荔枝霜疫霉病病原菌鑒定及生物學特性研究

1、荔枝霜疫霉病病原菌鑒定及生物學特性研究荔枝霜疫(peronophythora litchi chen et al.)是目前荔枝生產(chǎn)上的重要病害之一"刀, 嚴重影響荔枝品質(zhì)、產(chǎn)量以及鮮杲的貯運和外銷。發(fā)病初期果皮表而出現(xiàn)褐色或黑色的不規(guī) 則病斑，后來迅速擴展蔓延至全果變黑，果肉腐爛，有酸味和酒味，并流出褐色汁液，病害 發(fā)生至中后期，病部表而長出h色霜每狀物。葉片受害后岀現(xiàn)褪綠斑塊，以示病斑擴人成為 不規(guī)則的黃綠色斑塊；空氣濕度大時，病部會長出白色霜雷狀物叫 該病在廣東、廣西、福 建、海南、臺灣均有發(fā)生，不僅嚴重危害接近成熟的果實，也危害嫩梢、葉片、花穗、結(jié)果 小枝、果柄及幼果，引起大量

2、落花、落果、裂果和爛果，產(chǎn)量損失可達30%80%*譏 木 文對荔枝霜疫霉病原菌的生物學特性的研究為有效地防治病害、降低產(chǎn)量損失等提供理論依 據(jù)。1材料和方法1.1病原來源從海南省澄邊縣永發(fā)鎮(zhèn)采集荔枝霜疫霉病病果，組織分離獲得菌株，進行單砲分離純化 菌種并將純化后的菌種保存在pda斜血上待用o1.2病原菌致病性測定無菌條件下，將菌餅接種到健康無病的荔枝葉片，保濕24h,設接種淸水為對照，蟲復 3次。1.3病原菌的分離鑒定及培養(yǎng)性狀27 °c下在pda平板上對病菌純化培養(yǎng)，對菌落形態(tài)特征和病原菌形態(tài)特征進行觀測及 記錄。1.4病原菌牛物學特性測定1.4.1溫度對菌絲生長的影響將菌餅移至p

3、da平板中央，分別置于5 °c、10 °c、15 °c、20 °c、25 °c、27 °c、30 °c 和35 °c共8個梯度的恒溫培養(yǎng)箱屮培養(yǎng)4d和7 d后，測量菌落的直徑。每處理3個平板, 重復3次(下同)。1.4.2 ph對菌絲牛氏的影響用1 mol/l的hc1和naoh調(diào)節(jié)pda培養(yǎng)基的ph值，使z分別為3、4、5、6、7、8、 9、10、11和12共10個梯度。將菌餅移至ph梯度培養(yǎng)基平板中央，27 °c的恒溫箱中培養(yǎng) 4d和7d后，測量菌落的直徑。1.4.3碳源対菌絲生長的影響用等量的蔗糖、麥

4、芽糖、乳糖、山梨醇、甘露醇、d果糖、d半乳糖、可溶性淀粉、 甘汕和l阿拉伯糖共10種碳源分別與pda培養(yǎng)棊中的葡萄糖等量置換，配制成不同碳源 的培養(yǎng)基，將菌餅接種在培養(yǎng)基平板中央，置27 °c的恒溫箱中，培養(yǎng)4d和7d后，測量菌 落的直徑。1.4.4氮源對菌絲生長的影響用等量的片氨酸、酵母浸膏、l組氨酸、草氨酸、硝酸鞍、硫酸鞍、氯化鞍、牛肉浸膏、 蛋白淼和尿素共10種氮源分別與czapek培養(yǎng)基中硝酸鈉等量置換，配成不同氮源的培養(yǎng)基。 將菌餅移至培養(yǎng)基平板中央，置t 27 °c的恒溫箱中，培養(yǎng)4d和7d后，測量菌落的直徑。 1.4.5光照對菌絲生長的影響將菌餅移至pda平板

5、中央，置于完全黑暗、12 h光暗交替和完全光照3個處理條件下, 于27 °c恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 d和7 d后，測量菌落的直徑。1.4.6致死溫度和時間的測定于45 °c、50 °c、55 °c、60 °c、恒溫水浴鍋中的試管內(nèi)加入1 ml砲子懸浮液，處理5 min、 10 min、15 min、20 min、25 min 30 min后迅速冷卻,將砲子懸浮液滴于載玻片上保濕培 養(yǎng)12 h后觀察，鏡檢孑包子萌發(fā)情況。2結(jié)果和分析2.1致病性測定結(jié)果通過對致病性測定觀察可見，在健廉的荔枝果上產(chǎn)生了明顯的病原菌菌絲，取其病原菌 在顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)病

6、原菌原分離培養(yǎng)的荔枝霜疫霉菌菌落、抱囊梗、砲子囊相同，根 據(jù)柯氏法則，確定了該病菌對荔枝的致病性。如圖1圖1荔枝霜疫霉菌病原菌接種健康果和葉產(chǎn)生的病癥2.2病原菌的分離鑒定及培養(yǎng)性狀菌落形態(tài)：pda平板上菌落突起，高12mm,菌絲絮狀，白色質(zhì)密，邊緣整齊（如圖病原菌形態(tài)：抱囊梗直立，雙分義銳如分枝，前端逐漸變細；砲子囊檸檬形、橢惻形,無色至淡褐色，頂端有明顯的乳突，可直接萌發(fā)或間接萌發(fā)，直接萌發(fā)產(chǎn)生芽管，間接萌發(fā) 產(chǎn)生游動抱子，一個抱子囊可產(chǎn)生514個游動他子，多為68個；游動他子腎臟形，側(cè) 生雙鞭毛。根據(jù)觀測得到的病原菌形態(tài)特征，杳閱有關(guān)文獻后，可初步確定此菌為荔枝霜疫 霉菌®7。

7、菌落形態(tài)砲囊梗及砲子囊圖2荔枝霜沒霉病菌2.3溫度對菌絲牛長的影響菌絲在1030°c范圍內(nèi)均口j生長，適宜溫度為2030 °c,最適溫度為27 °c, 1015 °c 菌絲生長緩慢，5 °c和35 °c菌絲停止生長（見圖3）。6050菌落直徑/mm-»-4d菌落直徑407d菌落j1徑圖3溫度對荔枝霜疫寡菌絲牛長的影響fig.3 effect of temperature on mycelial growth of peronophythoraceae litchi2.4 ph對菌絲生長的影響菌絲在ph312均能生長，適宜ph

8、為48,最適ph為6, ph大于8吋，對菌絲生長有抑制作用，說明酸性條件適合菌絲生長（見圖4）50iw落直徑/mm1030207<1菌落立徑-»-4d歯落直徑1003456789101112ph值圖4 ph對荔枝霜疫霉菌絲生長的影響fig.4 effect of temperature on mycelial growth of peronophythoraceae litchi2.5碳源對菌絲生長的影響供試的11種碳源中都門j促進菌絲牛長。其中荔枝霜疫霉菌菌絲在可溶性淀粉、山梨酸 和片露醇為碳源的培養(yǎng)基上菌絲生長最快，與其它碳源達極顯著差異；而在以d-果糖為碳 源的培養(yǎng)基上牛

9、長最慢。（見表i）表1碳源對荔枝霜疫霉菌絲牛長的影響table 1 effect of carbon sources on mycelial growth of peronophythoraceae litchi碳源-菌落直徑/mm4d7d乳糖22.58cdd45.25cdd可溶性淀粉30.13aa55.95aa山梨酸27.08abb53.58ab廿嫁醇27.80abb54. 03aab麥芽糖22.33cdd44.13de蔗糖26.58bbc49.76bc葡萄糖24.58bcc46.58cdd-果糖8. 38ff30.03fgd-半乳糖21.30dd44.78cddei廠阿拉們糖15.60ee

10、36. 40ef片油24.53bcc48.83bc注：不同的大寫字母代表在1%的顯著性水平，不同小寫字母代表在5%的顯著性水平。note: different uppercases indicate significance at 1% level and different low ercases indicate significance at 5% level2.6氮源對菌絲牛長的影響供試的11種氮源屮，在草酸錢和尿素上不利于荔枝霜疫霍菌菌絲生長，其他氮源都可促進菌絲生長。其中，以酵母菌-膏為氮源的培養(yǎng)基上菌絲生長最快，與其它氮源達極顯著差異。（見表2）表2氮源對荔枝甫疫霉菌絲牛長的影響

11、table2 effect of nitrogen source on mycelial growth of f peronophythoraceae litchi氮源菌落直徑/mm4d7d氯化錢14.80cc24. 86i)d【廠組氨酸11.45dd22.10ee甘氨酸20.62bb40. 63bb硫酸錢9. 65ee16.45ff硝酸讓15.33cc25.38dd牛肉浸膏12.70dd22.90ee硝酸鈉11.93dd25.38dd酵母菌膏25.58aa46. 43aa蛋白豚19.35bb35.68bb草酸做0. ooff0. ooff尿素0. ooff0. ooff注：不同的人寫字母代表

12、在1%的顯著性水平，不同小寫字母代表在5%的顯著性水平。note: different uppercases indicate significance at 1% level and different low creases indicate significance at 5% level2.7光照對菌絲生長的影響試驗結(jié)果表明病原菌菌絲在完全光照、光暗交替各12 h及完全黑暗這3種處理下，三者之間的差異極顯著，其中光暗交替有利于菌絲生長。（見表3）表3不同光照對荔枝霜疫霉菌絲生長的影響table3 effect of light on mycelial growth of peronop

13、hythoraceae litchi不同光照菌落直徑/mm4d7d全光照24. 5cc51.75cc光暗交替31aa59aa28.75bb56.25bb注：不同的人寫字母代表在1%的顯著性水平，不同小寫字母代表在5%的顯著性水平。note: different uppercases indicate significance at 1% level and different low creases indicate significance at 5% level2.8致死溫度和時間測定試驗結(jié)杲表明荔枝霜疫霉菌游動砲子的致死溫度和時間為45 °c 30m in, 50 °c 30m in 和 55 °c 5m in。3結(jié)論與討論結(jié)果表明，菌絲生長的適宜溫度是2030 °c,最適溫度為27 °c；適宜ph值為48, 最適ph值均為6；以可溶性淀粉、山梨酸和甘露醇為碳源有利于病原菌的牛長；以酵母菌 膏為氮源