酵母菌細(xì)胞數(shù)量和大小的測(cè)定

1、實(shí)訓(xùn)五 酵母菌細(xì)胞數(shù)量、大小的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?1、學(xué)習(xí)利用血球計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)微生物細(xì)胞的方法、學(xué)習(xí)利用血球計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)微生物細(xì)胞的方法 2、學(xué)習(xí)測(cè)定微生物細(xì)胞大小的方法、學(xué)習(xí)測(cè)定微生物細(xì)胞大小的方法 二、實(shí)驗(yàn)材料二、實(shí)驗(yàn)材料1、菌種：釀酒酵母培養(yǎng)液、菌種：釀酒酵母培養(yǎng)液2、器材：血球計(jì)數(shù)板、目鏡測(cè)微尺、器材：血球計(jì)數(shù)板、目鏡測(cè)微尺三、實(shí)驗(yàn)原理及結(jié)果記錄三、實(shí)驗(yàn)原理及結(jié)果記錄 1、顯微直接計(jì)數(shù)法、顯微直接計(jì)數(shù)法 （血球計(jì)數(shù)板）（血球計(jì)數(shù)板） 血球計(jì)數(shù)扳的構(gòu)造 a.平面圖(中間平臺(tái)分為兩半，各刻有一個(gè)方格網(wǎng))b.側(cè)面圖(中間平臺(tái)與蓋玻片之間有高度為0.1毫米毫米的間隙)0.1毫米毫

2、米血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)網(wǎng)的分區(qū)和分格4X51mm/20格格1/400mm25X4如菌體位于中格的雙線上，計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左如菌體位于中格的雙線上，計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差?？膳恼蘸髲膱D片上計(jì)數(shù)。線不數(shù)右線，以減少誤差?？膳恼蘸髲膱D片上計(jì)數(shù)。 小格小格中格中格如菌體位于中格的雙線上，計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左如菌體位于中格的雙線上，計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。可拍照后從圖片上計(jì)數(shù)。線不數(shù)右線，以減少誤差?？膳恼蘸髲膱D片上計(jì)數(shù)。 小格小格中格中格每個(gè)大方格均被分成每個(gè)大方格均被分成400個(gè)小方格；根據(jù)規(guī)定每個(gè)大方格的個(gè)小方格；根據(jù)規(guī)定每個(gè)大方

3、格的邊長(zhǎng)為邊長(zhǎng)為1mm，則每一個(gè)大方格的面積為，則每一個(gè)大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片，蓋上蓋玻片后，在蓋玻片與載玻片之間的高度為后，在蓋玻片與載玻片之間的高度為0.1mm，所以計(jì)數(shù)室的，所以計(jì)數(shù)室的容積為容積為0.1 mm3（萬(wàn)分之一毫升）。（萬(wàn)分之一毫升）。 1mm/20格格5X4A表示五個(gè)中方格的總菌數(shù)；表示五個(gè)中方格的總菌數(shù)；B表示菌液的稀釋倍數(shù)。表示菌液的稀釋倍數(shù)。各中格中的菌數(shù)各中格中的菌數(shù)AB菌數(shù)菌數(shù)/ml二室二室平均數(shù)平均數(shù)12345第一室第一室第二室第二室1ml菌液中的總菌數(shù)菌液中的總菌數(shù)=A/525104B =50,000AB一般在每個(gè)計(jì)數(shù)室中取一般在每個(gè)計(jì)數(shù)室中取5個(gè)

4、中方格個(gè)中方格(左上、左下、右上、右下、左上、左下、右上、右下、中間）進(jìn)行計(jì)數(shù)，數(shù)兩個(gè)計(jì)數(shù)室?？膳恼蘸笤陔娔X上數(shù)。中間）進(jìn)行計(jì)數(shù)，數(shù)兩個(gè)計(jì)數(shù)室?？膳恼蘸笤陔娔X上數(shù)。1ml=1立方厘米立方厘米2、測(cè)微尺的構(gòu)造及測(cè)定原理 目鏡測(cè)微尺是一塊圓形玻片，在玻片中央刻有精確等分的刻度。測(cè)量時(shí)，將目鏡測(cè)微尺是一塊圓形玻片，在玻片中央刻有精確等分的刻度。測(cè)量時(shí)，將其放在接目鏡中的隔板上來(lái)測(cè)量經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象。由于不同目鏡、其放在接目鏡中的隔板上來(lái)測(cè)量經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象。由于不同目鏡、物鏡組合的放大倍數(shù)不相同，目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際表示的長(zhǎng)度也不一樣，因此物鏡組合的放大倍數(shù)不相同，目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際表

5、示的長(zhǎng)度也不一樣，因此目鏡測(cè)微尺測(cè)量微生物大小時(shí)須先用置于鏡臺(tái)上的鏡臺(tái)測(cè)微尺校正，以求出在目鏡測(cè)微尺測(cè)量微生物大小時(shí)須先用置于鏡臺(tái)上的鏡臺(tái)測(cè)微尺校正，以求出在一定放大倍數(shù)下，一定放大倍數(shù)下，目鏡測(cè)微尺每小格所代表的相對(duì)長(zhǎng)度目鏡測(cè)微尺每小格所代表的相對(duì)長(zhǎng)度。 鏡臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般將鏡臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般將lmmlmm等分為等分為100100格，格，是專門用來(lái)校正目鏡測(cè)微尺的。當(dāng)更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須重是專門用來(lái)校正目鏡測(cè)微尺的。當(dāng)更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須重新校正目鏡測(cè)微尺每一格所代表的長(zhǎng)度。也可用血球計(jì)數(shù)板來(lái)進(jìn)行標(biāo)定

6、，血球新校正目鏡測(cè)微尺每一格所代表的長(zhǎng)度。也可用血球計(jì)數(shù)板來(lái)進(jìn)行標(biāo)定，血球計(jì)數(shù)板每個(gè)小方格的計(jì)數(shù)板每個(gè)小方格的邊長(zhǎng)為邊長(zhǎng)為50m50m。目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定：目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定： 用低倍鏡觀察，當(dāng)看到血球計(jì)數(shù)板的小方格后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，用低倍鏡觀察，當(dāng)看到血球計(jì)數(shù)板的小方格后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺與小方格平行，移動(dòng)推動(dòng)器，尋找兩條完全重合使目鏡測(cè)微尺與小方格平行，移動(dòng)推動(dòng)器，尋找兩條完全重合的刻度線，計(jì)數(shù)兩重合刻度之間目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和小方格的的刻度線，計(jì)數(shù)兩重合刻度之間目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和小方格的格數(shù)。因?yàn)樾》礁衩扛耖L(zhǎng)格數(shù)。因?yàn)樾》礁衩扛耖L(zhǎng)50m，所以由下列公式可以算出目鏡，所以由下列公式可以算出目鏡

7、測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度。測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度。 兩重合線間計(jì)數(shù)室小方格數(shù)兩重合線間計(jì)數(shù)室小方格數(shù)50 目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度（目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度（m）= 兩重合線間目鏡測(cè)微尺格數(shù)兩重合線間目鏡測(cè)微尺格數(shù)1、記錄目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定結(jié)果，以及所測(cè)記錄目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定結(jié)果，以及所測(cè)量的酵母細(xì)胞大小。量的酵母細(xì)胞大小。目尺格數(shù)目尺格數(shù)=1cm=100格格物鏡物鏡目尺格數(shù)目尺格數(shù)小方格數(shù)小方格數(shù)目尺校正值（目尺校正值（m）410顯微鏡下對(duì)應(yīng)的測(cè)微尺格數(shù)顯微鏡下對(duì)應(yīng)的測(cè)微尺格數(shù)1 2 3 4 5 6 7 8 9 10平均值平均值（m） 長(zhǎng)長(zhǎng)寬寬（一）血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)1、檢查血球計(jì)數(shù)板、檢查血球計(jì)數(shù)板2、菌懸液加

8、樣（先蓋蓋玻片）、菌懸液加樣（先蓋蓋玻片）3、顯微鏡下計(jì)數(shù)并記錄、顯微鏡下計(jì)數(shù)并記錄4、清洗血球計(jì)數(shù)板、清洗血球計(jì)數(shù)板（用水沖洗，不要用硬物或刷子去刷）（用水沖洗，不要用硬物或刷子去刷）四、實(shí)驗(yàn)方法（二）酵母細(xì)胞大小的測(cè)定（二）酵母細(xì)胞大小的測(cè)定1、利用血球計(jì)數(shù)板在中、高倍鏡下（、利用血球計(jì)數(shù)板在中、高倍鏡下（10、40）標(biāo)定目鏡）標(biāo)定目鏡測(cè)微尺。測(cè)微尺。2、取一滴酵母菌菌懸液制成水浸片。、取一滴酵母菌菌懸液制成水浸片。3、移去血球計(jì)數(shù)板，換上酵母菌水浸片，先在低倍鏡下找到、移去血球計(jì)數(shù)板，換上酵母菌水浸片，先在低倍鏡下找到目的物，然后在高倍鏡下用目鏡測(cè)微尺來(lái)測(cè)量酵母菌菌體目的物，然后在高倍鏡下用目鏡測(cè)微尺來(lái)測(cè)量酵母菌菌體的長(zhǎng)，寬各占幾格（不足一格的部分估計(jì)到小數(shù)點(diǎn)后一位的長(zhǎng)，寬各占幾格（不足一格的部分估計(jì)到小數(shù)點(diǎn)后一位數(shù)）。測(cè)出的格數(shù)乘上目鏡測(cè)微尺每格的校正值，即等于數(shù)）。測(cè)出的格數(shù)乘上目鏡測(cè)微尺每格的校正值，即等于該菌的長(zhǎng)和寬。選取該菌的長(zhǎng)和寬。選取10個(gè)個(gè)不同大小不同大小酵母細(xì)胞進(jìn)行大小測(cè)定酵母細(xì)胞進(jìn)行大小測(cè)定并記錄結(jié)果（觀察到的是平均大?。?。并記錄結(jié)果（觀察到的是平均大?。?。 1、記錄目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定結(jié)果，以及所測(cè)記錄目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定結(jié)果，以