸方程為aa=89. 705c-0. 041, r=0. 999 7；平均加樣回收率為97.48%, rsd二1. 88%。三波長 測定法與hplc測定結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 三 波長測定法對供試品制備要求簡單，操作簡便易行，試

2、驗(yàn)的 重復(fù)性好，效率髙，可以作為該制劑組分含量測定方法。關(guān)鍵詞：三波長-分光光度法；高效液相色譜法；清喉 咽合劑；連翹昔d0i： 10. 3969/j. issn. 1005-5304. 2013. 03.025中圖分類號：r284. 1文獻(xiàn)標(biāo)識碼：a文章編號： 1005-5304 (2013) 03-0065-02連翹為清熱解毒藥，歸肺、心、小腸經(jīng)，其主要功效為 清熱解毒、消腫散結(jié)、疏散風(fēng)熱，臨床上用于癰疽、凜痂、 乳癰、丹毒、風(fēng)熱感冒、溫病初起、溫?zé)崛霠I、高熱煩渴、 神昏發(fā)斑、熱淋澀痛等1。在中藥制劑中使用較為廣泛， 主要含有木脂素類（如連翹昔、連翹昔元、連翹酯昔a等）、 黃酮類（如蕓香昔

3、等）、三菇類（如齊墩果酸、熊果酸、白 樺脂酸等）。由于木脂素類化合物熱穩(wěn)定性較差，故在制劑 生產(chǎn)過程中很有可能受熱分解，故本研究選擇清喉咽合劑作 為考察對象，對制劑中的連翹昔進(jìn)行定量評價(jià)分析，以對含 有此類的中藥制劑生產(chǎn)提供參考。1儀器與試藥島津lc2010cht型高效液相色譜儀（四元泵、在線脫氣、 自動冷卻裝置、全自動進(jìn)樣器、紫外檢測器），uv-2401pc型 紫外可見分光光度計(jì)（日本島津），梅特勒-托利多ab135-s 雙量程電子天平（瑞士），as10200adt型超聲波清洗器。清喉咽合劑（中國人民解放軍第155醫(yī)院院內(nèi)制劑，批 號 20110725. 20110408、20111108）

4、,連翹昔對照品（科翔 生物科技有限公司，批號08-2011,經(jīng)檢測純度大于98%）； 色譜甲醇（山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司，批號 20110103061）,雙重蒸館水，其他試劑均為分析純。2溶液制備2. 1供試品溶液的制備精密吸取清喉咽合劑2 ml至100 ml容量瓶中，加水稀 釋至刻度，再精密取5 ml至10 ml容量瓶中，加入蒸纟留水 稀釋至刻度，即得。2.2對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)110 °c干燥至恒重的連翹昔對照品3. 14 mg, 置25inl容量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制 成濃度為0. 125 6 mg/ml的連翹昔對照品溶液。2.3陰性對照溶液的制備

5、取與清喉咽合劑處方藥材比例相同的中藥飲片適量，連 翹除外，粉碎過3號篩，取相當(dāng)量的處方用量于容量瓶中， 加入甲醇，按照供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。3三波長測定及方法學(xué)考察3. 1三波長的確定清喉咽合劑中連翹昔的最大吸收波長為278. 50 nm,而 在此波長處，提取液的其他組分對其有干擾。根據(jù)三波長分 光光度法測定原理，采用1 cm石英比色皿在波長200800 nm 范圍內(nèi)掃描，繪制供試品、對照品、陰性對照吸收曲線（見 圖1）,采用作圖法和計(jì)算法確定3個測定波長。如圖1所示，選取連翹昔最大吸收波長278. 5 nm為入1, 陰性對照溶液吸收波長248. 0 nm為入2,按作圖法粗略找到

6、 使陰性干擾的aa值為0的入3為273 nm。按公式 a a=a2-（入 3-入 2 ） a1+ （入 2-入 1 ） a3 / （入3 -入2） + （x2-x1），求得使干擾組分 a值為0的a3對應(yīng)的 波長入3,見表lo可知精選入3為272.4 nm。3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取0. 125 6 mg/ml的連翹昔對照品溶液1. 0、2. 0、 3.0、4.0、5.0 ml,分別置于5 ml容量瓶中，加入甲醇使 其溶解，搖勻，放至室溫，定容，即得。再分別在278.5、 248.0、272. 4 nm波長處測定吸收度，并扣除甲醇溶液空白， 以aa和濃度c進(jìn)行回歸計(jì)算，得回歸方程 aa=89.

7、 705c-0. 041,相關(guān)系數(shù) r=0. 999 7,可見，在 0. 025 1-0. 125 6 mg/ml范圍內(nèi)，連翹昔濃度與aa有良好的線性 關(guān)系，可按標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量分析。3. 3穩(wěn)定性試驗(yàn)按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并進(jìn)行穩(wěn)定性試 驗(yàn)，結(jié)果表明，樣品放置12 h以上，測得其吸光度值不變, 表明該供試品溶液在12 h內(nèi)成分穩(wěn)定。3.4重復(fù)性試驗(yàn)取供試品溶液5份，按上述方法重復(fù)測定連翹昔含量， 結(jié)果表明，連翹昔含量為0. 072 6 mg/ml, rsd=1. 37%,本方 法重復(fù)性良好。3. 5加樣回收率試驗(yàn)精密吸取清喉咽合劑1 ml于200 ml容量瓶中，再精密 加入連翹

8、昔對照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試 品溶液9份，根據(jù)所確定的測定條件，在該波長下測定供試 品吸收度，求得其相關(guān)參數(shù)。結(jié)果見表2。3. 6樣品含量測定取3個批號的清喉咽合劑，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供 試品溶液，在選定的3個波長處測定其吸收度，每個批號平 行3份，根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算連翹昔的含量。按照2010 年版中華人民共和國藥典清喉咽合劑項(xiàng)下高效液相色譜 (hplc)含量測定方法進(jìn)行定量分析。結(jié)果見表3o經(jīng)配對 檢驗(yàn)，t=l. 804 (n=9), p=0. 093,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4討論連翹昔屬于木脂素類化合物，其結(jié)構(gòu)母核中含有內(nèi)酯 環(huán)，在熱堿性溶液中容易開環(huán)發(fā)生分解，對光

9、線較為敏感， 長時間照射會改變其化學(xué)結(jié)構(gòu)，因此，在含有連翹的中藥制 劑生產(chǎn)過程中，很容易被破壞分解掉，在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)特別 注意熱不穩(wěn)定類成分的提取。在對該制劑進(jìn)行含量測定中發(fā) 現(xiàn)，市售的某些制劑中，連翹昔幾乎損失殆盡，甚至無法對 其進(jìn)行準(zhǔn)確定量。在對連翹昔進(jìn)行三波長定量分析時，考慮到連翹內(nèi)化學(xué) 成分的組成，其中香豆素類的藥理作用較為明顯，故采用香 豆素代表性的連翹昔作為對照品進(jìn)行光譜掃描及含量測定。 在連翹藥材中可能有同樣母核的化合物較多，可能對其定量 產(chǎn)生一定的影響，而三波長測定的方法能有效避開這一影 響，使含量測定結(jié)果更加準(zhǔn)確。在供試品制備過程中加入甲 醇處理時有絮狀沉淀產(chǎn)生，對試驗(yàn)結(jié)果有

10、一定的干擾，造成 回收率偏低，在改用水做溶劑處理時，沉淀較少，并且對回 收率影響較低，故而采用水作為溶劑制備供試品溶液。在光譜掃描中發(fā)現(xiàn)，干擾組分的最大吸收與連翹昔的最 大吸收波長相近，故入1選擇了連翹昔的最大吸收波長，在 選擇入2時避開干擾成分的最大吸收，選取了吸收度較為平 緩的248 nm作為檢測波長，經(jīng)過作圖法和計(jì)算法相結(jié)合尋 求最佳的入3位置，有效避開了溶液中其他成分的干擾。hplc首先要用色譜柱將化合物分離，再通過外標(biāo)法或內(nèi) 標(biāo)法進(jìn)行定量分析；而三波長測定法是通過官能團(tuán)紫外吸收 的吸光度不同而進(jìn)行定量。兩者測定原理截然不同，但通過 對比分析可以看出，二者測定結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且三 波長測定法較hplc更節(jié)約成本及溶劑，操