實(shí)驗(yàn)一質(zhì)粒DNA的提取及檢測(cè)學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)(shyn)一質(zhì)粒一質(zhì)粒DNA的提取及檢測(cè)的提取及檢測(cè)第一頁(yè)，共32頁(yè)。第1頁(yè)/共31頁(yè)第二頁(yè)，共32頁(yè)。第2頁(yè)/共31頁(yè)第三頁(yè)，共32頁(yè)。第3頁(yè)/共31頁(yè)第四頁(yè)，共32頁(yè)。第4頁(yè)/共31頁(yè)第五頁(yè)，共32頁(yè)。的分離的分離n質(zhì)粒質(zhì)粒DNA的純化的純化第5頁(yè)/共31頁(yè)第六頁(yè)，共32頁(yè)。第6頁(yè)/共31頁(yè)第七頁(yè)，共32頁(yè)。第7頁(yè)/共31頁(yè)第八頁(yè)，共32頁(yè)。第8頁(yè)/共31頁(yè)第九頁(yè)，共32頁(yè)。第9頁(yè)/共31頁(yè)第十頁(yè)，共32頁(yè)。第10頁(yè)/共31頁(yè)第十一頁(yè)，共32頁(yè)。第11頁(yè)/共31頁(yè)第十二頁(yè)，共32頁(yè)。第12頁(yè)/共31頁(yè)第十三頁(yè)，共32頁(yè)。特點(diǎn)：小量質(zhì)粒制備、最簡(jiǎn)便、快捷特點(diǎn)：小量質(zhì)粒制備、

2、最簡(jiǎn)便、快捷應(yīng)用應(yīng)用(yngyng)：質(zhì)粒酶切鑒定、克隆（粗提）：質(zhì)粒酶切鑒定、克隆（粗提） 測(cè)序、轉(zhuǎn)染（細(xì)提）測(cè)序、轉(zhuǎn)染（細(xì)提）質(zhì)粒提取質(zhì)粒提取(tq)試劑盒試劑盒常用常用(chn yn)方法：小量堿裂解法方法：小量堿裂解法滿足不同需要的試劑盒滿足不同需要的試劑盒純化原理：離子交換柱層析等純化原理：離子交換柱層析等小量制備質(zhì)粒小量制備質(zhì)粒kit大量制備質(zhì)粒大量制備質(zhì)粒kit去除內(nèi)毒素制備質(zhì)粒去除內(nèi)毒素制備質(zhì)粒kit可用于大部分分生實(shí)驗(yàn)可用于大部分分生實(shí)驗(yàn)第13頁(yè)/共31頁(yè)第十四頁(yè)，共32頁(yè)。第14頁(yè)/共31頁(yè)第十五頁(yè)，共32頁(yè)。加入加入150uL150uL溶液溶液IIIIII（輕輕混勻），冰

3、上靜置（輕輕混勻），冰上靜置15min15min質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA復(fù)性復(fù)性12000rpm12000rpm，離心，離心15min15min，取上清記錄，取上清記錄(jl)(jl)體積到一新管體積到一新管上清加等體積的酚：氯仿（振蕩混勻）上清加等體積的酚：氯仿（振蕩混勻）12000rpm12000rpm，離心，離心15min15min，取上清記錄，取上清記錄(jl)(jl)體積到一新管體積到一新管第15頁(yè)/共31頁(yè)第十六頁(yè)，共32頁(yè)。上清加上清加2 2倍體積的無(wú)水乙醇（充分混勻），冰浴倍體積的無(wú)水乙醇（充分混勻），冰浴 30min 30min12000rpm12000rpm，離心，離心15mi

4、n15min沉淀沉淀(chndin)(chndin)用用75%75%乙醇乙醇1mL1mL洗滌兩次（輕彈混勻、離心）洗滌兩次（輕彈混勻、離心）12000rpm12000rpm，離心，離心10min10min晾干沉淀晾干沉淀(chndin)(chndin)沉淀沉淀(chndin)(chndin)用用20ul TE20ul TE溶解溶解沉淀法沉淀法第16頁(yè)/共31頁(yè)第十七頁(yè)，共32頁(yè)。吸附管用吸附管用BL 500ulBL 500ul平衡平衡取上清加入吸附管取上清加入吸附管5000rpm 5000rpm 離心離心5min5min加加PWPW漂洗液漂洗液500ul500ul，放置，放置2min2min1

5、0000rpm 10000rpm 離心離心5min5min，晾干，晾干加加30ul TE30ul TE，10000rpm 10000rpm 離心離心5min5min（收集（收集(shuj)(shuj)到干凈的到干凈的EPEP管中）管中）吸附吸附(xf)法法第17頁(yè)/共31頁(yè)第十八頁(yè)，共32頁(yè)。第18頁(yè)/共31頁(yè)第十九頁(yè)，共32頁(yè)。第19頁(yè)/共31頁(yè)第二十頁(yè)，共32頁(yè)。第20頁(yè)/共31頁(yè)第二十一頁(yè)，共32頁(yè)。第21頁(yè)/共31頁(yè)第二十二頁(yè)，共32頁(yè)。第22頁(yè)/共31頁(yè)第二十三頁(yè)，共32頁(yè)。第23頁(yè)/共31頁(yè)第二十四頁(yè)，共32頁(yè)。第24頁(yè)/共31頁(yè)第二十五頁(yè)，共32頁(yè)。質(zhì)粒的電泳質(zhì)粒的電泳(din

6、yn)質(zhì)粒質(zhì)粒DNA的的3種形式種形式(xngsh)泳動(dòng)速度泳動(dòng)速度:超螺旋超螺旋線性線性開(kāi)環(huán)開(kāi)環(huán) 質(zhì)粒DNA的存在形式有3種:1、共價(jià)閉環(huán)DNA:常以超螺旋形式存在 2、開(kāi)環(huán)DNA:質(zhì)粒DNA兩條鏈中有一條發(fā)生一處或多處斷裂，因此可以自由旋轉(zhuǎn)從而(cng r)消除張力,形成松弛的環(huán)狀分子 3、線性DNA:因質(zhì)粒DNA的兩條鏈在同一處斷裂而造成.開(kāi)環(huán)開(kāi)環(huán)超螺旋超螺旋線性線性第25頁(yè)/共31頁(yè)第二十六頁(yè)，共32頁(yè)。第26頁(yè)/共31頁(yè)第二十七頁(yè)，共32頁(yè)。第27頁(yè)/共31頁(yè)第二十八頁(yè)，共32頁(yè)。第28頁(yè)/共31頁(yè)第二十九頁(yè)，共32頁(yè)。第29頁(yè)/共31頁(yè)第三十頁(yè)，共32頁(yè)。第30頁(yè)/共31頁(yè)第三十一頁(yè)，共32頁(yè)。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)會(huì)計(jì)學(xué)。質(zhì)粒的復(fù)制：嚴(yán)緊型復(fù)制（1n個(gè)）。第1頁(yè)/共31頁(yè)。第4頁(yè)/共31頁(yè)。學(xué)習(xí)和掌握質(zhì)粒提取的方法和技術(shù)。RNA酶（降解RNA）。取 ml菌液入ml的離心管中。15TBE儲(chǔ)液(pH8.0