正相色譜柱的使用

1、正相液相色譜柱的使用與維護(hù)正相液相色譜柱的使用與維護(hù) 色譜柱分類色譜柱分類正相色譜柱活化正相色譜柱活化色譜柱沖洗與再生色譜柱沖洗與再生樣品樣品溶于有機(jī)溶劑溶于有機(jī)溶劑溶于水溶于水溶于四氫呋喃溶于四氫呋喃非離子化非離子化離子化離子化溶于有機(jī)溶劑溶于有機(jī)溶劑溶于水溶于水溶于正己烷溶于正己烷溶于甲醇或甲醇溶于甲醇或甲醇/ /水水或乙腈或乙腈或乙腈或乙腈/ /水水用硅膠的正相模式用硅膠的正相模式用鍵合相的正相模式用鍵合相的正相模式用鍵合相的反相模式用鍵合相的反相模式用鍵合相的反相模式用鍵合相的反相模式低分子凝膠滲透色譜低分子凝膠滲透色譜用鍵合相的反相模式用鍵合相的反相模式抑制電離反相鍵合相色譜抑制電離

2、反相鍵合相色譜離子對(duì)鍵合相的反相模式離子對(duì)鍵合相的反相模式用硅膠的正相模式用硅膠的正相模式離子交換模式離子交換模式凝膠滲透色譜凝膠滲透色譜凝膠過濾色譜凝膠過濾色譜大孔填料的離子交換模式大孔填料的離子交換模式用大孔填料的反相模式用大孔填料的反相模式分子量分子量20002000分子量分子量2000 流動(dòng)相流動(dòng)相固定相固定相 - 極性極性流動(dòng)相流動(dòng)相(己烷己烷, 庚烷庚烷)- 非極性非極性極性極性物質(zhì)后出峰物質(zhì)后出峰正相色譜正相色譜正相色譜柱的特點(diǎn)正相色譜柱的特點(diǎn)正相色譜比反相色譜柱壓低正相色譜比反相色譜柱壓低使用的溶劑容易旋蒸除去使用的溶劑容易旋蒸除去吡咯等蒸發(fā)性溶劑徹底改善了堿性有吡咯等蒸發(fā)性溶

3、劑徹底改善了堿性有機(jī)化合物在機(jī)化合物在B型球形硅膠型球形硅膠, Diol和和PEG正相液相色譜柱上的峰形。正相液相色譜柱上的峰形。色譜柱的分類色譜柱的分類按固定相按固定相作用性質(zhì)作用性質(zhì)分類分類高效反相液相色譜柱高效反相液相色譜柱 高效正相液相色譜柱高效正相液相色譜柱 高效親水液相色譜柱高效親水液相色譜柱 高效離子交換液相色譜柱高效離子交換液相色譜柱 InnovationTM高效多功能液相色譜柱高效多功能液相色譜柱 高效手性液相色譜柱高效手性液相色譜柱 高效高效GPCGPC凝膠液相色譜柱凝膠液相色譜柱 高效高效H Hilicilic液相色譜柱液相色譜柱 色譜柱的分類色譜柱的分類按基質(zhì)材按基質(zhì)材

4、料分類料分類 硅膠基質(zhì)柱硅膠基質(zhì)柱 聚合物柱聚合物柱ZrO2柱等柱等按柱子尺按柱子尺寸分類寸分類 毛細(xì)管柱毛細(xì)管柱 微柱微柱 窄徑柱窄徑柱 常規(guī)柱常規(guī)柱 制備柱制備柱 半制備柱半制備柱 色譜柱的分類色譜柱的分類正相液相色譜柱正相液相色譜柱1、氨基柱、氨基柱2、硅膠柱、硅膠柱4、Diol柱柱3、氰基柱、氰基柱正反相使正反相使用均可用均可絕不可沾絕不可沾水水正反相使正反相使用均可用均可正相色譜柱的活化正相色譜柱的活化活化注意要點(diǎn)：活化注意要點(diǎn)：1、保存溶劑：一般正相新柱出廠是用、保存溶劑：一般正相新柱出廠是用95%的正己烷：的正己烷：5%乙乙醇或純異丙醇或正己烷保存；醇或純異丙醇或正己烷保存；例外

5、：比如氰基柱既可以用作正相柱，也可以用作反相柱，例外：比如氰基柱既可以用作正相柱，也可以用作反相柱，一些廠家就用純甲醇封柱。一些廠家就用純甲醇封柱。2、異丙醇過渡：粘度大高柱壓；小流速：、異丙醇過渡：粘度大高柱壓；小流速：0.2mLmin-1；先先流路后過柱；約流路后過柱；約0.5h后換上流動(dòng)相；若有緩沖鹽，則應(yīng)先后換上流動(dòng)相；若有緩沖鹽，則應(yīng)先用不含鹽的同比例的流動(dòng)相過柱，避免析出。用不含鹽的同比例的流動(dòng)相過柱，避免析出。氨基柱柱效檢測氨基柱柱效檢測流動(dòng)相：流動(dòng)相：10乙酸乙酯乙酸乙酯90正己烷正己烷 流速：流速：1.0mLmin-1標(biāo)準(zhǔn)溶液：乙苯（或甲苯）苯甲酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液：乙苯（或甲苯）

6、苯甲酸甲酯檢測波長：檢測波長：254nm 參考參考(標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)JB5226-91)液相色譜儀測試用標(biāo)準(zhǔn)色譜液相色譜儀測試用標(biāo)準(zhǔn)色譜柱柱 此方法同時(shí)適用氰此方法同時(shí)適用氰基柱、硅膠柱基柱、硅膠柱氨基柱使用后沖洗氨基柱使用后沖洗正相條件適用后：正相條件適用后： 首先首先50倍柱體積異丙醇（注意低流速）倍柱體積異丙醇（注意低流速） 其次其次50倍柱體積甲醇倍柱體積甲醇 最后異丙醇過渡到正相流動(dòng)相條件最后異丙醇過渡到正相流動(dòng)相條件柱子長期不用的情況下，沖洗干凈后用異丙醇或者柱子長期不用的情況下，沖洗干凈后用異丙醇或者正己烷保存。正己烷保存。色譜柱再生色譜柱再生柱子使用一定時(shí)間后：柱效下降、老柱子使用一定

7、時(shí)間后：柱效下降、老化，可以用以下方法清洗柱子恢復(fù)柱化，可以用以下方法清洗柱子恢復(fù)柱性能性能方案方案1：依次用甲醇、異丙醇、氯仿、正己烷：依次用甲醇、異丙醇、氯仿、正己烷、 氯 仿 、 異 丙 醇 、 甲 醇 沖 柱 子 （ 各 以、 氯 仿 、 異 丙 醇 、 甲 醇 沖 柱 子 （ 各 以0.5ml/min的流速，的流速，20倍柱體積），再換流動(dòng)倍柱體積），再換流動(dòng)相相 色譜柱再生色譜柱再生方案方案2：清洗時(shí)依次用：清洗時(shí)依次用10倍柱體積的下列溶液沖倍柱體積的下列溶液沖洗：洗：95水水/5乙腈乙腈 THF四氫呋喃四氫呋喃 95乙腈乙腈/5水水 再走流動(dòng)相即可再走流動(dòng)相即可若反相使用后柱效

8、下降再生沖洗方法同上過程，并保若反相使用后柱效下降再生沖洗方法同上過程，并保持持95乙腈乙腈/5水繼續(xù)沖洗，以低流速水繼續(xù)沖洗，以低流速0.2-0.5mL/min過夜沖洗過夜沖洗 色譜柱再生（除水再生）色譜柱再生（除水再生）諸如保留時(shí)間漂移等選擇性改變的一些色譜癥狀，可以歸諸如保留時(shí)間漂移等選擇性改變的一些色譜癥狀，可以歸因于因于 固定相的改變，但是填料可能還是完好的。這是因固定相的改變，但是填料可能還是完好的。這是因?yàn)檎嗌V固定相的水分含量常常是個(gè)影響選擇性的關(guān)鍵為正相色譜固定相的水分含量常常是個(gè)影響選擇性的關(guān)鍵參數(shù)參數(shù) ，大部分溶劑都內(nèi)含有小部分的溶解水分，大部分溶劑都內(nèi)含有小部分的溶解

9、水分 ，柱子在，柱子在長期使用后吸附的水分使柱效下降，此時(shí)應(yīng)除水使柱效恢長期使用后吸附的水分使柱效下降，此時(shí)應(yīng)除水使柱效恢復(fù)。復(fù)。除水方案：用含除水方案：用含2.5 % 二甲氧基丙烷（二甲氧基丙烷（dimethoxypropane）和）和2.5 % 冰醋酸的正己烷沖洗色譜柱冰醋酸的正己烷沖洗色譜柱30個(gè)柱體積，可以個(gè)柱體積，可以去除色譜柱中水分并恢復(fù)色譜柱原來或所需要的選擇性去除色譜柱中水分并恢復(fù)色譜柱原來或所需要的選擇性 氰基柱的使用氰基柱的使用氰基柱作反相色譜，操作和維護(hù)和氰基柱作反相色譜，操作和維護(hù)和C18柱完全相同柱完全相同 ，但是與氨基柱一樣，反相使用時(shí)但是與氨基柱一樣，反相使用時(shí)-

10、NH2與與-CN會(huì)水解。會(huì)水解。尤其尤其 pH在在1.5-7.0范圍以外這種極端酸性或堿性條件下范圍以外這種極端酸性或堿性條件下柱壽命會(huì)下降很快，使用時(shí)應(yīng)注意。柱壽命會(huì)下降很快，使用時(shí)應(yīng)注意。氰基柱用于正相使用時(shí)沒什么問題，當(dāng)柱子使用一定氰基柱用于正相使用時(shí)沒什么問題，當(dāng)柱子使用一定時(shí)間后，柱效下降，老化，可按如下清洗方法恢復(fù)柱時(shí)間后，柱效下降，老化，可按如下清洗方法恢復(fù)柱性能。清洗時(shí)依次用性能。清洗時(shí)依次用10倍柱體積的下列溶液沖洗：氯倍柱體積的下列溶液沖洗：氯仿、異丙醇、二氯甲烷再走流動(dòng)相即可。仿、異丙醇、二氯甲烷再走流動(dòng)相即可。附錄：色譜柱柱內(nèi)體積和平衡時(shí)間附錄：色譜柱柱內(nèi)體積和平衡時(shí)間單次樣品運(yùn)行時(shí)間單次樣品運(yùn)行時(shí)間 = 分析時(shí)間分析時(shí)間 + 色譜柱平衡時(shí)間色譜柱平衡時(shí)間色譜柱平衡時(shí)間色譜柱平衡時(shí)間 = 10倍柱內(nèi)體積倍柱內(nèi)體積 流速流速4.6 x 500.5 m 5 min4.6 x 300.3 mL 3 min4.6 x 150.15 mL 1.5 min4.6 x 1501.54 mL 15 min4.6 x 2502.57 mL 25min2.1 x 500.10 mL 5 min60 sec2