睪丸酮叢毛單胞菌3α―hsd的研究進(jìn)展

1、睪丸酮叢毛單胞菌3 a -hsd的研宄進(jìn)展摘要：3 a -hsd (3 a -hydroxysteroid dehydrogenase)是睪丸酮叢毛單胞菌在以類固醇為唯 一碳源時，產(chǎn)生的一種類固醇脫氫酶，也是降解類固 醇的關(guān)鍵酶。本文對睪丸酮叢毛單胞菌3 a-hsd基因 的調(diào)控、酶蛋白結(jié)構(gòu)與功能等生物學(xué)特點進(jìn)行闡述， 總結(jié)了 3 a -hsd蛋白的兩種獲得途徑：天然提取和人 工誘導(dǎo)表達(dá)途徑。從技術(shù)可行性、實用性和成本控制 等幾個方面，分析比對二者的優(yōu)勢和不足。介紹和展 望了睪丸酮叢毛單胞菌3 a -hsd在血清總膽汁酸測定、 轉(zhuǎn)基因生物工程、環(huán)境或食品中類固醇類激素檢測及 環(huán)境修復(fù)等領(lǐng)域的研宄

2、現(xiàn)狀和應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞：睪丸酮叢毛單胞菌；3 a -hsd；研究進(jìn)展 中圖分類號：q939.9文獻(xiàn)標(biāo)識碼：adoi編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.06.014睪丸酮從毛單胞菌(comamonastestosteroni)存在于人體胃、腸道、尿液及土壤、泥漿、水體中，是 一種嚴(yán)格需氧、非發(fā)酵的革蘭氏陰性細(xì)菌。睪丸酮叢 毛單胞菌由talalay等1首先從池塘泥漿中分離得到， 當(dāng)其生長在含有類固醇的培養(yǎng)基上或環(huán)境中存在類固醇底物誘導(dǎo)時，可產(chǎn)生多種類固醇脫氫酶和11種降解 酶，其中之一是3 a羥基類固醇脫氫酶(3 a -hydroxysteroid dehydroge

3、nase, 3 a -hsd), 一種能夠利用分解留體類和多環(huán)芳烴類化合物作為菌體生長所 需要的碳源和能源的關(guān)鍵酶。目前認(rèn)為，3 a-hsd不僅是睪丸酮叢毛單胞菌在 以類固醇為唯一碳源時，產(chǎn)生的一種醇脫氫酶，也是 降解類固醇的關(guān)鍵酶，還廣泛地存在于原核和真核生 物體內(nèi)，是人體調(diào)節(jié)性激素代謝水平的重要酶類2-3。 1998年研究人員發(fā)現(xiàn)睪丸酮叢毛單胞菌的降解酶3 a -類固醇脫氫酶在降解消化留類物質(zhì)中起主導(dǎo)作用，并 對這個基因的調(diào)控機理進(jìn)行了初步研宄，認(rèn)識到3 ot -hsd是c19c27類固醇分解代謝途徑中最初的酶之 一4。在過去15年的時間里，睪丸酮叢毛單胞菌3 a-hsd的結(jié)構(gòu)和調(diào)控研究得

4、到長足進(jìn)展，其作用機制 和功能的奧秘被逐步揭示，在幾個關(guān)鍵領(lǐng)域的應(yīng)用研 宄已取得顯著成果。筆者擬就3 ct-hsd的研宄進(jìn)展結(jié) 合自身研宄項目進(jìn)行簡要綜述，以期進(jìn)一步系統(tǒng)了解 睪丸酮叢毛單胞菌3ct-hsd的表達(dá)調(diào)控機理，為今后 拓寬其在環(huán)境修復(fù)、食品安全、醫(yī)學(xué)檢驗研究領(lǐng)域的 應(yīng)用作以鋪墊。13a -hsd的生物學(xué)特點1.13ct-hsd基因的調(diào)控3（1-|0基因全長77北9，編碼258個氨基酸的 肱鏈，肽鏈分子量在26.4kd左右。3q-hsd的表達(dá)過 程較為復(fù)雜，在轉(zhuǎn)錄水平受多個因子調(diào)控，從最初的 負(fù)調(diào)控因子阻遏蛋白repa、repb和活化因子activator, 到近年來發(fā)現(xiàn)的正調(diào)控因子

5、teir基因和lysr基因，都 對其轉(zhuǎn)錄過程起到抑制或促進(jìn)作用。1.1.1阻遏蛋白（r印a和repb）在3a-hsd基 因附近有4個開放的閱讀框架（orfl、orf2、orf3、orf 4），與基因的誘導(dǎo)、表達(dá)與調(diào)控密切相關(guān)。3q-hsd 基因受2個阻遏蛋白（repa和repb）的負(fù)調(diào)控，類 固醇通過阻斷阻遏蛋白與調(diào)控區(qū)的結(jié)合，誘導(dǎo)3a -hsd的表達(dá)5。rep a和rep b分別由420和78個氨 基酸組成，由框架orf 2和orf 3編碼。repb可與3 a-hsdmrna的5端環(huán)狀結(jié)構(gòu)相結(jié)合，其編碼框orf 3的方向與3 a -hsd方向相反。repa識別位點有兩處， repa與這2個序

6、列結(jié)合，形成一個1.6 kb的環(huán)狀結(jié)構(gòu)， 阻遏了細(xì)菌rna聚合酶與hsd a啟動子區(qū)域的結(jié)合，從而抑制3 a-hsd基因的表達(dá)。國內(nèi)外學(xué)者的研究表 明，去除這2處dna序列可顯著提高3 a -hsd基因的 表達(dá)，而類固醇等留體類誘導(dǎo)劑的加入可全面抑制阻 遏蛋白repb和3 a -hsd基因mrna的結(jié)合及repa與順式操縱子雙位點的結(jié)合，從而促進(jìn)3ci-hsd基因的 表達(dá)和翻譯過程的順利進(jìn)行。1.1.2正調(diào)控因子activator是與增強子或與活化 因子結(jié)合區(qū)域結(jié)合的蛋白，是一種在啟動子上可以增 加轉(zhuǎn)錄起始速度的dna結(jié)合蛋白6。當(dāng)活化因子與下 游基因的啟動子的活化因子結(jié)合部位結(jié)合后，就能促

7、使更多的rna聚合酶集聚到下游基因的啟動子附近， 提高下游基因的轉(zhuǎn)錄起始速度。研宄表明，在 c.testosteroni染色體上編碼3 a -hsd基因上游的2.6 kb處存在activator基因，該基因全長為564 bp。通過 研宄可以發(fā)現(xiàn)，利用睪丸酮叢毛單胞菌的activator能 提高3a-hsd/cr轉(zhuǎn)錄速率，通過將強啟動子整合入 c. testosteroni染色體中，使強啟動子位于activator基 因的上游來加強該細(xì)菌activator基因的表達(dá)，最終加 強下游一系列基因表達(dá)的構(gòu)想是可行的7-9。類固醇誘導(dǎo)蛋白(testosterone-inducible regulator

8、, teir)基因和lysr基因是近年來被研宄發(fā)現(xiàn)的3 a -hsd 基因正調(diào)控因子10。2004年，一種用于降解類固醇 新的睪丸酮叢毛單胞菌蛋白被研宄人員發(fā)現(xiàn)，中文譯 為睪丸酮誘導(dǎo)調(diào)節(jié)子11。teir序列在c末端保留了 螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋(helix-turn-helix, hth)式的 luxr 基因dna結(jié)合區(qū)域。與luxr相似蛋白相同，該蛋白 與目的基因轉(zhuǎn)錄起始點上游lux盒結(jié)合后可以激活或 抑制目的基因的轉(zhuǎn)錄。國內(nèi)外學(xué)者的多個研宄同時表 明10-11，在培養(yǎng)基中加入類固醇進(jìn)行誘導(dǎo)的情況下， 在基因表達(dá)過程中teir基因緊密地控制著轉(zhuǎn)錄水平， 而一個teir缺失的突變菌株無法以類固醇作為

9、單一的 碳源。值得注意的是，在teir缺失的突變體中3 a -hsd 基因也失去了降解類固醇的功能。這可能是由于突變 體中，睪丸酮無法與teir n端自主誘導(dǎo)物結(jié)合區(qū)域進(jìn) 行結(jié)合而不能進(jìn)入細(xì)胞體內(nèi)，從而抑制了睪丸酮與阻 遏物結(jié)合誘導(dǎo)關(guān)鍵酶3 a-hsd表達(dá)的能力，最終導(dǎo)致 突變體喪失了正常的降解功能。利用反向?qū)Ρ葘嶒灴?以發(fā)現(xiàn)當(dāng)teir基因插入到teir缺失突變體菌株后，3 a-hsd基因轉(zhuǎn)錄水平得以恢復(fù)。通過以上研究不難看 出，teir基因?qū)ΣG丸酮叢毛單胞菌的酶解類固醇基因 的轉(zhuǎn)錄過程進(jìn)行正向調(diào)控，是3a-hsd等類固醇降解 基因的mrna完全表達(dá)的重要組成原件。大腸桿菌的 共轉(zhuǎn)化試驗支持了

10、這一觀點，teir基因與帶有3 a -hsd /cr基因的載體質(zhì)粒后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在共轉(zhuǎn)化的大腸桿中3 a -hsd的表達(dá)明顯高于單獨轉(zhuǎn)化的3 cl -hsd112010年，繼teir基因后，在3a-hsd/cr基因下游3.36 kb處又發(fā)現(xiàn)了大小為912 bp的lysr基因12（賴 氨酸調(diào)節(jié)子），而其所屬lysr-類轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子（lttrs） 是原核生物最大的調(diào)節(jié)子家族。lttrtsar蛋白無論是 處于無配體形式還是復(fù)合形式都呈現(xiàn)為一個四元結(jié)構(gòu)， 與 ralstonia eutropha 的 cbnr，或 pseudomonas aeruginosa的lysr類調(diào)節(jié)子等明顯不同，只有l(wèi)ttrs 是

11、獨特的四聚體形式。雖然3種蛋白都是頭接頭的四 聚體環(huán)形，但tsar呈現(xiàn)出一個開放結(jié)構(gòu)，而cbnr和 pa01-pr蛋白卻是以c末端相對連接的方式閉環(huán)。明 顯的差異體現(xiàn)了 lttrs四聚體的自身靈活性，也是由 于結(jié)構(gòu)上更廣闊的通用性所導(dǎo)致的結(jié)果。誘導(dǎo)物的結(jié) 合能夠帶來lttr結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，破壞封閉結(jié)構(gòu)的兩個 c末端連接口。這導(dǎo)致tsar-類蛋白結(jié)構(gòu)被迫展開，形 成雙螺旋結(jié)構(gòu)，拉近彼此距離。在國內(nèi)li等13的研 宄也證明將lysr基因可明顯提高3 a -hsd的表達(dá)量。目前，這5個已發(fā)現(xiàn)的調(diào)控因子包括兩個阻遏蛋 白repa、repb和3個正調(diào)控因子都能夠調(diào)節(jié)3 a -hsd 的表達(dá)水平，但是除阻遏

12、蛋白和活化因子之間的作用 機理較為明晰外（如圖1所示），具體到5個因子之間 作用關(guān)系是縱向關(guān)聯(lián)還是橫向調(diào)控，是時間關(guān)系還是 空間關(guān)系都不得而知，作用原理有待于進(jìn)一步的研究。1.2 3 a -hsd酶蛋白結(jié)構(gòu)與功能1956年，talalay等首先證實3 a -hsd是類固醇代 謝途徑中最初的酶之一，以后陸續(xù)從多種細(xì)菌等原核生物及動物、人體的真核細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了 3 a-hsd，但 真核和原核3 a -hsd在結(jié)構(gòu)和功能等方面都存在差異 較大。它們屬于不同的蛋白質(zhì)超家族，真核3a-hsd 屬于還原酶超家族14，而原核3a-hsd屬于短鏈脫 氫酶（sdr）超家族2，15-16o作為sdr超家族的新 成員

13、，3 a-hsd酶蛋白在與其他成員的蛋白結(jié)構(gòu)存在 一定的差異、同源性較低的同時，保留了該家族的2 個特征性保守序列：n-末端的sdr超家族的氨基酸指 紋gly-x-x-x-gly序列與155159氨基酸殘基處的保守 催化模塊tyr-x-x-x-lyso睪丸酮叢毛單胞菌3 ct -hsd不僅對環(huán)境、食品中雄酮等類固醇基質(zhì)和類固醇類抗生 素-梭鏈胞酸進(jìn)行降解代謝，還可以催化殺蟲劑nki 42255等非類固醇的醛及酮的氧化還原。3 a -hsd酶蛋 白有單體和雙體兩種形式，具體形式取決于濃度高低: 濃度較高時，晶體結(jié)構(gòu)為同源二聚體，對雄酮、四氫 可的松、脫氧膽酸的活性大體相同，當(dāng)濃度低時，二 聚體解

14、離為活性更高的單體形式，對雄酮有更高的降 解活性。2 3a-hsd蛋白的獲得途徑 從睪丸酮叢毛單胞菌中分離純化天然3 a -hsd需 要包含以下多個步驟：首先將培養(yǎng)好的細(xì)菌裂解粉碎 后，離心除去細(xì)胞殘渣沉淀，然后用硫酸銨沉淀上清液，并將沉淀溶解、透析后用凝膠進(jìn)行過濾層析，最 后用等電聚焦電泳、親和、離子交換層析進(jìn)行純化。 為了避免酶活性的迅速丟失，必須在提取和純化過程 中控制活性影響因子。結(jié)合酶蛋白的特點，通過分析 可以發(fā)現(xiàn)，這種蛋白獲得途徑主要存在3個缺陷：一 是步驟繁瑣，技術(shù)難度大，對操作人員的技術(shù)熟練度 要求較高；二是受制于純化過程中酶活性的丟失，酶 蛋白獲得率低，天然3ci-hsd分離

15、純化成本高漲，價 格昂貴，生產(chǎn)工藝的應(yīng)用及產(chǎn)業(yè)化受到極大限制；三 是難以有效分離0 -hsd與3 ct -hsd。由于天然3ci-hsd價格昂貴，其使用范圍受到了 極大限制。鑒于這種情況，國內(nèi)外的研宄人員將目光 放到了 3ci-hsd的人工誘導(dǎo)合成領(lǐng)域。隨著現(xiàn)代分子 生物學(xué)技術(shù)和基因工程的不斷發(fā)展和成熟，以3 ct -hsd基因為基礎(chǔ)的融合蛋白高效原核表達(dá)系統(tǒng)的建 立工作得到了充分的發(fā)展，依托于不同質(zhì)粒載體的多 種單價或多價表達(dá)調(diào)控體系被開發(fā)研制成功。眾多國 內(nèi)外學(xué)者2，17-18在人工誘導(dǎo)3 a-hsd融合蛋白領(lǐng) 域都進(jìn)行了探索，開展了大量實驗，利用不同的載體 將各國不同來源睪丸酮叢毛單胞菌

16、3 a -hsd基因片段 在大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)，都取得了很好效果。有 些研宄通過誘導(dǎo)表達(dá)并利用金屬螯合層析純化后可得 到純度大于98%的人工蛋白，有些研宄融合蛋白的酶 比活性是對照菌的十余倍。在實際過程中，筆者發(fā)現(xiàn)在前人研宄的基礎(chǔ)上， 摸索優(yōu)化的表達(dá)條件和實驗參數(shù)，建立最優(yōu)的表達(dá)調(diào) 控系統(tǒng)對于提高人工合成融合蛋白的效率具有直接的 影響。筆者所在課題組19利用分子克隆的方法擴增 與克隆睪丸酮叢毛單胞菌atcc 11996的3 a -hsd基因 構(gòu)建表達(dá)工程菌，通過優(yōu)化表達(dá)菌的最佳表達(dá)條件得 到目的蛋白。通過優(yōu)化純化條件，建立了 3ct-hsd的 60%硫酸銨沉淀-親和層析-分子篩分離的高效純

17、化方 法，可以獲得具有酶活性的純度高達(dá)99%的3 ct -hsd, 為課題的后續(xù)研宄打下了堅實基礎(chǔ)。33a -hsd的應(yīng)用研究3.1用于血清總膽汁酸(total bile acids, tba ) 酶循環(huán)測定(enzymatic cycling method)膽汁酸是3 a-hsd的作用底物之一，隨著肝功能 損傷程度濃度提高，臨床上用天然3 a -hsd作為工具 酶來測定人血清中的總膽汁酸濃度20。自從20世紀(jì) 70年代由睪丸酮叢毛單胞菌中提取到高純度3 a -hsd后，tba酶法測定逐步發(fā)展起來。第四代的tba 酶學(xué)測定方法是酶循環(huán)測定法21-22，用底物和輔酶 的反復(fù)反應(yīng)，使待測物的量隨時

18、間的延長而不斷增加，從而提高了檢測靈敏度，且反應(yīng)產(chǎn)物無污染，是一種 非常有應(yīng)用前景的測定方法（圖2）。研宄人員20，23參考日本asahi chemical公司的有關(guān)資料，基于用 脫氫酶-輔酶體系循環(huán)底物的原理，通過優(yōu)化實驗，建 立了靈敏度高，線性、精密度好，幾乎無干擾，血清 總膽汁酸（tba）測定的酶循環(huán)法，是一種理想的tba 測定方法。 但是，從前文可知，tba測定中所 用的工具酶3ci-hsd均從睪丸酮叢毛單胞菌中直接 提取而來，天然提取的諸多固有缺陷無法繞開24。 這導(dǎo)致了國內(nèi)以3 a -hsd為核心成分的第四代tba循 環(huán)檢測技術(shù)在實際應(yīng)用過程中，只能依靠從國外進(jìn)口 的昂貴試劑，在一

19、定程度上限制了 tba測定的臨床推 廣。目前，隨著3 a-hsd人工融合蛋白的原核表達(dá)技 術(shù)日臻成熟，而融合蛋白的活性與天然3ct-hsd基本 相同，建立以融合蛋白為工具酶的血清tba酶學(xué)測定 法的研宄仍處于空白階段，從經(jīng)濟價值和應(yīng)用價值上 來說都具有可觀的發(fā)展?jié)摿?，可作為下一階段的研宄 熱點。3.2 3 a -hsd轉(zhuǎn)基因體系的建立 將外源基因?qū)氲缴锘蚪Mdna中，并在生物體內(nèi)穩(wěn)定的遺傳，獲得具有特殊功能的生物是當(dāng)前 生物基因工程的主要研宄熱點之一。研宄人員先后將3a -hsd和aiia基因以雙基因融合載體的形式通過農(nóng) 桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入煙草和水稻中，檢測融合蛋白的表達(dá) 和生物活性后發(fā)現(xiàn)目的

20、蛋白含量顯著高于對照，獲得 具有雙基因優(yōu)點的煙草和水稻新種質(zhì)25-26o zhang 等27通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將含有3q-hsd基因的載 體導(dǎo)入到果蔗基因組dna中，獲得陽性植株。對轉(zhuǎn)3 a-hsd基因的果蔗葉片進(jìn)行elisa檢測，檢測結(jié)果 表明：3 a-hsd基因在轉(zhuǎn)基因果蔗基因組dna中得 到表達(dá)，3 a -hsd蛋白的表達(dá)量局于對照。轉(zhuǎn)基因果 蔗的類固醇降解率高于對照，平均降解率達(dá)80%左右 高于對照25%左右。為充分發(fā)揮3 a -hsd對環(huán)境污染物中的類固醇化 合物的降解作用，這些研宄通過基因槍法等轉(zhuǎn)基因技 術(shù)將含有3 a-hsd基因的載體導(dǎo)入到植物基因組 dna中，獲得目的陽性植株。對

21、轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行類固 醇降解實驗，與理論上預(yù)期效果完全一致，實際過程 中轉(zhuǎn)基因陽性植物對于類固醇類物質(zhì)的降解率明顯高 于陰性對照。3.3利用3 ci -hsd單克隆抗體檢測環(huán)境或食品中 類固醇類激素及獸藥殘留關(guān)于類固醇類激素檢測的文獻(xiàn)報道較多30-31， 主要使用的常規(guī)檢測方法有高效液相色譜法、液/質(zhì)聯(lián) 用法、氣/質(zhì)聯(lián)用法等。但液/質(zhì)聯(lián)用法高昂的儀器和 維護(hù)保養(yǎng)成本高、氣/質(zhì)聯(lián)用法操作復(fù)雜、占用時間長32 。試劑盒和酶聯(lián)免疫法只能針對單種成分等缺陷， 使其在應(yīng)用于大量樣品實施初篩和監(jiān)測工作中受到了 限制。因此，開發(fā)多殘留分析的高通量檢測對于大規(guī) 模樣品檢測任務(wù)是迫切需要的。在睪丸酮叢毛單胞菌降解

22、留醇類化合物類固醇的 過程中，隨著留體類激素等誘導(dǎo)劑濃度的提高，阻遏 蛋白的被抑制程度隨之增加，而3 a -hsd的翻譯表達(dá) 量相應(yīng)提高，在一定范圍內(nèi)形成了與留體類激素含量 線性關(guān)系。c. testosterone如作為在環(huán)境檢測中的指 示菌種，通過elisa方法檢測其對3 a-hsd蛋白的表 達(dá)量，可以準(zhǔn)確地對環(huán)境樣品中睪丸酮或類固醇類激 素的定性以及定量檢測。3 a -hsd是作為降解甾體化 合物的關(guān)鍵酶，在檢測中可作為目標(biāo)蛋白為利用生物 學(xué)方法檢測環(huán)境中類固醇類化合物的含量。研宄人員33 利用3 a -hsd單克隆抗體，建立了水體或飼料中 總甾體激素含量的雙抗夾心酶聯(lián)免疫反應(yīng)（elisa

23、）。 當(dāng)甾體激素的量在0.5600 u g?g-l之間，與3 a -hsd 酶表達(dá)量具有明顯線性關(guān)系。目前，為建立廣譜的激素篩查技術(shù)，筆者所在課 題組在前文所述的高純度蛋白基礎(chǔ)上，已研制出高效價比的3 a-hsd單克隆抗體。與傳統(tǒng)的hplc技術(shù)在 靈敏度方面進(jìn)行比較，建立于高效價比基礎(chǔ)上的雙抗 夾心elisa法具有高靈敏度和高通量等特點，可以同 時檢測睪丸酮及與其結(jié)構(gòu)類似的一類物質(zhì)的量。在樣 品多成分檢測中，這種新型的留體激素檢測方法雖然 無法專一性檢測某種特定成分，但可用于監(jiān)測環(huán)境中 甾體激素污染整體情況和食物、飼料中類固醇類有害 成分的快速初篩34。4結(jié)語與展望由于人類工業(yè)革命的發(fā)展，大量

24、的激素類化合物 被排放到空氣、水、土壤中，自然環(huán)境承受多種污染 破壞，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和自然生態(tài)平衡面臨著巨大壓力。這 些有毒化學(xué)物質(zhì)通過食物鏈的轉(zhuǎn)移以及生活中直接接 觸吸收等多種方式，直接或間接地威脅著處于食物鏈 頂端的人類，包括雄酮等類固醇類激素物質(zhì)誘導(dǎo)造成 的癌癥、不孕癥等各類疾病，是人類健康的大敵28-29。 由于3 a -hsd是睪丸酮叢毛單胞菌(c. testosteroni) 的關(guān)鍵酶，即具有脫氫降解功能又可以起到還原作用， 尤其是經(jīng)過改良后的各類工程菌在保證穩(wěn)定性的前提 下將具有廣泛的應(yīng)用范圍。在環(huán)境修復(fù)領(lǐng)域，3q-hsd 可在農(nóng)業(yè)上作為飼料食品添加劑及含有芳類物質(zhì)肥料 的降解物.還可

25、以消化雌性激素類物質(zhì)及動植物分泌的生理活性物中難降解多環(huán)芳烴類和留體類化合物， 也可用于土壤、水源等環(huán)境因子的修復(fù)35-36。另外， 在植物修復(fù)領(lǐng)域，根據(jù)植物通過吸收、降解以及根際 降解等方式將徹底去除環(huán)境中污染物的功能，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將睪丸酮叢毛單胞菌中的降解關(guān)鍵酶基因 3 a -hsd導(dǎo)入到植物中去，彌補植物缺乏微生物的有 機物降解能力，具有處理費用相對低廉、對環(huán)境擾動 少和資源可持續(xù)利用的特點，會進(jìn)一步提高生物修復(fù) 的實際應(yīng)用價值。在檢測領(lǐng)域，通過制備高純度的3 a-hsd抗原和相應(yīng)的多克隆與單克隆抗體，進(jìn)一步建 立和完善能夠快速檢測多環(huán)芳烴類和留體類化合物的 免疫學(xué)方法將有望成為新的重

26、點研宄方向。參考文獻(xiàn)：1 talalay p，doboson n d，tapley d f. oxidative degradation of testosterone by adaptive enzymesj. nature, 1952，170(4328)： 620-621.2 boyer j， baron d n， talaly p. purification and properties of 3 a -hydroxysteroid dehydrogenasej. biochemistry, 1965，4 (19) : 1825-1833.3mobus e, maser e. molec

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