紫外可見(jiàn)分光光分析法實(shí)用教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1紫外可見(jiàn)紫外可見(jiàn)(kjin)分光光分析法分光光分析法第一頁(yè)，共106頁(yè)。 基于物質(zhì)光化學(xué)性質(zhì)而建立起來(lái)的分析方法稱(chēng)之為光化學(xué)分析法。 分為:光譜分析法和非光譜分析法。 光譜分析法是指在光（或其它能量）的作用下，通過(guò)測(cè)量物質(zhì)產(chǎn)生的發(fā)射光、吸收光或散射光的波長(zhǎng)(bchng)和強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行分析的方法。 第1頁(yè)/共106頁(yè)第二頁(yè)，共106頁(yè)。 在光譜在光譜(gungp)(gungp)分析中，依據(jù)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的分析方法稱(chēng)為吸光光度法分析中，依據(jù)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的分析方法稱(chēng)為吸光光度法, ,主要有主要有: : 紅外吸收光譜紅外吸收光譜(gungp)(gungp)：分子

2、振動(dòng)光譜：分子振動(dòng)光譜(gungp)(gungp)，吸收光波長(zhǎng)范圍，吸收光波長(zhǎng)范圍2.52.51000 1000 m ,m ,主要用于有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)鑒定。主要用于有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)鑒定。 紫外吸收光譜紫外吸收光譜(gungp)(gungp)：電子躍遷光譜：電子躍遷光譜(gungp)(gungp)，吸收光波長(zhǎng)范圍，吸收光波長(zhǎng)范圍200200400 nm400 nm（近紫外區(qū)）（近紫外區(qū)） ，可用于結(jié)構(gòu)鑒定和定量分析。，可用于結(jié)構(gòu)鑒定和定量分析。 可見(jiàn)吸收光譜可見(jiàn)吸收光譜(gungp)(gungp)：電子躍遷光譜：電子躍遷光譜(gungp)(gungp)，吸收光波長(zhǎng)范圍，吸收光波長(zhǎng)范圍40040075

3、0 nm 750 nm ，主要用于有色物質(zhì)的定量分析。，主要用于有色物質(zhì)的定量分析。 本章主要講授紫外可見(jiàn)吸光光度法。本章主要講授紫外可見(jiàn)吸光光度法。第2頁(yè)/共106頁(yè)第三頁(yè)，共106頁(yè)。1 1光的基本性質(zhì)光的基本性質(zhì)(xngzh)(xngzh) 光是一種電磁波，具有波粒二象性。光的光是一種電磁波，具有波粒二象性。光的波動(dòng)性可用波長(zhǎng)波動(dòng)性可用波長(zhǎng)、頻率、頻率、光速、光速c c、波、波數(shù)（數(shù)（cm-1cm-1）等參數(shù)來(lái)描述：）等參數(shù)來(lái)描述： = c = c ； 波數(shù)波數(shù) = 1/ = 1/ = = /c/c 光是由光子流組成，光子的能量：光是由光子流組成，光子的能量： E = h E = h =

4、 h c / = h c / （PlanckPlanck常數(shù)：常數(shù)：h=6.626 h=6.626 10 -34 J 10 -34 J S ) S )第3頁(yè)/共106頁(yè)第四頁(yè)，共106頁(yè)。第4頁(yè)/共106頁(yè)第五頁(yè)，共106頁(yè)。E = E2 - E1 = h ：量子化 ；選擇性吸收吸收曲線與最大吸收波長(zhǎng)(bchng) max用不同波長(zhǎng)(bchng)的單色光照射，測(cè)吸光度光的互補(bǔ)光的互補(bǔ)(h b)：藍(lán)：藍(lán) 黃黃M + 熱M + 熒光或磷光M + h M *基態(tài)基態(tài) 激發(fā)激發(fā)態(tài)態(tài)E1 （E） E2第5頁(yè)/共106頁(yè)第六頁(yè)，共106頁(yè)。同一種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)同一種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)(bchng)(bchng

5、)光的吸光度不同。光的吸光度不同。吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)(bchng)(bchng)稱(chēng)為最大吸收波長(zhǎng)稱(chēng)為最大吸收波長(zhǎng)(bchng)max(bchng)max不同濃度的同一種物質(zhì)，不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似其吸收曲線形狀相似maxmax不不變。而對(duì)于不同物質(zhì)，它們變。而對(duì)于不同物質(zhì)，它們的吸收曲線形狀和的吸收曲線形狀和maxmax則不則不同。同。第6頁(yè)/共106頁(yè)第七頁(yè)，共106頁(yè)。第7頁(yè)/共106頁(yè)第八頁(yè)，共106頁(yè)。物質(zhì)分子內(nèi)部三種運(yùn)動(dòng)形式：物質(zhì)分子內(nèi)部三種運(yùn)動(dòng)形式： 1. 1.電子電子(dinz)(dinz)相對(duì)于原子核的運(yùn)動(dòng)，相對(duì)于原子核的運(yùn)動(dòng)， 2.

6、 2.原子核在其平衡位置附近的相對(duì)振動(dòng)原子核在其平衡位置附近的相對(duì)振動(dòng) 3. 3.分子本身繞其重心的轉(zhuǎn)動(dòng)。分子本身繞其重心的轉(zhuǎn)動(dòng)。第8頁(yè)/共106頁(yè)第九頁(yè)，共106頁(yè)。即即e+e+v+v+r r evr evr 第9頁(yè)/共106頁(yè)第十頁(yè)，共106頁(yè)。 電子能級(jí)電子能級(jí)(nngj)(nngj)間躍遷的同時(shí)間躍遷的同時(shí)，總伴隨有振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)，總伴隨有振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)(nngj)(nngj)間的躍遷。即電子光譜中總包含有振間的躍遷。即電子光譜中總包含有振動(dòng)能級(jí)動(dòng)能級(jí)(nngj)(nngj)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)(nngj)(nngj)間躍遷產(chǎn)生的若干譜線而呈現(xiàn)寬譜帶間躍遷產(chǎn)生的若干譜線而呈現(xiàn)寬譜帶。第

7、10頁(yè)/共106頁(yè)第十一頁(yè)，共106頁(yè)。1（1 1） 轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)間的能量差轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)間的能量差rr：0.0050.0050.050eV0.050eV，躍遷產(chǎn)生吸收光譜，躍遷產(chǎn)生吸收光譜(gungp)(gungp)位于遠(yuǎn)紅外區(qū)位于遠(yuǎn)紅外區(qū)。遠(yuǎn)紅外光譜。遠(yuǎn)紅外光譜(gungp)(gungp)或分子轉(zhuǎn)動(dòng)光譜或分子轉(zhuǎn)動(dòng)光譜(gungp)(gungp)；1（2 2）振動(dòng)能級(jí)的能量差）振動(dòng)能級(jí)的能量差vv約為：約為：0.050.05eVeV，躍遷產(chǎn)生的吸收光譜躍遷產(chǎn)生的吸收光譜(gungp)(gungp)位于紅外區(qū)，紅外光譜位于紅外區(qū)，紅外光譜(gungp)(gungp)或分子振動(dòng)光譜或分子振動(dòng)光譜(gung

8、p)(gungp)；1（3 3）電子能級(jí)的能量差）電子能級(jí)的能量差ee較大較大1 120eV20eV。電子。電子躍遷產(chǎn)生的吸收光譜躍遷產(chǎn)生的吸收光譜(gungp)(gungp)在紫外在紫外可見(jiàn)光區(qū)，紫可見(jiàn)光區(qū)，紫外外可見(jiàn)光譜可見(jiàn)光譜(gungp)(gungp)或分子的電子光譜或分子的電子光譜(gungp)(gungp)。第11頁(yè)/共106頁(yè)第十二頁(yè)，共106頁(yè)。1（4 4）吸收光譜的波長(zhǎng)分布）吸收光譜的波長(zhǎng)分布(fnb)(fnb)是由產(chǎn)生譜帶是由產(chǎn)生譜帶的躍遷能級(jí)間的能量差所決定，反映了分子內(nèi)部能的躍遷能級(jí)間的能量差所決定，反映了分子內(nèi)部能級(jí)分布級(jí)分布(fnb)(fnb)狀況，是物質(zhì)定性的依據(jù)

9、。狀況，是物質(zhì)定性的依據(jù)。1（5 5）吸收譜帶的強(qiáng)度與分子偶極矩變化、躍遷）吸收譜帶的強(qiáng)度與分子偶極矩變化、躍遷幾率有關(guān)，也提供分子結(jié)構(gòu)的信息。通常將在最大幾率有關(guān)，也提供分子結(jié)構(gòu)的信息。通常將在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)得的摩爾吸光系數(shù)吸收波長(zhǎng)處測(cè)得的摩爾吸光系數(shù)maxmax也作為定性的也作為定性的依據(jù)。不同物質(zhì)的依據(jù)。不同物質(zhì)的maxmax有時(shí)可能相同，但有時(shí)可能相同，但maxmax不不一定相同；一定相同；1（6 6）吸收譜帶強(qiáng)度與該物質(zhì)分子吸收的光子數(shù)）吸收譜帶強(qiáng)度與該物質(zhì)分子吸收的光子數(shù)成正比，定量分析的依據(jù)。成正比，定量分析的依據(jù)。第12頁(yè)/共106頁(yè)第十三頁(yè)，共106頁(yè)。1 1紫外紫外可見(jiàn)吸

10、收光譜可見(jiàn)吸收光譜(x shu un p)(x shu un p) 有機(jī)化合物的紫外有機(jī)化合物的紫外可見(jiàn)吸收光譜可見(jiàn)吸收光譜(x shu un p)(x shu un p)，是其分子中外層價(jià)電子躍遷的結(jié)果（三種）：，是其分子中外層價(jià)電子躍遷的結(jié)果（三種）：電子、電子、電子、電子、n n電子。電子。分子軌道理論：一個(gè)成鍵軌道必定有一個(gè)相應(yīng)的反鍵軌道。通常分子軌道理論：一個(gè)成鍵軌道必定有一個(gè)相應(yīng)的反鍵軌道。通常(tngchng)(tngchng)外層電子均處于分子軌道的基態(tài)，即成鍵軌道或非鍵軌道上。外層電子均處于分子軌道的基態(tài)，即成鍵軌道或非鍵軌道上。 當(dāng)外層電子吸收紫外或可見(jiàn)輻射后，就從基態(tài)向激

11、發(fā)態(tài)當(dāng)外層電子吸收紫外或可見(jiàn)輻射后，就從基態(tài)向激發(fā)態(tài)( (反鍵軌道反鍵軌道) )躍遷。主要有四種躍遷所需能量躍遷。主要有四種躍遷所需能量大小順序?yàn)椋捍笮№樞驗(yàn)椋簄 n n n 第13頁(yè)/共106頁(yè)第十四頁(yè)，共106頁(yè)。 所需能量最大，電子只有吸收(xshu)遠(yuǎn)紫外光的能量才能發(fā)生躍遷。飽和烷烴的分子吸收(xshu)光譜出現(xiàn)在遠(yuǎn)紫外區(qū)(吸收(xshu)波長(zhǎng)105 105 ： 超高靈敏超高靈敏(ln mn)(ln mn)； =(6 =(61010）104 104 ： 高靈敏高靈敏(ln mn)(ln mn)； 2 2104 104 ： 不靈敏不靈敏(ln mn)(ln mn)。在數(shù)值上等于濃度為在

12、數(shù)值上等于濃度為1mol/L1mol/L、液層厚度為、液層厚度為1cm1cm時(shí)該溶液時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下的吸光度。在某一波長(zhǎng)下的吸光度。第47頁(yè)/共106頁(yè)第四十八頁(yè)，共106頁(yè)。 標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定未知溶液的濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時(shí)），這種現(xiàn)象稱(chēng)為對(duì)朗伯比耳定律的偏離。 引起這種偏離的因素（兩大類(lèi)）：一類(lèi)是物理性因素，即儀器(yq)的非理想引起的；另一類(lèi)是化學(xué)性因素。第48頁(yè)/共106頁(yè)第四十九頁(yè)，共106頁(yè)。非單色光、雜散光、非平行入射非單色光、雜散光、非平行入射光都會(huì)引起對(duì)朗伯光都會(huì)引起對(duì)朗伯比耳定律的比耳定律的偏離，最主要的是非單色光作為偏離，最主要的是非單色

13、光作為入射光引起的偏離。入射光引起的偏離。第49頁(yè)/共106頁(yè)第五十頁(yè)，共106頁(yè)。 假設(shè)由波長(zhǎng)為1和2的兩單色光組成(z chn)的入射光通過(guò)濃度為c的溶液，則： 1lg（o1 /t1 ）1bc 2lg(o2 /t2 ）2bc故： t1 o1101bc ； t2 o2102bc式中o1、o2分別為1、2 的入射光強(qiáng)度； t1、t2分別為1、2 的透射光強(qiáng)度； 1、2分別為1、2的摩爾吸光系數(shù)；第50頁(yè)/共106頁(yè)第五十一頁(yè)，共106頁(yè)。第51頁(yè)/共106頁(yè)第五十二頁(yè)，共106頁(yè)。 A A總總 =A1 + lg2 - lg(1 =A1 + lg2 - lg(11010bc ) bc ) = 0

14、 = 0； 即：即：1=2 =1=2 = 則：則： A A總總 lglg（o/o/t t）bcbc 0 0 若若 0 0 ；即；即21 20,bc0, lg lg（10bc 10bc ）值隨）值隨c c值增大而增大值增大而增大，則標(biāo)準(zhǔn)曲線偏離直線向，則標(biāo)準(zhǔn)曲線偏離直線向c c軸彎曲，即負(fù)偏離軸彎曲，即負(fù)偏離；反之；反之(fnzh)(fnzh)，則向，則向A A軸彎曲，即正偏離。軸彎曲，即正偏離。 很小時(shí)，即很小時(shí)，即1212： 第52頁(yè)/共106頁(yè)第五十三頁(yè)，共106頁(yè)。定在待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波定在待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)且吸收曲線較平坦處。長(zhǎng)且吸收曲線較平坦處。第53頁(yè)/共106頁(yè)第五十四頁(yè)，

15、共106頁(yè)。朗朗比耳定律的假定：所有的吸光質(zhì)點(diǎn)之間不比耳定律的假定：所有的吸光質(zhì)點(diǎn)之間不發(fā)生相互作用；假定只有在稀溶液發(fā)生相互作用；假定只有在稀溶液(c10-(c10 c 10 2 mol/L 2 mol/L 時(shí)，吸光質(zhì)時(shí)，吸光質(zhì)點(diǎn)間可能發(fā)生締合等相互作用，直接影響了對(duì)點(diǎn)間可能發(fā)生締合等相互作用，直接影響了對(duì)光的吸收光的吸收(xshu)(xshu)。故：朗伯故：朗伯比耳定律只適用于稀溶液比耳定律只適用于稀溶液 第54頁(yè)/共106頁(yè)第五十五頁(yè)，共106頁(yè)。不相同。故：此時(shí)溶液不相同。故：此時(shí)溶液pH pH 對(duì)測(cè)定對(duì)測(cè)定有重要影響。有重要影響。第55頁(yè)/共106頁(yè)第五十六頁(yè)，共106頁(yè)。第二節(jié)第二

16、節(jié) 紫外紫外可見(jiàn)可見(jiàn)(kjin)(kjin)分光分光光度計(jì)光度計(jì)第56頁(yè)/共106頁(yè)第五十七頁(yè)，共106頁(yè)。儀器儀器(yq)(yq)第57頁(yè)/共106頁(yè)第五十八頁(yè)，共106頁(yè)。第58頁(yè)/共106頁(yè)第五十九頁(yè)，共106頁(yè)。光源光源(gungyun)單色器單色器樣品樣品(yngpn)室室檢測(cè)器檢測(cè)器顯示顯示1. 1. 光源光源 在整個(gè)紫外光區(qū)或可見(jiàn)光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命。在整個(gè)紫外光區(qū)或可見(jiàn)光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命。 可見(jiàn)光區(qū)：鎢燈作為光源，其輻射波長(zhǎng)范圍在可見(jiàn)光區(qū)：鎢燈作為光源，其輻射波長(zhǎng)范圍在32

17、03202500 2500 nmnm。 紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射185185400 400 nmnm的連續(xù)光譜。的連續(xù)光譜。（動(dòng)畫(huà)動(dòng)畫(huà)）第59頁(yè)/共106頁(yè)第六十頁(yè)，共106頁(yè)。 將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任(yrn) 波長(zhǎng)單色光的光學(xué)系統(tǒng)。 入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器； 準(zhǔn)光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束； 色散元件：將復(fù)合光分解成單色光；棱鏡或光柵；聚焦裝置聚焦裝置(zhungzh)(zhungzh)：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；出射狹縫。出射狹縫。第60頁(yè)/共

18、106頁(yè)第六十一頁(yè)，共106頁(yè)。 樣品室放置各種類(lèi)型的吸收池（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見(jiàn)區(qū)一般用玻璃池。4. 檢測(cè)器 利用光電效應(yīng)將透過(guò)(tu u)吸收池的光信號(hào)變成可測(cè)的電信號(hào)，常用的有光電池、光電管或光電倍增管。5. 5. 結(jié)果顯示記錄系統(tǒng)結(jié)果顯示記錄系統(tǒng)(xtng)(xtng) 檢流計(jì)、數(shù)字顯示、檢流計(jì)、數(shù)字顯示、微機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和微機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和結(jié)果處理。結(jié)果處理。第61頁(yè)/共106頁(yè)第六十二頁(yè)，共106頁(yè)。1.1.單光束：簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)單光束：簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波

19、處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。的穩(wěn)定性。2.2.雙光束：自動(dòng)記錄，快速雙光束：自動(dòng)記錄，快速(kui s)(kui s)全波全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。第62頁(yè)/共106頁(yè)第六十三頁(yè)，共106頁(yè)。第63頁(yè)/共106頁(yè)第六十四頁(yè)，共106頁(yè)。第64頁(yè)/共106頁(yè)第六十五頁(yè)，共106頁(yè)。第三節(jié)第三節(jié) 顯色與測(cè)量條件顯色與測(cè)量條件(tiojin)的

20、選擇的選擇第65頁(yè)/共106頁(yè)第六十六頁(yè)，共106頁(yè)。1.1.選擇顯色反應(yīng)時(shí)，應(yīng)考慮的因素選擇顯色反應(yīng)時(shí)，應(yīng)考慮的因素(yn (yn s)s)： 靈敏度高、選擇性高、生成物穩(wěn)定、靈敏度高、選擇性高、生成物穩(wěn)定、顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)明顯吸收，兩種有顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)明顯吸收，兩種有色物最大吸收波長(zhǎng)之差：色物最大吸收波長(zhǎng)之差：“對(duì)比度對(duì)比度”，要，要求求 60nm 60nm。第66頁(yè)/共106頁(yè)第六十七頁(yè)，共106頁(yè)。第67頁(yè)/共106頁(yè)第六十八頁(yè)，共106頁(yè)。第68頁(yè)/共106頁(yè)第六十九頁(yè)，共106頁(yè)。無(wú)機(jī)顯色劑：無(wú)機(jī)顯色劑： 硫氰酸鹽、鉬酸銨、過(guò)氧化氫硫氰酸鹽、鉬酸銨、過(guò)氧化氫(u (u y

21、n hu qn)yn hu qn)等幾種。等幾種。有機(jī)顯色劑：種類(lèi)繁多有機(jī)顯色劑：種類(lèi)繁多 偶氮類(lèi)顯色劑：本身是有色物質(zhì)，生成偶氮類(lèi)顯色劑：本身是有色物質(zhì)，生成配合物后，顏色發(fā)生明顯變化；具有性質(zhì)穩(wěn)配合物后，顏色發(fā)生明顯變化；具有性質(zhì)穩(wěn)定、顯色反應(yīng)靈敏度高、選擇性好、對(duì)比度定、顯色反應(yīng)靈敏度高、選擇性好、對(duì)比度大等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用最廣泛。偶氮胂大等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用最廣泛。偶氮胂、PARPAR等。等。 第69頁(yè)/共106頁(yè)第七十頁(yè)，共106頁(yè)。第70頁(yè)/共106頁(yè)第七十一頁(yè)，共106頁(yè)。1.1.顯色劑用量顯色劑用量 吸光度吸光度(gungd)A(gungd)A與顯色劑用量與顯色劑用量CRCR的關(guān)系的關(guān)系會(huì)出

22、現(xiàn)如圖所示的幾種情況。選擇曲線變化會(huì)出現(xiàn)如圖所示的幾種情況。選擇曲線變化平坦處。平坦處。第71頁(yè)/共106頁(yè)第七十二頁(yè)，共106頁(yè)。較大較大一般盡量采用水相測(cè)定一般盡量采用水相測(cè)定第72頁(yè)/共106頁(yè)第七十三頁(yè)，共106頁(yè)。v1. 1.加入掩蔽劑：加入掩蔽劑：v選擇掩蔽劑的原則是：選擇掩蔽劑的原則是：v 掩蔽劑不與待測(cè)組分反應(yīng)掩蔽劑不與待測(cè)組分反應(yīng)(fnyng)(fnyng)；v 掩蔽劑本身及掩蔽劑與干擾組分的掩蔽劑本身及掩蔽劑與干擾組分的反應(yīng)反應(yīng)(fnyng)(fnyng)產(chǎn)物不干擾待測(cè)組分的產(chǎn)物不干擾待測(cè)組分的測(cè)定。測(cè)定。 第73頁(yè)/共106頁(yè)第七十四頁(yè)，共106頁(yè)。第74頁(yè)/共106頁(yè)第

23、七十五頁(yè)，共106頁(yè)。第75頁(yè)/共106頁(yè)第七十六頁(yè)，共106頁(yè)。1.1.選擇適當(dāng)?shù)娜肷洳ㄩL(zhǎng)選擇適當(dāng)?shù)娜肷洳ㄩL(zhǎng) 一般應(yīng)該選擇一般應(yīng)該選擇maxmax為入射光波長(zhǎng)。但如為入射光波長(zhǎng)。但如果果maxmax處有共存組分處有共存組分(zfn)(zfn)干擾時(shí)，則應(yīng)考干擾時(shí)，則應(yīng)考慮選擇靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長(zhǎng)。慮選擇靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長(zhǎng)。第76頁(yè)/共106頁(yè)第七十七頁(yè)，共106頁(yè)。為什么需要使用參比溶液？為什么需要使用參比溶液？ 測(cè)得的的吸光度真正反映測(cè)得的的吸光度真正反映(fnyng)(fnyng)待測(cè)待測(cè)溶液吸光強(qiáng)度。溶液吸光強(qiáng)度。參比溶液的選擇一般遵循以下原則：參比溶液的

24、選擇一般遵循以下原則： 若僅待測(cè)組分與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)物在測(cè)定若僅待測(cè)組分與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)物在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收，其它所加試劑均無(wú)吸收，用波長(zhǎng)處有吸收，其它所加試劑均無(wú)吸收，用純?nèi)軇ㄋ內(nèi)軇ㄋ? )作參比溶液；作參比溶液； 第77頁(yè)/共106頁(yè)第七十八頁(yè)，共106頁(yè)。第78頁(yè)/共106頁(yè)第七十九頁(yè)，共106頁(yè)。 不同的透光度讀數(shù)不同的透光度讀數(shù)(dsh)(dsh)，產(chǎn)生的誤差大小不，產(chǎn)生的誤差大小不同：同： lgT=bclgT=bc微分：微分：dlgTdlgT0.434dlnT= - 0.434T-1 dT=b 0.434dlnT= - 0.434T-1 dT=b dcdc兩式相除得：兩式相除得：

25、 dc/c= dc/c= （ 0.434 / TlgT 0.434 / TlgT ）dT dT 以有限值表示可得：以有限值表示可得： c/c= c/c=（0.434/TlgT0.434/TlgT）T T 第79頁(yè)/共106頁(yè)第八十頁(yè)，共106頁(yè)。）不僅與儀）不僅與儀第80頁(yè)/共106頁(yè)第八十一頁(yè)，共106頁(yè)。設(shè)：設(shè)：T=1%T=1%，則可繪出溶液，則可繪出溶液(rngy)(rngy)濃度相濃度相對(duì)誤差對(duì)誤差c/cc/c與其透光度與其透光度T T 的關(guān)系曲線。的關(guān)系曲線。如圖所示：如圖所示：當(dāng)：當(dāng)：T =1%T =1%，T T在在20%20%65%65%之間時(shí)，濃度相之間時(shí)，濃度相對(duì)誤差較小，最

26、佳讀數(shù)范圍。對(duì)誤差較小，最佳讀數(shù)范圍。 第81頁(yè)/共106頁(yè)第八十二頁(yè)，共106頁(yè)。6565( (吸吸 可求出濃度可求出濃度(nngd)(nngd)相對(duì)誤差最小時(shí)的相對(duì)誤差最小時(shí)的透光度透光度TminTmin為：為： Tmin Tmin36.8%, Amin36.8%, Amin0.4340.434第82頁(yè)/共106頁(yè)第八十三頁(yè)，共106頁(yè)。1.1.合成新的高靈敏度有機(jī)顯色劑合成新的高靈敏度有機(jī)顯色劑2.2.采用分離富集和測(cè)定相結(jié)合采用分離富集和測(cè)定相結(jié)合3.3.采用三元采用三元( (多元多元) )配合物顯色體系配合物顯色體系 由一個(gè)中心金屬離子由一個(gè)中心金屬離子(lz)(lz)與兩種與兩種(

27、 (或兩或兩種以上種以上) )不同配位體形成的配合物，稱(chēng)為三元不同配位體形成的配合物，稱(chēng)為三元( (多元多元) )配合物。配合物。 第83頁(yè)/共106頁(yè)第八十四頁(yè)，共106頁(yè)。第84頁(yè)/共106頁(yè)第八十五頁(yè)，共106頁(yè)。第85頁(yè)/共106頁(yè)第八十六頁(yè)，共106頁(yè)。第四節(jié)第四節(jié) 分光分光(fn un)(fn un)光度測(cè)定方光度測(cè)定方法法第86頁(yè)/共106頁(yè)第八十七頁(yè)，共106頁(yè)。1.1.單組分的測(cè)定單組分的測(cè)定 通常采用通常采用 A-C A-C 標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測(cè)定。法定量測(cè)定。2.2.多組分的同時(shí)測(cè)定多組分的同時(shí)測(cè)定 若各組分的吸收若各組分的吸收(xshu)(xshu)曲線互不重疊，則

28、曲線互不重疊，則可在各自最大吸收可在各自最大吸收(xshu)(xshu)波長(zhǎng)處分別進(jìn)行測(cè)定。這本波長(zhǎng)處分別進(jìn)行測(cè)定。這本質(zhì)上與單組分測(cè)定沒(méi)有區(qū)別。質(zhì)上與單組分測(cè)定沒(méi)有區(qū)別。 第87頁(yè)/共106頁(yè)第八十八頁(yè)，共106頁(yè)。第88頁(yè)/共106頁(yè)第八十九頁(yè)，共106頁(yè)。 普通分光光度法一般只適于測(cè)定微量組分，當(dāng)待測(cè)組分含量較高時(shí)，將產(chǎn)生較大(jio d)的誤差。需采用示差法。 即提高入射光強(qiáng)度，并采用濃度稍低于待測(cè)溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作參比溶液。第89頁(yè)/共106頁(yè)第九十頁(yè)，共106頁(yè)。第90頁(yè)/共106頁(yè)第九十一頁(yè)，共106頁(yè)。 x x s =b(cx s =b(cx cs cs ）=bc=bc 測(cè)得

29、的吸光度相當(dāng)于普通法中待測(cè)溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度之差測(cè)得的吸光度相當(dāng)于普通法中待測(cè)溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度之差。 示差法測(cè)得的吸光度與示差法測(cè)得的吸光度與cc呈直線呈直線(zhxin)(zhxin)關(guān)系。由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的關(guān)系。由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的cc值，則待測(cè)溶液濃度值，則待測(cè)溶液濃度cx cx ： cx = cs + c cx = cs + c 第91頁(yè)/共106頁(yè)第九十二頁(yè)，共106頁(yè)。普通法：普通法： cs cs的的T=10%T=10%；cxcx的的T=5%T=5%示差法：示差法： cs cs 做參比，調(diào)做參比，調(diào)T=100%T=100%則：則： cx cx的的T=50% T=50

30、% ；標(biāo)尺；標(biāo)尺(bioch)(bioch)擴(kuò)展擴(kuò)展1010倍倍第92頁(yè)/共106頁(yè)第九十三頁(yè)，共106頁(yè)。 不需空白溶液作參比；但需要兩個(gè)單色器獲得兩束單色光(1和2)；以參比波長(zhǎng)1處的吸光度A1作為參比，來(lái)消除干擾。 在分析渾濁(hnzhu)或背景吸收較大的復(fù)雜試樣時(shí)顯示出很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測(cè)量精密度等方面都比單波長(zhǎng)法有所提高。 第93頁(yè)/共106頁(yè)第九十四頁(yè)，共106頁(yè)。第94頁(yè)/共106頁(yè)第九十五頁(yè)，共106頁(yè)。 關(guān)鍵問(wèn)題是測(cè)量波長(zhǎng)關(guān)鍵問(wèn)題是測(cè)量波長(zhǎng)22和參比波長(zhǎng)和參比波長(zhǎng)11的選的選擇與組合。擇與組合。 以?xún)山M分以?xún)山M分x x和和y y的雙波長(zhǎng)法測(cè)定為例：的雙波長(zhǎng)法測(cè)定為例： 設(shè)：設(shè)：x x為待測(cè)組分，為待測(cè)組分，y y為干擾組分，二者的吸為干擾組分，二者的吸光度差分別為光度差分別為 x x和和y y， 則該體系則該體系(tx)(tx)的總吸光度差的總吸光度差x+yx+y為：為： x+y = x+y = x + x + y y 如何選擇波長(zhǎng)如何選擇波長(zhǎng)1 1 、22有一定的要求。有一定的要求。第95頁(yè)/共106頁(yè)第九十六頁(yè)，共106頁(yè)。第96頁(yè)/共106頁(yè)第九十七頁(yè)，共106頁(yè)。 選定的波長(zhǎng)1和2處干擾組分應(yīng)具有相同吸光度， 即：Ay = y2 y1 = 0故： x+y = x=(x2x1)bcx 此時(shí)