轉(zhuǎn)基因技術(shù)在大豆抗病毒育種中的應(yīng)用研究進展

1、轉(zhuǎn)基因技術(shù)在大豆抗病毒育種中的應(yīng)用研究進展􀀁 􀀁 摘要: 介紹了大豆遺傳轉(zhuǎn)化的再生系統(tǒng)、遺傳轉(zhuǎn)化的研究方法以及大豆抗病毒基因工程的主要成果。􀀁 􀀁 關(guān)鍵詞: 大豆; 基因工程; 抗病毒病; 育種􀀁 􀀁 􀀁 􀀁 大豆病毒病在我國各大豆產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生, 已成為影響大豆產(chǎn)量和品質(zhì)的重要病害。對于病毒病的防治, 傳統(tǒng)的方法都具有其局限性, 收效甚微。培育抗病毒的品種是防治病毒病最經(jīng)濟有效的方法。然而, 由于作物的抗性資源有限、育種周期長、抗性容易退化等原因, 利

2、用常規(guī)育種手段進行大豆抗病毒育種難度很大。1986 年P(guān)owe ll 等將煙草花葉病毒( TMV) 的外殼蛋白基因?qū)霟煵? 獲得第1 例抗TMV 轉(zhuǎn)基因植株。自此之后, 植物抗病毒基因工程獲得迅速發(fā)展,已成為解決植物病毒病的主要手段之一。通過轉(zhuǎn)基因培育的大豆新品種是較早用于商品化生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因作物之一。1988年, M cCa等 和H inchee等分別用基因槍轟擊未成熟胚生長點和用農(nóng)桿菌侵染子葉節(jié)的方法獲得大豆轉(zhuǎn)基因植株。此后, 研究者們紛紛加入這一領(lǐng)域的競爭, 并且成果紛呈, 利用基因工程手段創(chuàng)造和培育了多種不同類型的大豆新品種與種質(zhì)資源。本文就轉(zhuǎn)基因技術(shù)在大豆抗病毒育種中的研究進展作一綜

3、述。1􀀁 大豆遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)1. 1􀀁 大豆遺傳轉(zhuǎn)化的受體系統(tǒng)目前大豆遺傳轉(zhuǎn)化的再生體系主要有不定芽器官發(fā)生系統(tǒng)、體細(xì)胞胚胎發(fā)生系統(tǒng)和原生質(zhì)體再生系統(tǒng), 其中, 以不定芽器官發(fā)生途徑中的大豆子葉節(jié)再生體系的應(yīng)用最為成熟。1. 1. 1􀀁 不定芽器官發(fā)生再生系統(tǒng)􀀁 大豆不定芽器官發(fā)生體系所用的外植體包括無菌苗子葉節(jié)、未成熟種子的子葉和莖尖、無菌苗上胚軸、幼胚和小真葉等。不定芽器官發(fā)生系統(tǒng)中, 外植體內(nèi)已存在的分生組織和有分化潛力的表皮、亞表皮細(xì)胞都可作為遺傳轉(zhuǎn)化的靶組織。目前, 大豆子葉節(jié)不定芽器官發(fā)生體系已經(jīng)被公認(rèn)為是較成熟

4、、易行的大豆再生體系。周思君等通過大豆幼胚培養(yǎng)誘導(dǎo)器官發(fā)生, 獲得了較高頻率的再生植株。以大豆上胚軸、下胚軸、幼胚和小真葉為外植體, 較高頻率地誘導(dǎo)出再生植株。但不同基因型由于遺傳和生理差異, 誘導(dǎo)植株再生效果不同。劉博林等從大豆幼胚中誘導(dǎo)形成體細(xì)胞胚胎愈傷組織并分化成苗, 建立了一套再生頻率較高的大豆植株再生方法。以子葉節(jié)為代表的大豆不定芽再生體系的優(yōu)點是: ( 1)再生時間短, 通常1 3個月就可獲得生根的再生植株; ( 2)外植體容易獲得, 不受季節(jié)限制; ( 3)再生過程簡單, 只需愈傷組織誘導(dǎo)、叢生芽分化培養(yǎng)、芽伸長及生根培養(yǎng)幾個步驟;( 4)再生頻率高。但是該再生系統(tǒng)最大的缺點是不

5、定芽多數(shù)為多細(xì)胞起源, 轉(zhuǎn)化后一般為嵌合體, 純化、篩選的難度較大。另外, 不定芽再生系統(tǒng)也存在外植體較大, 以及外植體本身抗性對于轉(zhuǎn)化后的篩選工作不利等缺點。1. 1. 2􀀁 體細(xì)胞胚胎發(fā)生再生系統(tǒng)􀀁 誘導(dǎo)外植體胚胎發(fā)生, 形成體細(xì)胞胚, 胚萌發(fā)發(fā)育成為完整植株, 這種再生方式稱為胚胎發(fā)生途徑。1983年Chr istianson等以未成熟胚的胚軸為材料, 用改良的MS培養(yǎng)基附加2, 4- 滴誘導(dǎo)出體細(xì)胞胚胎的發(fā)生。1986年Barw a le 等報道了通過體細(xì)胞胚獲得植株再生, 大豆體細(xì)胞胚胎再生體系獲得了初步成功。Finer等對體細(xì)胞胚胎發(fā)生體系做了進

6、一步改進9。Pa rrott等首先采用這一體系進行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆遺傳轉(zhuǎn)化。采用胚性細(xì)胞團作為外植體, 由于其位于表面, 且能在很多位置形成體細(xì)胞胚, 因此轉(zhuǎn)化篩選都很容易。王曉春等用球形期的體細(xì)胞胚作為轉(zhuǎn)基因的受體用于轉(zhuǎn)化, 結(jié)果表明體細(xì)胞胚團有很高的轉(zhuǎn)化率(為8. 0% ), 而發(fā)育晚期的子葉胚很難誘導(dǎo)出抗性體細(xì)胞胚, 轉(zhuǎn)化率為0。大豆體細(xì)胞胚胎發(fā)生再生系統(tǒng)是目前大豆再生系統(tǒng)研究的一個重要部分, 該再生系統(tǒng)有3 個顯著的優(yōu)點 : ( 1)在1個培養(yǎng)物上所能產(chǎn)生的胚狀體數(shù)目一般比不定芽數(shù)目多;( 2)胚狀體形成速度快; ( 3)胚狀體結(jié)構(gòu)完整。但是體細(xì)胞胚胎發(fā)生再生系統(tǒng)也存在部分后代不育、傳

7、代時間長、再生植株常出現(xiàn)變異等問題, 仍然需要進一步優(yōu)化。1. 1. 3􀀁 原生質(zhì)體再生系統(tǒng)􀀁 原生質(zhì)體是基因轉(zhuǎn)移的理想再生體系。在特定條件下, 外露使原生質(zhì)膜確保DNA接觸并進入原生質(zhì)體。該方法不需要任何一種生物載體, 而且DNA吸收是直接物理過程, 從而避免了宿主范圍問題。1988年W e i等報道了大豆原生質(zhì)體再生系統(tǒng), 獲得愈傷組織, 經(jīng)誘導(dǎo)成苗, 得到了再生植株。Dhr i等 和張賢澤等 對不同的大豆品種進行了試驗, 也獲得了大豆原生質(zhì)體再生植株。與不定芽器官發(fā)生途徑和體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑相比, 原生質(zhì)體再生體系具有容易攝取外源遺傳物質(zhì)的優(yōu)點, 從理

8、論上講克服了大豆遺傳轉(zhuǎn)化嵌合體現(xiàn)象。但是實踐證明, 獲得大豆原生質(zhì)體再生植株十分困難, 由于此系統(tǒng)存在操作復(fù)雜、工作量大、不易成功、培養(yǎng)周期過長和容易產(chǎn)生變異等缺點, 所以應(yīng)用并不廣泛。1. 2􀀁 大豆遺傳轉(zhuǎn)化的主要方法1. 2. 1􀀁 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法􀀁 農(nóng)桿菌是普遍存在于土壤中的革蘭氏陰性細(xì)菌, 它能在自然條件下趨化性地感染大多數(shù)雙子葉植物的受傷部位, 并誘導(dǎo)產(chǎn)生冠癭瘤或發(fā)狀根。它對寄主細(xì)胞的轉(zhuǎn)化是借助誘導(dǎo)瘤細(xì)胞質(zhì)粒( T i)或根誘導(dǎo)質(zhì)粒( R i), 將其中一段特定的DNA片斷轉(zhuǎn)入寄主細(xì)胞基因組的過程。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化的機理是利用分

9、子克隆技術(shù)在農(nóng)桿菌的T i質(zhì)粒(或R i質(zhì)粒)中的T - DNA 區(qū)域插入擬轉(zhuǎn)基因, 通過農(nóng)桿菌的感染將所帶的T - DNA導(dǎo)入植物細(xì)胞, 并將擬轉(zhuǎn)基因整合進植物基因組, 引起相應(yīng)的植物細(xì)胞可遺傳的變異。目前, 人們已經(jīng)成功地構(gòu)建了多種能應(yīng)用于植物基因轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌T i質(zhì)粒載體系統(tǒng)。H inchee等首次用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得大豆轉(zhuǎn)基因植株 , 此后, 轉(zhuǎn)基因大豆成果紛呈, 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法也成為進行大豆遺傳轉(zhuǎn)化的最主要方法之一。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進行大豆遺傳轉(zhuǎn)化的代表性成果有: Parrott等用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法侵染大豆的未成熟子葉, 獲得了轉(zhuǎn)基因大豆植株 。王慧中等用農(nóng)桿菌感染大豆頂芽, 選擇出抗性愈傷

10、組織, 并分化出抗性芽, 經(jīng)生化檢測其中含有冠癭堿。傅桂榮等用含有GUS -p t- NOS 融合基因的根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化大豆的萌動種胚, 獲得轉(zhuǎn)化大豆苗。徐香玲等用農(nóng)桿菌T i質(zhì)粒介導(dǎo)法將內(nèi)毒素基因轉(zhuǎn)入東北大豆黑農(nóng)37、黑農(nóng)39 等品種, 從其胚軸與子葉誘導(dǎo)出芽并再生成植株, 經(jīng)篩選檢測, 證明外源基因轉(zhuǎn)入并穩(wěn)定整合到大豆核基因組中。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆轉(zhuǎn)化的效率受到大豆基因型、組織培養(yǎng)條件、農(nóng)桿菌菌株感染轉(zhuǎn)化能力、T - DNA 的轉(zhuǎn)移效率和轉(zhuǎn)化后的篩選模式等多種因素的影響。優(yōu)化遺傳轉(zhuǎn)化體系、提高其轉(zhuǎn)化效率的研究工作一直在進行中。1. 2. 2􀀁 基因槍法􀀁 基

11、因槍法也叫微彈轟擊法, 是最有希望的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)之一。在這項技術(shù)中, DNA 吸附在微載體(鎢粉或金粉粒子)表面, 然后以高壓氣體或高壓放電為動力, 金屬微粒被射入受體植物細(xì)胞, 實施轉(zhuǎn)化?；驑尫ㄗ钤缬擅绹鳦ome ll大學(xué)的Sanfo rd等提出。獲得轉(zhuǎn)基因大豆的首例報道在1988年, M cCa等用基因槍轟擊芽生長點, 誘導(dǎo)芽分生組織形成叢生不定芽后再生成完整植株。該技術(shù)主要以大豆幼胚的胚軸、莖尖、胚性懸浮細(xì)胞和未成熟胚莖尖為轉(zhuǎn)化受體, 通過潮霉素篩選轉(zhuǎn)化植株?；驑屴D(zhuǎn)化法的優(yōu)點是: ( 1)不受基因型的限制; ( 2)產(chǎn)生的微創(chuàng)有利于基因轉(zhuǎn)移, 因而具有較高的轉(zhuǎn)化率; ( 3)能夠轉(zhuǎn)移

12、多拷貝的重組DNA 或DNA 片段。其缺點是比農(nóng)桿菌介導(dǎo)法耗資大, 技術(shù)難, 在植物基因組中拷貝數(shù)高, 易引起基因沉默等。1. 2. 3􀀁 花粉管通道法􀀁 將含目的基因的DNA放到授粉后不久經(jīng)切割的花柱上, DNA沿著花粉管到達胚珠, 并進一步整合到胚珠的基因組中, 當(dāng)攜帶外源基因的受精卵發(fā)育成植株時, 即獲得了轉(zhuǎn)基因植物, 這就是花粉管通道介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化。利用花粉管通道法導(dǎo)入外源基因的方法有子房和胚囊微注射法、柱頭滴加法、花粉粒攜帶法和生殖細(xì)胞浸泡法等?；ǚ酃芡ǖ婪ㄊ状斡糜谵D(zhuǎn)化水稻, 后來也用于轉(zhuǎn)化其他作物。雷勃鈞等最早在大豆上應(yīng)用花粉管通道技術(shù)進行轉(zhuǎn)基因研究

13、, 此后我國許多學(xué)者相繼開展了這方面的研究, 并育成了抗病豐產(chǎn)品系。花粉管通道法雖然簡便易行, 但存在需要育種工作者摸索具體的外源DNA 導(dǎo)入時間、方法及后代選擇等問題。2􀀁 大豆抗病毒基因工程自1986年首次獲得抗TMV 的煙草植株以來, 科技工作者提出了多種獲得抗病毒轉(zhuǎn)基因植物策略。這些策略包括外殼蛋白基因介導(dǎo)的抗性、復(fù)制酶介導(dǎo)的抗性、病毒運動蛋白介導(dǎo)的抗性、利用病毒反義RNA介導(dǎo)病毒抗性、利用缺陷干擾性分子介導(dǎo)病毒抗性、RNA介導(dǎo)的抗性及利用病毒弱毒株完整基因組介導(dǎo)病毒抗性等。轉(zhuǎn)入外殼蛋白基因獲得對病毒的抗性是成功應(yīng)用于大豆的抗病毒策略之一。徐香玲等用農(nóng)桿菌pRiA4b

14、轉(zhuǎn)化大豆子葉節(jié)、胚軸、幼胚和整株, 均獲得毛狀根, 進而再生出植株, PCR 和Southern檢測證明大豆花葉病毒( SMV) 外殼蛋白基因已整合到大豆基因組中。D i等用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將豆莢斑點病毒( BPMV)外殼蛋白前導(dǎo)( BPM V- cp- p )基因轉(zhuǎn)入大豆子葉節(jié), 獲得了轉(zhuǎn)基因植株, 部分轉(zhuǎn)基因植株后代表現(xiàn)對BPMV 抗性。W ang等采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將大豆花葉病毒外殼蛋白基因?qū)氪蠖? 獲得3株轉(zhuǎn)基因植株, 其中1株成活。轉(zhuǎn)基因植株經(jīng)自交獲得4個株系。對T3 代的進一步研究表明: 4個株系中均檢測出外殼蛋白基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物, 3個株系中檢測出病毒外殼蛋白, 其中的2個株系對SMV

15、 具有高抗性。這是轉(zhuǎn)基因大豆抗性穩(wěn)定遺傳的首次報道。Srin ivasa等采用基因槍法將豆莢斑點病毒外殼蛋白前導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化大豆體細(xì)胞胚, 獲得轉(zhuǎn)基因植株。侵染試驗表明轉(zhuǎn)基因植株對BPMV 表現(xiàn)抗性, 并且抗性穩(wěn)定遺傳至T2 代。Northern和W estern雜交分析證明, BPMV- cp- p在細(xì)胞中高水平轉(zhuǎn)錄和翻譯。Furutan i等以大豆品種Jack 為試材, 通過基因槍法, 將SMV 減毒株的外殼蛋白基因轉(zhuǎn)入大豆體細(xì)胞胚, 獲得11個轉(zhuǎn)基因植株, 抗病毒分析表明, 其中的3個株系對大豆花葉病毒有高的抗性, W estern雜交在2個株系中檢測出轉(zhuǎn)基因表達產(chǎn)物 。RNA介導(dǎo)的抗性是應(yīng)

16、用于大豆抗病毒的另一成功策略。Furutan i等對獲得的高SMV 抗性轉(zhuǎn)基因大豆進行進一步研究, 認(rèn)為其中1個株系的SMV 抗性來源于RNA 沉默介導(dǎo)的抗性。Tougou等采用基因槍法先后將一對顛倒重復(fù)序列大豆矮化病毒外殼蛋白( SbDV - CP )基因和正義SbDV- CP基因?qū)氪蠖贵w細(xì)胞胚, 均獲得了穩(wěn)定遺傳的大豆矮化病高抗性轉(zhuǎn)基因株系, 后代分析表明植株對SbDV 的抗性源于RNA沉默介導(dǎo)的過程。2. 轉(zhuǎn)基因技術(shù)在大豆及其它作物育種中的應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在大豆上的應(yīng)用, 通常是用來改善大豆種子的成分, 比如積累亞麻酸或a生育酚, 去除大豆的過敏蛋白抗原 或去除植酸等。由于農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法

17、具有轉(zhuǎn)化效率相對較高、T.DNA 插入相對穩(wěn)定目的基因能夠穩(wěn)定表達、轉(zhuǎn)基因后代表型能恢復(fù)正常 等優(yōu)點, 因此, 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆高效轉(zhuǎn)化方法多有報道 , 使用hp t作為篩選標(biāo)記, 將大豆矮化病毒(SbDV)基因?qū)氪蠖? 得到了大豆矮化抗性的轉(zhuǎn)基因大豆。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化在其它作物中也得到了廣泛應(yīng)用。比如, 在提高棉花抗蟲方面: 表達2 個基因( B t + CpTI, B t + GNA, B t +sck ) 和3個基因的(B t + CpTI + GNA ) 轉(zhuǎn)基因棉花相繼報導(dǎo);將來自擬南芥的乙烯受體突變基因etr1.1轉(zhuǎn)入開花植物文心蘭和齒舌蘭中, 減少它們對外源乙烯的敏感性, 以

18、延長開花時間, 轉(zhuǎn)化效率達到1. 3% 2. 7% ; 利用廣泛種植的糧食作物來生產(chǎn)重組藥品有可能污染人類食物鏈, 用檀香胚性細(xì)胞懸浮系培養(yǎng)表達系統(tǒng)重組蛋白顯得非常重要, Shekhaw at首次通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的胚性細(xì)胞懸浮系將外源蛋白(g lucuron idase, 葡萄苷酸酶)在檀香中高水平穩(wěn)定表達.Po lin 首次將草酸氧化酶通過轉(zhuǎn)基因手段導(dǎo)入栗屬物種。在植物轉(zhuǎn)化中,根據(jù)所用受體類型, 轉(zhuǎn)基因方法可以分為三大類: 一、以外植體為受體的基因轉(zhuǎn)化方法, 包括農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、基因槍法、超聲波介導(dǎo)法; 二、以種質(zhì)系統(tǒng)為受體的基因轉(zhuǎn)化方法, 包括子房注射法、花粉管通道法; 三、以原生質(zhì)為受體的基

19、因轉(zhuǎn)化方法, 包括聚乙二醇法、電擊法、脂質(zhì)體法。其中, 以外植體為受體的轉(zhuǎn)化方法應(yīng)用較為廣泛, 由于原生質(zhì)體培養(yǎng)難度大、再生頻率低、而且再生植株的遺傳穩(wěn)定性差等缺陷, 因此以原生質(zhì)體為受體的基因轉(zhuǎn)化方法未被廣泛使用。另外, 起始于20世紀(jì)50 年代初的植物花藥培養(yǎng), 在許多作物尤其是油菜、大白菜等十字花科作物育種工作中占有重要地位, 花藥培養(yǎng)是獲得單倍體及純合體的有效途徑。20世紀(jì)60 年代在煙草、水稻、小麥、玉米等重要農(nóng)作物中都相繼獲得了單倍體植株。到目前為止, 中國已有40 多種植物用花藥培養(yǎng)方法獲得了花粉植株, 主要有大麥、小麥、玉米、水稻等, 但花藥培養(yǎng)在大豆上的研究卻很少。大豆花藥培

20、養(yǎng)最早由Ivers等 開展起來, 并首次建立了小孢子發(fā)育與小花特征相對應(yīng)的取材標(biāo)準(zhǔn), 認(rèn)為長度2. 5 mm 的小花是分離花藥的合適材料, 此時30%的花藥處于四分體后期, 70%的花藥處于單核期, 但只獲得了體細(xì)胞愈傷組織。母秋華等誘導(dǎo)出了花藥愈傷組織, 但沒有分化出芽。簡玉瑜等 42.43 和尹光初等分別對B5培養(yǎng)基進行了研究改良, 在此基礎(chǔ)上愈傷組織誘導(dǎo)率有了較多提高, 并分化出了少量綠芽和幾棵再生植株。劉德璞等首次嘗試了利用花粉培養(yǎng)并誘導(dǎo)出了單倍性的愈傷組織; 葉興國等, 經(jīng)過染色體觀察, 開始產(chǎn)生的愈傷組織大多為體細(xì)胞愈傷組織, 染色體數(shù)2n= 40條, 淡黃色、結(jié)構(gòu)松散、形狀不規(guī)則

21、、增殖較快;30 d后產(chǎn)生的愈傷組織大多為單倍體愈傷組織, 染色體數(shù)2n= 14 26 條, 乳白色、結(jié)構(gòu)致密、形狀似球、增殖較慢。花藥培養(yǎng)作為一種育種手段已在許多作物上取得了成功, 但是近十多年來, 關(guān)于大豆花藥培養(yǎng)方面的研究很少, 如果能將這項技術(shù)成功應(yīng)用于大豆, 將會加速大豆新品種的選育過程, 縮短育種年限和提高育種效率。建立一個高效穩(wěn)定的大豆轉(zhuǎn)化體系, 是許多致力于大豆遺傳改良的科學(xué)家深入研究的課題之一。關(guān)于大豆遺傳轉(zhuǎn)化在不同的DNA 輸送方法和采用不同受體材料方面有諸多報道, 包括: 基因槍法配合莖頂端分生組織、胚性細(xì)胞懸浮系、根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的子葉節(jié), 盡管各種方法都取得了一定的成就

22、, 但具體到每一種方法在時間、成本和轉(zhuǎn)化效率方面都有各自的缺陷。水稻細(xì)胞懸浮培養(yǎng)結(jié)合超聲波方法進行轉(zhuǎn)化的成功應(yīng)用, 為大豆通過懸浮細(xì)胞培養(yǎng)進行轉(zhuǎn)化提供了借鑒, 該方法的優(yōu)點在于操作簡便、啟動成本低、具有擴大規(guī)模的潛力; Kha lafa llaMM 通過比較超聲波微創(chuàng)法(WSS )和基因槍法轉(zhuǎn)化大豆的轉(zhuǎn)化效率, 得到的結(jié)論是W SS轉(zhuǎn)化效率較高, 因此, 超聲波微創(chuàng)法可望成為大豆轉(zhuǎn)化的另一個有效的方法。3􀀁 結(jié)語雖然抗病毒基因工程取得了巨大的進步, 許多重要作物也以轉(zhuǎn)基因為手段獲得了抗病毒植株, 并且培育出抗病毒新品種。但是大豆抗病毒基因工程進展還是非常緩慢, 至今只有幾例成功的報道, 而且未見通過基因工程培育的抗病毒大豆品種在實踐中應(yīng)用的報道?？共《巨D(zhuǎn)基因大豆的研究任重道遠(yuǎn), 仍然需要在優(yōu)化受體系統(tǒng)、提高轉(zhuǎn)化率、培育穩(wěn)定遺傳的種質(zhì)等方面做大量的工作。參考文獻: 1 Powell- Abel P, Nelson R S, De B, et a.l D elay of disease develop􀀁men t in transgen ic plan ts th at express the tob acco mosa ic v iru s coatp rotein