白假絲酵母菌實用教案

1、重點1.白色假絲酵母菌的生物學特性2.白色假絲酵母菌的微生物學(wi shn w xu)檢查第1頁/共40頁第一頁，共41頁。 真菌學概述(i sh) 概念： 是一類有典型(dinxng)的細胞核和完善的細胞器，不含葉綠素，無根、莖、葉分化的真核細胞型微生物。 第2頁/共40頁第二頁，共41頁。真菌真菌(zhnjn)(zhnjn)的形態(tài)特性的形態(tài)特性（一）單細胞真菌呈圓形，如酵母菌。（一）單細胞真菌呈圓形，如酵母菌。（二）多細胞真菌由菌絲和孢子組成，（二）多細胞真菌由菌絲和孢子組成， 稱絲狀菌或霉菌。稱絲狀菌或霉菌。菌絲和孢子的形態(tài)因菌而異，是鑒定菌絲和孢子的形態(tài)因菌而異，是鑒定(jindng

2、)(jindng)真真菌的重要依據(jù)。孢子又分為多種，如葉菌的重要依據(jù)。孢子又分為多種，如葉狀孢子、分生孢子和孢子囊孢子等。狀孢子、分生孢子和孢子囊孢子等。 第3頁/共40頁第三頁，共41頁。單細胞真菌酵母菌：孢子，無菌絲類酵母菌：芽生孢子，假菌絲多細胞真菌 絲狀菌（霉菌(mjn)(mjn)）：孢子和菌絲菌絲和孢子的形態(tài)因菌而異，是鑒定真菌的重要依據(jù)。孢子又分為多種，如葉狀孢子、分生孢子和孢子囊孢子等。真菌真菌(zhnjn)(zhnjn)的形的形態(tài)特性態(tài)特性第4頁/共40頁第四頁，共41頁。第5頁/共40頁第五頁，共41頁。類酵母菌類酵母菌白假絲酵母菌白假絲酵母菌孢子孢子(boz)假菌絲假菌絲第

3、6頁/共40頁第六頁，共41頁。第7頁/共40頁第七頁，共41頁。 真菌菌落特性真菌菌落特性1酵母型菌落：酵母型菌落： 是單細胞是單細胞真菌的菌落，形態(tài)與細菌真菌的菌落，形態(tài)與細菌菌落相似，較大，表面光滑菌落相似，較大，表面光滑濕潤柔軟、邊緣整齊，如濕潤柔軟、邊緣整齊，如新生隱球菌。新生隱球菌。2. 類酵母型菌落：如白假類酵母型菌落：如白假絲酵母菌，形成假菌絲，絲酵母菌，形成假菌絲，伸入培養(yǎng)基中。伸入培養(yǎng)基中。3霉菌型菌落：霉菌型菌落： 是多細胞是多細胞真菌的菌落。菌落呈棉絮真菌的菌落。菌落呈棉絮狀 、 絨 毛 狀 ， 并 產(chǎn) 生狀 、 絨 毛 狀 ， 并 產(chǎn) 生(chnshng)不同的色素，

4、不同的色素，如皮膚癬菌。如皮膚癬菌。第8頁/共40頁第八頁，共41頁。酵母酵母(jiom)型菌落型菌落第9頁/共40頁第九頁，共41頁。類酵母類酵母(jiom)型菌落型菌落第10頁/共40頁第十頁，共41頁。 霉菌霉菌(mjn)型菌型菌落菌落菌第11頁/共40頁第十一頁，共41頁。培養(yǎng)培養(yǎng)(piyng)特性特性 真 菌 培 養(yǎng) ( p i y n g ) 要 求 不 高 ， 常 用 沙 氏(Sabouraud)培養(yǎng)(piyng)基 (含1蛋白胨、4葡萄糖或麥芽糖、2瓊脂)培 養(yǎng)，適宜溫度2228，但深部真菌為37。適宜 PH值為。 菌落是鑒別真菌的方法。注意以下幾點： 菌落性質(zhì)：酵母菌還是霉菌

5、； 菌落大小，病原性真菌菌落小，而條件致病性真菌菌落大； 菌落顏色 病原性真菌顏色淡，污染真菌顏色深； 致病性真菌菌落下沉，有時使培養(yǎng)(piyng)基開裂；污染性真菌菌落不下沉,很少引起開裂。 真菌依靠孢子及菌絲進行無性或有性繁殖第12頁/共40頁第十二頁，共41頁。變異性抵抗力變異性抵抗力 易發(fā)生變異 形態(tài)、培養(yǎng)(piyng)性狀和毒力等 抵抗力較強 對干燥、紫外線及一般消毒劑抵抗力強對熱敏感， 601小時菌絲、孢子均被殺死對2%石炭酸、 0.1%升汞、2.5%碘酊或10%甲醛敏感對作用于 細菌抗生素不敏感，對二性霉素B制霉菌素、咪康 唑、酮康唑、氟康唑和伊曲康唑敏感。第13頁/共40頁第十

6、三頁，共41頁。致病性與免疫性致病性與免疫性 致病性 1.1.致病性真菌感染(gnrn)(gnrn)： 淺部真菌：角蛋白酶、機械刺激、代謝產(chǎn)物 深部真菌：慢性肉芽腫、組織潰瘍 2.2.條件致病性真菌：假絲酵母菌 3.3.真菌超敏反應(yīng)性疾病 4.4.真菌性中毒癥 5.5.真菌毒素與腫瘤 免疫性 天然免疫 獲得性免疫： 體液免疫、 細胞免疫第14頁/共40頁第十四頁，共41頁。真菌真菌(zhnjn)(zhnjn)感染的病原感染的病原學診斷學診斷標本標本(biobn)(biobn)的采集的采集臨床標本臨床標本(biobn)(biobn)類別：類別：1 1皮膚的角質(zhì)性物質(zhì)：毛發(fā)、指皮膚的角質(zhì)性物質(zhì)：毛

7、發(fā)、指( (趾趾) )甲、皮屑等。甲、皮屑等。2 2各種分泌物和排泄物：生殖道、分各種分泌物和排泄物：生殖道、分泌物、耳垢、痰、泌物、耳垢、痰、糞便、尿糞便、尿 液等。液等。 3 3血液和體液：體液包括胸水、腹水、血液和體液：體液包括胸水、腹水、腦脊液、淋巴穿腦脊液、淋巴穿刺液等。刺液等。 4 4膿汁及滲出物。膿汁及滲出物。 第15頁/共40頁第十五頁，共41頁。采集采集(cij)(cij)標本注意事項：標本注意事項：1.1.采集的標本采集的標本(biobn)(biobn)要適宜要適宜 不同真菌感染應(yīng)采取不不同真菌感染應(yīng)采取不同的臨床標本同的臨床標本(biobn)(biobn)。懷疑為淺部真菌

8、感染如體癬，應(yīng)刮取病變邊緣的痂、皮屑，懷疑為淺部真菌感染如體癬，應(yīng)刮取病變邊緣的痂、皮屑，發(fā)發(fā)癬應(yīng)取病發(fā)。深部真菌感染應(yīng)取血液、腦脊液、膿汁等。癬應(yīng)取病發(fā)。深部真菌感染應(yīng)取血液、腦脊液、膿汁等。2 2在用藥前采集標本在用藥前采集標本(biobn) (biobn) 一般真菌標本一般真菌標本(biobn)(biobn)須在用藥前采集，對已須在用藥前采集，對已用藥者則需停藥一段時間后再采集標本用藥者則需停藥一段時間后再采集標本(biobn)(biobn)。3 3采集的標本采集的標本(biobn)(biobn)量要足量要足 血液和腦脊液血液和腦脊液5ml5ml，胸，胸腔液腔液20ml20ml，皮屑，皮

9、屑標本標本(biobn)(biobn)兩塊，活體組織兩份兩塊，活體組織兩份( (一份病理檢查，一份一份病理檢查，一份鏡檢和培養(yǎng)鏡檢和培養(yǎng)) )。4 4嚴格無菌操作嚴格無菌操作 并進行消毒處理，尤其是采集血液和腦并進行消毒處理，尤其是采集血液和腦脊脊液標本液標本(biobn)(biobn)，要避免污染雜菌。，要避免污染雜菌。5 5采集標本采集標本(biobn)(biobn)立即送檢立即送檢 深部真菌標本深部真菌標本(biobn)(biobn)最長不得超過最長不得超過2h2h。第16頁/共40頁第十六頁，共41頁。 檢驗檢驗(jinyn)(jinyn)程序程序P354P354檢驗(jinyn)方法

10、直接檢查不染色和染色鏡檢 第17頁/共40頁第十七頁，共41頁。 培養(yǎng)檢查法培養(yǎng)檢查法 培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的選擇 培養(yǎng)方法：直接法、試管法、大培養(yǎng)、小培養(yǎng)培養(yǎng)方法：直接法、試管法、大培養(yǎng)、小培養(yǎng) 真菌的鑒定真菌的鑒定 生化反應(yīng)用于主要深部感染真菌如假絲酵母菌、隱球菌等。生化反應(yīng)用于主要深部感染真菌如假絲酵母菌、隱球菌等。 1.1.糖糖( (醇醇) )類發(fā)酵試驗類發(fā)酵試驗 37 37孵育，觀察糖發(fā)酵情況。孵育，觀察糖發(fā)酵情況。 2.2.同化碳源試驗同化碳源試驗 含菌生理鹽水含菌生理鹽水(shnglynshu)(shnglynshu)與已融化的固體同化碳源培養(yǎng)與已融化的固體同化碳源培養(yǎng) 基基(45

11、)(45)混合，然后在培養(yǎng)基上分別加糖，置混合，然后在培養(yǎng)基上分別加糖，置2525孵育觀察孵育觀察 結(jié)果。若結(jié)果。若24h24h后無變化可重復(fù)加糖。如能同化周圍有生長圈，后無變化可重復(fù)加糖。如能同化周圍有生長圈， 否則無生長。否則無生長。 3.3.同化氮源試驗同化氮源試驗 同化碳源試驗相同，但需用無氮源的培養(yǎng)基，不要加糖類，而加同化碳源試驗相同，但需用無氮源的培養(yǎng)基，不要加糖類，而加入硝酸鉀。入硝酸鉀。 4.4.明膠液化試驗、尿素分解試驗、測定淀粉樣化合物明膠液化試驗、尿素分解試驗、測定淀粉樣化合物 5.5.分解牛乳試驗分解牛乳試驗第18頁/共40頁第十八頁，共41頁。 抗原檢測抗原檢測 常用

12、的方法有膠乳凝集試驗、常用的方法有膠乳凝集試驗、ELISAELISA、半定量放射免疫法。均、半定量放射免疫法。均 應(yīng)設(shè)對照，防止發(fā)生假陽性和假陰性。應(yīng)設(shè)對照，防止發(fā)生假陽性和假陰性。 動物實驗動物實驗 實驗的目的是分離病原性真菌、確定真菌菌種的致病性、研究實驗的目的是分離病原性真菌、確定真菌菌種的致病性、研究 藥物對真菌的作用等。如假絲酵母菌接種家兔或小白鼠，腎臟藥物對真菌的作用等。如假絲酵母菌接種家兔或小白鼠，腎臟 明顯腫脹，腎皮質(zhì)部位有白色膿瘍。明顯腫脹，腎皮質(zhì)部位有白色膿瘍。 核酸檢測核酸檢測 從核酸堿基從核酸堿基G+C molG+C mol分析、限制性片段長度多態(tài)性分析、限制性片段長度

13、多態(tài)性(RFLP)(RFLP)、 SouthernSouthern印跡分析到脈沖場凝膠電泳印跡分析到脈沖場凝膠電泳(PFGE)(PFGE)、PCRPCR指紋指紋(zhwn)(zhwn)、隨機、隨機 擴增多態(tài)性擴增多態(tài)性DNA(RAPD)DNA(RAPD)以及以及DNADNA特殊片段測序等。特殊片段測序等。 第19頁/共40頁第十九頁，共41頁。 主要(zhyo)致病性真菌真菌(zhnjn)按其侵犯部位和臨床表現(xiàn)分為： 表面感染真菌(zhnjn) 淺部感染真菌(zhnjn) 皮膚癬真菌(zhnjn) 皮下組織真菌(zhnjn)感染 深部感染真菌(zhnjn)： 新生隱球菌 條件致病性真菌(zhn

14、jn)：假絲酵母菌第20頁/共40頁第二十頁，共41頁。深部感染(gnrn)(gnrn)真菌深部真菌是侵犯皮下組織和內(nèi)臟，引起全身性感染的真菌。多數(shù)能引起慢性肉芽腫樣炎癥、潰瘍及壞死等病變深部感染真菌分兩大類： 1. 1. 致病性真菌： 此類真菌在正常人體內(nèi)部不存在(cnzi)(cnzi)，一旦侵入機體，即可致病，如組織胞漿菌、球孢子菌、芽生菌等，屬外源性，我國少見；2. 2. 條件致病性真菌： 是人體正常菌群的成員，當機體抵抗力下降時才致病，如新型隱球菌、白色念珠菌、曲霉菌和毛霉菌等。第21頁/共40頁第二十一頁，共41頁。假絲酵母菌俗稱念珠菌，有81個種，其中有11種對人有致病性：白假絲酵

15、母菌、為最常見的致病菌。此外，熱帶假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌和光滑假絲酵母菌也較多引起疾病。白假絲酵母菌（canidia Albicans）又稱白色念珠菌，廣泛存在于自然界，也存在于正常人口腔，上呼吸道，腸道及陰道，一般在正常機體中數(shù)量(shling)少，不引起疾病 。為條件致病性真菌。第22頁/共40頁第二十二頁，共41頁。1微生物特性微生物特性(txng) 白假絲酵母菌呈圓形或卵白假絲酵母菌呈圓形或卵圓形，直徑圓形，直徑2-4m2-4m。革蘭。革蘭陽性。出芽方式繁殖，在陽性。出芽方式繁殖，在組織內(nèi)可見芽生孢子、假組織內(nèi)可見芽生孢子、假菌絲，孢子可伸長成芽管，菌絲，孢子可伸長成芽管，如不與母

16、細胞脫離如不與母細胞脫離(tul)(tul)而形成假菌絲。而形成假菌絲。第23頁/共40頁第二十三頁，共41頁。營養(yǎng)要求不高，在普通營養(yǎng)要求不高，在普通(ptng)(ptng)瓊脂、血瓊脂、和瓊脂、血瓊脂、和沙保培養(yǎng)基沙保培養(yǎng)基均生長。需氧，室溫或均生長。需氧，室溫或3737，甚至，甚至4242生長良好。生長良好。菌菌落呈酵母樣，有大量向下生長的營養(yǎng)假菌絲，表面落呈酵母樣，有大量向下生長的營養(yǎng)假菌絲，表面光光滑，呈灰白色或奶油色，有酵母味，如時間長，菌滑，呈灰白色或奶油色，有酵母味，如時間長，菌落落增大成蜂窩狀。在玉米粉吐溫增大成蜂窩狀。在玉米粉吐溫-80-80培養(yǎng)基中可長出培養(yǎng)基中可長出厚膜

17、厚膜孢子。孢子。沙氏斜面(ximin)普通普通(ptng)平平板板血平板血平板第24頁/共40頁第二十四頁，共41頁。條件致?。浩つw粘膜感染 鵝口瘡，陰道炎內(nèi)臟感染：肺炎、關(guān)節(jié)炎、膀胱炎，腎盂腎炎中樞神經(jīng)感染：腦膜（腦）炎、腦膿腫2致病性和免疫性本菌可侵犯人體(rnt)許多部位，機體也可它產(chǎn)生的免疫力過敏(gumn)第25頁/共40頁第二十五頁，共41頁。3 3微生物檢驗微生物檢驗 1.1.標本采集：所致標本采集：所致(su zh)(su zh)疾病不同，取不同標本。疾病不同，取不同標本。2.2.檢驗程序檢驗程序P354P3543.3.檢驗方法及鑒定檢驗方法及鑒定1）直接顯微鏡檢查：取膿汁、痰

18、和局部）直接顯微鏡檢查：取膿汁、痰和局部炎癥性分泌物直接涂片，有些標本需炎癥性分泌物直接涂片，有些標本需用用KOH先消化，革蘭染色后鏡檢，顯先消化，革蘭染色后鏡檢，顯微鏡見到革蘭陽性微鏡見到革蘭陽性(yngxng)(著色著色不均勻不均勻)、圓形或卵圓形菌體或孢子及、圓形或卵圓形菌體或孢子及假菌絲，厚膜孢子較少見。假菌絲，厚膜孢子較少見。第26頁/共40頁第二十六頁，共41頁。2 2）培養(yǎng)檢查：將標本接種在沙氏培）培養(yǎng)檢查：將標本接種在沙氏培養(yǎng)基上，養(yǎng)基上，2525或或3737培養(yǎng)培養(yǎng)1 12d2d后，后，可出現(xiàn)奶油色類酵母型菌落。鏡檢可出現(xiàn)奶油色類酵母型菌落。鏡檢可見可見(kjin)(kjin

19、)假菌絲和芽生孢子。假菌絲和芽生孢子。第27頁/共40頁第二十七頁，共41頁。3)鑒定鑒定(jindng)試驗試驗芽管形成試驗：將假絲酵母菌接種于血清芽管形成試驗：將假絲酵母菌接種于血清中，中，37孵育孵育h觀察有無芽管形成。觀察有無芽管形成。白假絲酵母菌可形成芽管，其他假絲酵母白假絲酵母菌可形成芽管，其他假絲酵母菌不形成芽管。菌不形成芽管。芽管芽管芽管第28頁/共40頁第二十八頁，共41頁。厚膜孢子形成試驗：厚膜孢子形成試驗：將假絲酵母菌接種于玉米粉培養(yǎng)基將假絲酵母菌接種于玉米粉培養(yǎng)基2525孵育孵育1-2d1-2d后，白假絲酵母菌在菌絲頂端后，白假絲酵母菌在菌絲頂端(dngdun)(dng

20、dun)、側(cè)緣或中間形成厚側(cè)緣或中間形成厚膜孢子。膜孢子。 厚膜孢子(boz)第29頁/共40頁第二十九頁，共41頁。 糖同化和糖發(fā)酵試驗：糖同化和糖發(fā)酵試驗： 凡發(fā)酵某種糖一定能同化該糖，故只需做凡發(fā)酵某種糖一定能同化該糖，故只需做那些不發(fā)那些不發(fā) 酵糖的同化試驗。將假絲酵母菌接種糖發(fā)酵酵糖的同化試驗。將假絲酵母菌接種糖發(fā)酵管，管，25孵孵 育，一般觀察育，一般觀察(gunch)23d，對不發(fā)酵，對不發(fā)酵或弱發(fā)酵管可延長至或弱發(fā)酵管可延長至10d 或或24周。觀察周。觀察(gunch)有無酵母生長或有無酵母生長或液體培養(yǎng)基是否變混液體培養(yǎng)基是否變混 濁?，F(xiàn)在商品化的產(chǎn)色培養(yǎng)基可快速鑒定白濁。

21、現(xiàn)在商品化的產(chǎn)色培養(yǎng)基可快速鑒定白假絲酵母菌假絲酵母菌 和其他假絲酵母菌。和其他假絲酵母菌。第30頁/共40頁第三十頁，共41頁。TZCTZC試驗：試驗：將白色念珠菌接種于含氯化三本將白色念珠菌接種于含氯化三本(sn (sn bn)bn)四氮唑的沙保四氮唑的沙保培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)基中，經(jīng)22222525，242448h48h培養(yǎng)，培養(yǎng)，白色念珠菌不白色念珠菌不變色或僅淡紅色，其他念珠菌或酵母菌呈變色或僅淡紅色，其他念珠菌或酵母菌呈紅色或深紅紅色或深紅色色( (被還原為紅色的三苯甲被還原為紅色的三苯甲) ) 。血清學試驗：取病人血清作血清學試驗：取病人血清作ELISAELISA、免疫、免疫印跡法等

22、檢測白假絲酵母菌抗原。印跡法等檢測白假絲酵母菌抗原。核酸檢測：用核酸檢測：用PCRPCR法將白假絲酵母菌法將白假絲酵母菌DNADNA分分子擴增后以分子探針檢測，具有較好的敏子擴增后以分子探針檢測，具有較好的敏性和特異性。性和特異性。動物試驗動物試驗 ：第31頁/共40頁第三十一頁，共41頁。新型(xnxng)(xnxng)隱球菌新型隱球菌又名溶組織酵母菌，是土壤，鴿類，牛乳、水果等的腐生(fshng)菌，也可存在人口腔中?？汕址溉撕蛣游铮话銥橥庠葱愿腥?，但也可能為內(nèi)源性感染，對人類而言，它通常是條件致病菌。 第32頁/共40頁第三十二頁，共41頁。較大球形，直徑可達520um，有肥厚的莢膜，

23、折光性強，一般染料不易著色，難以發(fā)現(xiàn)，稱隱球菌，用墨汁(mzh)陰性顯影法鏡檢 ，可見到透明莢膜包裹著菌細胞，菌細胞常有出芽，但不生 成假菌絲。 第33頁/共40頁第三十三頁，共41頁。 在沙保氏瓊脂及血瓊脂培養(yǎng)基上，于25及37皆可生長，而非病原(bngyun)性隱球菌在37不能繁殖。 酵母型菌落，呈白色。 本菌能分解尿素，以 此與酵母菌和念珠菌鑒別。 第34頁/共40頁第三十四頁，共41頁。致病性 本菌大多由呼吸道轉(zhuǎn)入，在肺部引起輕度炎癥，或隱性傳染。 侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，發(fā)生腦膜炎、腦炎、腦肉芽腫等。 此外可侵入(qnr)骨骼、肌肉、淋巴結(jié)、皮膚粘膜引起慢性炎癥和膿腫。 第35頁/共40頁第三十五頁，共41頁。微生物學